亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌的耐藥基因分析

王紅,季莉莉,劉輝,李宏峰（天津市中醫藥研究院附屬醫院,天津 300120）

亞胺培南是臨床常用的對鮑曼不動桿菌具有抗菌活性的和高度化學穩定性的硫霉素類抗生素，但近年來亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌菌株呈漸升趨勢，成為了臨床治療的挑戰[1]。本研究通過檢測分析亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌的耐藥基因，以期為臨床合理的抗感染治療和控制醫院內感染提供一些依據。

1 材料與方法

1.1菌株來源 選取2021年5月-2022年5月從我院患者中分離出來的已剔除從同一患者中分離出來重復株的25株亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌作為試驗對象，標本來源為痰、咽拭子、分泌物、尿、血液和胸腹水等。

1.2儀器與試劑 亞胺培南、美羅培南、哌拉西林、氨芐西林/舒巴坦、頭孢他啶、頭孢吡肟、左氧氟沙星、阿米卡星、復方新諾明等藥物購于賽默飛世爾科技中國有限公司；細菌鑒定及藥敏卡片和VITEK-2全自動生化鑒定系統購自法國梅里埃公司；細菌恒溫恒濕培養箱購自上海博訊實業有限公司；低速離心機購自上海盧湘儀離心機儀器有限公司；多聚酶鏈反應（PCR）基因擴增儀購自賽默飛世爾科技有限公司；電泳儀和凝膠成像系統購自美國伯樂公司；PCR試劑盒購自日本TAKARA BIO株式會社；PCR引物委托上海英濰捷基公司合成。

1.3方法

1.3.1細菌鑒定及藥敏試驗 采用法國梅里埃GN67和XN04藥敏卡對分離菌株進行鑒定和藥敏試驗，結果判斷標準根據2021年美國臨床實驗室標準化委員會（CLSI）制定的藥敏判斷折點，耐藥菌株判斷標準為顯示亞胺培南最低抑菌濃度（MIC）≥16ug/mL。質控菌株為大腸埃希菌ATCC 25922和銅綠假單胞菌ATCC 27853。

1.3.2耐藥基因檢測 細菌DNA提取方法為煮沸法，耐藥基因檢測方法為PCR法。耐藥基因引物序列參照參考文獻[2-3]設計，見表1。PCR擴增反應體系為20uL，反應條件為：預變性條件為94℃、5min，變性條件為94℃、1min，復性條件為55℃、35s，延伸條件為72℃、10min。PCR引物在進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳后的特異性擴增條帶觀察用凝膠成像儀，最終基因測序結果比對在Genbank上進行相對應序列比對。

表1 耐藥基因引物設計序列

2 結果

2.1抗菌藥物敏感性試驗結果 25株亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌中，對亞胺培南、美羅培南、哌拉西林、氨芐西林/舒巴坦、頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢唑林、頭孢曲松、左氧氟沙星和阿米卡星等藥物均耐藥，有20株（80.00%，20/25）對復方新諾明敏感，見表2。

表2 25株亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌抗菌藥物敏感性試驗結果

2.2碳青霉烯酶耐藥基因檢測結果 25株（100.00%，25/25）亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌均檢測出的碳青霉烯酶耐藥基因為OXA-23和OXA-51，IMP-1、VIM-2、KPC、NDM-1、OXA-24、OXA-50和OXA-58基因均未檢出。

2.3氨基糖苷類及耐消毒劑相關基因檢測結果 24株（96.00%，24/25）亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌均檢測出氨基糖苷類耐藥基因ant(3'') -Ⅰ、aac(6') -Ⅰ和armA，有17株（68.00%，17/25）檢測出耐消毒劑相關基因qacE△1。

3 討論

鮑曼不動桿菌是一種易于生存、對營養要求不高和易在體內定植的革蘭陰性短桿菌，是引發呼吸道感染、血源性感染和院內感染的重要機會致病菌，但其耐藥率的增加成為了患者尤其是重癥患者的棘手治療問題[4-5]。本研究收集的25株亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌除對復方新諾明較敏感外，對其他抗菌藥物均耐藥，表明鮑曼不動桿菌對碳青霉烯酶類、氨基糖苷類、氟喹諾酮類等抗生素均具較高耐藥率，而復方新諾明因其肝腎毒副作用較大而應用受限，故探討亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌耐藥機制對研發新的藥物和控制感染具有重要意義。

本研究發現，25株（100.00%，25/25）亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌，碳青霉烯酶耐藥基因OXA-23和OXA-51的檢出率為100%，氨基糖苷類耐藥基因ant(3'')-Ⅰ,aac (6')-Ⅰ和armA的檢出率為96.00%，耐消毒劑相關基因qacE△1為68.00%，與既往孫啟山[6]、姜梅杰[2]等人的研究結果相一致，表明當鮑曼不動桿菌發生亞胺培南耐藥時，往往也在同時對大多數其他抗菌藥物產生了廣泛耐藥，且消毒劑在臨床的應用也成為了鮑曼不動桿菌發生耐藥的原因之一，提示應當注重抗菌藥物和消毒劑的合理使用及制定有效避免交叉感染的措施。

綜上所述，本院分離自臨床標本的亞胺培南耐藥鮑曼不動桿菌耐藥機制與碳青霉烯酶耐藥基因OXA-23、OXA-51和氨基糖苷類耐藥基因ant(3'')-Ⅰ,aac (6')-Ⅰ、armA及耐消毒劑相關基因qacE△1有關，應當加強臨床院內感染針對性措施的制定。