妊娠期糖尿病患者胎盤組織miR-20、miR-192表達情況及其與新生兒窒息的關系▲

姚偉妍 唐 娟 曾妤平

(惠州衛生職業技術學院護理學院1 婦產科教研室，2 內科教研室，廣東省惠州市 516000)

妊娠期糖尿病是一種常見的妊娠并發癥，在我國妊娠女性中發病率為6%～10%，且有逐年上升的趨勢[1]。妊娠期糖尿病會導致胎兒慢性宮內缺氧，引發新生兒窒息，增加新生兒缺氧缺血性腦病的發生風險[2]，因此分析妊娠期糖尿病患者新生兒窒息的危險因素具有非常重要的臨床意義。miRNA是一種非編碼小分子RNA，在胎盤發育、細胞分化和凋亡、生長發育、癌癥發生、炎癥等方面發揮重要作用[3]，miR-20和miR-192均是miRNA家族成員。相關研究表明，缺氧時部分miRNA表達異常，包括miR-20和miR-192[4]。另有學者指出，妊娠期糖尿病患者胎盤組織中miR-20和miR-192表達均上調[5]。但妊娠期糖尿病患者胎盤組織miR-20、miR-192的表達與新生兒窒息的關系尚不明確。因此，本研究選取198例妊娠期糖尿病患者進行分析，探討妊娠期糖尿病患者胎盤組織miR-20、miR-192表達水平與新生兒窒息的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年2月至2020年8月惠州衛生職業技術學院附屬醫院收治的妊娠期糖尿病患者作為研究對象。納入標準：(1)符合妊娠期糖尿病的診斷標準[6]；(2)均為單胎妊娠；(3)均簽署同意書。排除標準：(1)既往有糖尿病史；(2)合并先天性心臟病；(3)伴其他妊娠期并發癥如心臟病、高血壓等；(4)伴腎臟、心血管、免疫及血液系統疾病；(5)伴全身急慢性感染。共納入198例患者，年齡22～36(28.38±4.57)歲，初產婦145例、經產婦53例，分娩時孕周29～41(36.90±1.65)周，孕前體質指數16.87～30.84(22.82±2.64)kg/m2，分娩當日體質指數21.04～35.46(28.12±3.42)kg/m2。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》。

1.2 胎盤組織中miR-20和miR-192表達水平的檢測方法 胎盤徹底娩出后，在無菌條件下取1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm的胎盤組織，于液氮中冷凍備用。根據TRIzol試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司；貨號：WE0195；生產批號：20180803)說明書提取胎盤組織總RNA，用紫外分光光度計(美國Quawell公司，Q3000型)測定其濃度和純度；取20～25 μg RNA，通過M-MLV反轉錄酶(香港JSENB公司)將其反轉錄為cDNA，反應條件為16 ℃ 30 min、42 ℃ 30 min、85 ℃ 5 min滅活。采用實時熒光定量PCR儀(日本TAKARA公司，TP950型)進行擴增。其中miR-20上游引物序列為5′-AGGCTAGAGCTATAG-3′，下游引物序列為5′-AGCTTAGAGGCTATTAGCGAT-3′；miR-192上游引物序列為5′-TGGCGATATGCGATAGC-3′，下游引物序列為5′-CGTGGGGAGATCGA-3′；U6(內參)上游引物序列為5′-AAGGGATGCGATAGCTC-3′，下游引物序列為5′-CGGATATGCGATAGCGA-3′。PCR反應體系共20 μL，包括cDNA模板1 μL、上下游引物各1 μL、2×Taq Master Mix 10 μL、經焦碳酸二乙酯處理的超純水 7 μL。反應條件為94 ℃ 5 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 20 s、72 ℃ 5 s，共40個循環。采用2-ΔΔCt法計算miR-20、miR-192的相對表達水平。

1.3 新生兒窒息的診斷標準 在新生兒娩出后評測其1 min、5 min及10 min的Apgar評分，滿分10分，新生兒1 min Apgar評分≤7分及新生兒5 min Apgar評分下降至≤7分即為新生兒窒息[7]。根據新生兒窒息情況將妊娠期糖尿病患者分為新生兒窒息組和無新生兒窒息組。

1.4 統計學分析 使用SPSS 25.0軟件進行統計學分析。計量資料以(x±s)表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數(百分比)表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法；采用Logistic多元回歸模型分析妊娠期糖尿病患者分娩的新生兒發生窒息的危險因素。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 新生兒窒息發生情況及兩組胎盤組織miR-20、miR-192表達水平的比較 共23例新生兒發生窒息，新生兒窒息發生率為11.62%。新生兒窒息組胎盤組織miR-20、miR-192表達水平均高于無新生兒窒息組(均P<0.05)，見表1。

表1 兩組胎盤組織miR-20、miR-192相對表達水平的比較(x±s)

2.2 兩組妊娠期糖尿病患者臨床資料的比較 新生兒窒息組中，年齡≥35歲、未完全遵醫囑治療、胎盤異常、臍帶異常、羊水異常、分娩當日體質指數≥30 kg/m2的孕婦比例均高于無新生兒窒息組(均P<0.05)，見表2。

表2 兩組妊娠期糖尿病患者臨床資料的比較[n(%)]

2.3 妊娠期糖尿病患者分娩的新生兒發生窒息的影響因素分析 將2.1和2.2中差異有統計學意義的指標作為自變量(年齡：≥35歲=1，<35歲=0；未完全遵醫囑治療：是=1，否=0；胎盤異常：是=1，否=0；臍帶異常：是=1，否=0；羊水異常：是=1，否=0；分娩當日體質指數：≥30 kg/m2=1、<30 kg/m2=0；胎盤組織miR-20和miR-192表達水平：以實測值納入)，將妊娠期糖尿病患者分娩的新生兒是否發生窒息作為因變量(發生=1，未發生=0)，納入多因素Logistic回歸模型(逐步向前法)。結果顯示，年齡≥35歲、未完全遵醫囑治療、胎盤異常、臍帶異常、羊水異常、分娩當日體質指數≥30 kg/m2、胎盤組織miR-20和miR-192表達水平升高均是妊娠期糖尿病患者分娩的新生兒發生窒息的危險因素(均P<0.05)，見表3。

表3 多因素Logistic回歸分析結果

3 討 論

妊娠期糖尿病患者的血糖水平較高且難以控制時，會引發酮癥酸中毒等并發癥，導致胎兒無法從胎盤中獲取充足的氧氣而出現缺氧[8]，進而引起新生兒窒息和新生兒腦損傷。本研究中，妊娠期糖尿病患者的新生兒窒息發生率為11.62%，高于劉秀娟等[9]報告的8.67%，可能與患者病情、治療依從性差異有關，這也肯定了探討妊娠期糖尿病患者發生新生兒窒息的危險因素的重要性和必要性。

miRNA是一類由17～22個核苷酸組成的非編碼小分子RNA，其性質穩定且對機體生理變化的反應極為靈敏，這一特點使其能夠作為診斷疾病的標志物[10]。有學者指出，妊娠期糖尿病患者胎盤組織中miR-20、miR-192表達顯著上調；miR-20能夠通過磷酸化胰島素受體底物-1參與胰島素抵抗，使胰島素促進葡萄糖攝取和利用的效率下降，從而引發妊娠期糖尿病；miR-192的高表達能夠抑制胰島β細胞增殖，促進胰島β細胞凋亡，進而使胰島β細胞分泌胰島素功能下降，從而誘發妊娠期糖尿病[11]。因此，本研究探討了這兩種miRNA與妊娠期糖尿病患者分娩的新生兒發生窒息的關系。結果顯示，新生兒窒息組胎盤組織miR-20、miR-192表達水平均高于無新生兒窒息組(均P<0.05)；Logistic回歸分析結果顯示，校正了相關混雜因素后，胎盤組織miR-20和miR-192表達水平升高是妊娠期糖尿病患者分娩的新生兒發生窒息的危險因素(均P<0.05)。這表明胎盤組織 中miR-20和miR-192的表達與妊娠期糖尿病患者分娩的新生兒發生窒息有關，兩者表達水平升高可增加新生兒窒息的發生風險。相關研究顯示，miR-20參與炎癥轉化生長因子的信號傳導途徑，而妊娠期糖尿病患者胎盤組織中存在的炎性介質浸潤可能促使胎兒處于缺氧狀態；miR-20還能夠通過靶基因SMAD4和RBl來調節胎盤滋養層細胞的生長周期，進而參與胎盤發育的過程[12]。另有研究顯示，miR-192能夠通過調節細胞增殖和凋亡來參與胰島β細胞的發育，從而抑制胰島素的分泌；miR-192還能夠抑制胰高血糖素樣肽1的表達，進一步加重妊娠期糖尿病[13]。而妊娠期糖尿病病情的加重會使新生兒窒息發生率升高。由此推測，miR-20和miR-192均可參與母體血糖升高介導的炎性反應，誘導宮內缺氧的發生，增加新生兒窒息的發生風險。

綜上所述，妊娠期糖尿病患者胎盤組織中miR-20、miR-192表達上調，兩者可導致新生兒窒息的發生風險升高，應引起重視。