紅藜種子黃酮物質(zhì)的提取及體外抗氧化活性測(cè)定

李濤，劉婷，周瓊

（1.安康市質(zhì)量技術(shù)檢驗(yàn)檢測(cè)中心，陜西 安康 725000；2.安康學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與生物科技學(xué)院，陜西 安康 725000）

紅藜（Chenopodium formosanumKoidz），俗稱臺(tái)灣藜，一年生木質(zhì)草本，一般高2.5 m，柄長(zhǎng)3?10 cm，身長(zhǎng)6?20 cm，寬4?7 cm，是莧科藜屬植物的一種。臺(tái)灣藜的種子在成熟時(shí)顯深褐色，耐旱性、抗逆性、環(huán)境適應(yīng)性非常強(qiáng)，又由于自身氣味對(duì)山麻雀和一些害蟲有抵制作用，可達(dá)一年兩生的高產(chǎn)量。

紅藜的功能性成分以皂素、多酚類、甜菜色素為主，而黃酮類化合物作為自然界存在的最大類別的酚類物質(zhì)之一，能夠增強(qiáng)超氧化物歧化酶（SOD）活性，降低過(guò)氧化脂質(zhì)、清除自由基生成，在體內(nèi)代謝產(chǎn)生大量酚酸類物質(zhì)，具有一定的延緩氧化、抑菌消炎、防癌、降血壓、保護(hù)心血管等作用［1-5］。

以臺(tái)灣藜的種子為原料，通過(guò)合理的技術(shù)手段提取出紅藜種子中的黃酮物質(zhì)，是對(duì)其合理利用的有效途徑。并對(duì)提取出的黃酮物質(zhì)進(jìn)行體外抗氧化活性測(cè)定，為今后廣泛用于醫(yī)藥、化妝品和食品加工提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

臺(tái)灣當(dāng)?shù)胤N植的紅藜。無(wú)水/95%乙醇、丙酮（分析純），天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；維生素C（食品級(jí)），石家莊石藥集團(tuán)維生藥業(yè)有限公司；1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）、50 U/mg纖維素酶、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，上海源葉生物科技有限公司。

1.2 主要儀器和設(shè)備

DHG-92140A型電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；FW100型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司；KH2200E型超聲波清洗機(jī)，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；XYJ-A型大容量電動(dòng)離心機(jī)，江蘇金壇市福華儀器有限公司；EV60S型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，美國(guó)熱電有限公司；HH-S4型電熱恒溫水浴鍋，北京科偉永興儀器有限公司；電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 原料預(yù)處理選取臺(tái)灣紅藜種子置于60℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘干至恒重，碾碎過(guò)60目篩，裝入自封袋內(nèi)干燥避光，并置于冰箱中備用［6，7］。

1.3.2 黃酮物質(zhì)的測(cè)定方法

1）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。參照賴紅芳等［8］的方法，配制0.01 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2）黃酮物質(zhì)最大吸收波長(zhǎng)的確定。參照楊萌等［9］的處理方法，以第1管為空白，將第2管置于波長(zhǎng)480?530 nm進(jìn)行掃描，以吸光度值（A）為響應(yīng)值繪制波長(zhǎng)與吸光值的曲線圖，確定提取黃酮的最大吸收波長(zhǎng)。

3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。參照王磊等［10］的方法，將0.1 mg/mL蘆丁儲(chǔ)備液稀釋成濃度為0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 mg/mL的溶液，在最佳波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4）黃酮物質(zhì)的計(jì)算方法。用1 mL移液管量取紅藜種子黃酮物質(zhì)提取液于10 mL容量瓶中，以相應(yīng)溶劑作空白對(duì)照，在510 nm處測(cè)吸光度，由吸光值根據(jù)回歸方程計(jì)算出紅藜種子黃酮物質(zhì)提取液的質(zhì)量濃度（C），從而計(jì)算得率。計(jì)算公式如下。

式中，C表示黃酮物質(zhì)提取液的質(zhì)量濃度（mg/mL）；V0表示測(cè)定吸光值所用待測(cè)樣的體積（mL）；V1表示提取劑的總體積（mL）；V2表示待測(cè)液定容后體積（mL）；M表示臺(tái)灣紅藜種子粉末的質(zhì)量（g）。

1.3.3 紅藜種子黃酮物質(zhì)的提取方法提取劑的確定。于100 mL三角瓶中準(zhǔn)確加入紅藜粉末1.00 g，分別加入甲醇、乙醇和去離子水各30 mL，50℃水浴浸提2 h，使用4 000 r/min離心機(jī)離心10 min。將所得待測(cè)液置于特定波長(zhǎng)下測(cè)吸光度。同時(shí)只加試劑，不加樣品做空白，做3組平行，取平均值。確定出紅藜種子黃酮物質(zhì)的最佳提取溶劑。

1）乙醇浸提法。參照并改進(jìn)孫雪婷等［11］的方法，稱取1.00 g紅藜種子粉于100 mL三角瓶中，加入85%乙醇30 mL，50℃水浴加熱2 h，4 000 r/min離心10 min，取上清液低溫避光保存、待用。

2）超聲波輔助提取法。參照并改進(jìn)張海容等［12］的方法，稱取1.00 g紅藜種子粉置于100 mL三角瓶中，加入85%乙醇30 mL，50℃水浴提取2 h，超聲波清洗30 min，4 000 r/min離心10 min，取上清液低溫避光保存、待用。

3）纖維素酶輔助提取法。參照并改進(jìn)李育峰等［13］的方法，稱取1.00 g紅藜種子粉置于100 mL三角瓶中，加入85%乙醇30 mL，調(diào)節(jié)pH 5.0，再加入0.4%纖維素酶于50℃水浴提取2 h，4 000 r/min離心10 min，取上清液低溫避光保存、待用。

4）超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法。參照并改進(jìn)石松標(biāo)等［14］的方法，稱取1.00 g紅藜種子粉于100mL三角瓶中，加入85%乙醇30 mL，調(diào)節(jié)pH 5.0，再加入0.4%纖維素酶于50℃水浴中酶解2 h，超聲清洗30 min，4 000 r/min離心10 min，取上清液低溫避光保存、待用。

1.3.4 單因素試驗(yàn)

1）最適纖維素酶質(zhì)量分?jǐn)?shù)的確定。分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%纖維素酶，其余參照“1.3.3”超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法。在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。同時(shí)只加試劑不加樣品做空白，3組平行，取平均值。

2）最適提取溫度的確定。分別將水浴溫度調(diào)至30、40、50、60、70℃，其余參照“1.3.3”超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法。在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。同時(shí)只加試劑不加樣品做空白，3組平行，取平均值。

3）最適乙醇體積分?jǐn)?shù)的確定。分別加入體積分?jǐn)?shù)為55%、65%、75%、85%、95%的乙醇溶液30 mL，其余參照“1.3.3”超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法。在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。同時(shí)只加試劑不加樣品做空白，3組平行，取平均值。

4）最適液料比的確定。分別加入85%乙醇溶液10、20、30、40、50 mL，其余參照“1.3.3”超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法。在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。同時(shí)只加試劑不加樣品做空白，3組平行，取平均值。

5）最適提取時(shí)間的確定。分別水浴提取30、60、90、120、150 min，其余參照“1.3.3”超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法。在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。同時(shí)只加試劑不加樣品做空白，3組平行，取平均值。

6）最適酶解pH的確定。分別加pH為4.0、4.4、5.0、5.4、5.8的緩沖液，其余參照“1.3.3”超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法。在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。同時(shí)只加試劑不加樣品做空白，3組平行，取平均值。

7）最適超聲時(shí)間的確定。分別置于超聲波清洗器10、20、30、40、50 min，其余參照上述超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法。在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度。同時(shí)只加試劑不加樣品做空白，3組平行，取平均值。

1.3.5 正交試驗(yàn)將紅藜種子黃酮物質(zhì)得率作為考察項(xiàng)目，以單因素試驗(yàn)為分析基礎(chǔ)，得出纖維素酶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)、酶解溫度、超聲時(shí)間、料液比4因子為顯著影響因素，采用L9（34）正交表。如表1所示。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平

1.3.6 黃酮物質(zhì)體外抗氧化活性的測(cè)定方法

1）DPPH自由基清除率的測(cè)定。參照孫雪婷等［15］的方法，進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，證實(shí)在517 nm附近有強(qiáng)吸收。后續(xù)于此波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度A樣品（Ai），用2 mL無(wú)水乙醇與2 mL黃酮物質(zhì)提取液測(cè)定吸光度A對(duì)照（Aj），用2 mL 0.1 mg/mL DPPH-乙醇溶液與2 mL無(wú)水乙醇測(cè)定吸光度為A空白（Ac），用維生素C作陽(yáng)性對(duì)照。

2）羥自由基（·OH）清除率的測(cè)定。參照孫雪婷等［15］的方法，進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，證實(shí)在510 nm附近有吸收峰。將所得待測(cè)液置于510 nm處測(cè)定其吸光度A樣品（Ai），用去離子水替換水楊酸測(cè)定吸光度A對(duì)照（Aj），用去離子水替換紅藜種子總黃酮提取液測(cè)定吸光度A空白（Ac），用維生素C作陽(yáng)性對(duì)照。

3）半抑制濃度（IC50）的計(jì)算。由于體外抗氧化活性測(cè)定試驗(yàn)常以半抑制濃度（IC50）作為考察指標(biāo)，因此需根據(jù)黃酮物質(zhì)提取液對(duì)自由基的清除率及自身濃度關(guān)系繪制線性回歸方程。當(dāng)清除率達(dá)50%時(shí)，與之對(duì)應(yīng)的提取液濃度大小即為IC50。當(dāng)IC50越小時(shí)，說(shuō)明紅藜種子中的黃酮物質(zhì)清除自由基的能力越強(qiáng)［16］。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取黃酮物質(zhì)的結(jié)果與分析

2.1.1 黃酮物質(zhì)最大吸收波長(zhǎng)的確定波長(zhǎng)-吸光值關(guān)系曲線如圖1所示。由圖1可知，最大吸收波長(zhǎng)出現(xiàn)在513 nm處，故后續(xù)試驗(yàn)于513 nm處測(cè)定紅藜種子中的黃酮物質(zhì)。

圖1 黃酮物質(zhì)最大吸收波長(zhǎng)的確定

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定按照“1.3.2”的方法測(cè)得表2數(shù)據(jù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示，該蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線以蘆丁濃度作x軸，吸光度作y軸，回歸方程為y=8.185 7x+0.002 9，R2=0.999 5。

表2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.3 提取溶劑的確定提取溶劑試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。水提取紅藜種子黃酮物質(zhì)的效果明顯不如有機(jī)試劑，雖然甲醇、乙醇提取效果差別不顯著，但相對(duì)乙醇，甲醇易揮發(fā)、有毒性、成本高，故此次試驗(yàn)選用乙醇作為最佳提取溶劑。

表3 不同提取溶劑的黃酮提取率

2.1.4 提取方法的確定提取方法的試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法使紅藜種子黃酮物質(zhì)的提取率顯著提高，這可能因?yàn)槌暡ǜ哳l振動(dòng)增加了物料與提取劑的接觸面積，且纖維素酶能破壞植物的細(xì)胞壁，利于黃酮物質(zhì)的溶解和擴(kuò)散，從而大大提高提取率。故后續(xù)選用超聲波-纖維素酶復(fù)合提取法提取紅藜種子黃酮物質(zhì)。

表4 不同提取方法的選擇

2.2 單因素試驗(yàn)的結(jié)果與分析

2.2.1 纖維素酶質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)紅藜種子黃酮得率的影響纖維素酶質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)黃酮得率的影響結(jié)果見(jiàn)圖3。紅藜種子的黃酮物質(zhì)得率隨纖維素酶質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大整體呈先增長(zhǎng)后降低的趨勢(shì)，并于0.4%時(shí)達(dá)到最大。可能是因?yàn)槊笣舛容^低時(shí)，底物和纖維素酶的接觸機(jī)會(huì)少，不足以使底物酶解完全；酶濃度增加到0.4%時(shí)，酶解接近完全，黃酮物質(zhì)得率最大；0.4%以上時(shí)，隨著酶量增加，抑制酶解，提取率下降。因此酶的最適濃度在0.4%。

圖3 不同纖維素酶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)黃酮得率的影響

2.2.2 料液比對(duì)紅藜種子黃酮得率的影響料液比對(duì)黃酮得率的影響結(jié)果見(jiàn)圖4。當(dāng)提取劑體積從10 mL增至20 mL時(shí)，黃酮得率顯著增大，20?40 mL內(nèi)增長(zhǎng)緩慢，大于40 mL開始有降低的趨勢(shì)?？赡苁且?yàn)楫?dāng)提取溶劑體積增大時(shí)，提取液中黃酮濃度逐漸減?。舛炔钤酱螅欣诜N子細(xì)胞中的黃酮物質(zhì)向胞外擴(kuò)散和溶解；當(dāng)達(dá)到一定量時(shí)，黃酮物質(zhì)濃度達(dá)到飽和，再加大提取劑用量對(duì)提取效果無(wú)積極作用且造成浪費(fèi)。因此，從經(jīng)濟(jì)效率與提取效率綜合考慮，最佳料液比為1∶40。

圖4 料液比對(duì)黃酮得率的影響

2.2.3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)紅藜種子黃酮得率的影響乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)黃酮得率的影響結(jié)果見(jiàn)圖5。一定濃度范圍內(nèi)，黃酮得率幾乎呈線性增長(zhǎng)；當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%時(shí)，黃酮物質(zhì)溶解量最多，得率最大；當(dāng)大于65%時(shí)，黃酮提取率逐漸降低?？赡芤?yàn)殡S著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加使一部分醇溶性、親脂性強(qiáng)的成分、色素逐漸溶出，競(jìng)爭(zhēng)乙醇，從而導(dǎo)致黃酮物質(zhì)的提取率逐漸減少［17］。故提取黃酮物質(zhì)的最適乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%。

圖5 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)黃酮得率的影響

2.2.4 酶解溫度對(duì)紅藜種子黃酮得率的影響酶解溫度對(duì)黃酮得率的影響結(jié)果見(jiàn)圖6。30?60℃時(shí)，黃酮得率隨溫度的上升幾乎呈線性增長(zhǎng)；60℃時(shí)黃酮得率最高；當(dāng)超過(guò)60℃時(shí)黃酮物質(zhì)得率開始降低。一方面可能由于低溫抑制黃酮物質(zhì)在溶劑中的溶解和擴(kuò)散，提取率低；另一方面纖維素酶的最適溫度為60℃，此時(shí)酶活最高，使黃酮得率達(dá)最高；高于60℃，隨溫度增加，黃酮物質(zhì)的結(jié)構(gòu)逐漸遭到破壞，且纖維素酶的活性降低，不利于黃酮物質(zhì)提取，故得率降低。因此，最適溫度在60℃。

圖6 酶解溫度對(duì)黃酮得率的影響

2.2.5 提取時(shí)間對(duì)紅藜種子黃酮得率的影響提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響結(jié)果見(jiàn)圖7。提取時(shí)間達(dá)2 h時(shí)黃酮得率最高；2 h之后，隨時(shí)間的推移黃酮得率降低。一方面可能因?yàn)? h時(shí)，剛好酶解完全，黃酮物質(zhì)完全溶于溶劑中，提取率達(dá)最高。另一方面是因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間提取，其他物質(zhì)逐漸溶出，與黃酮競(jìng)爭(zhēng)提取劑，使黃酮得率降低；并且長(zhǎng)時(shí)間提取，會(huì)造成乙醇揮發(fā)量增多，也不利于提取黃酮。為在有效的周期內(nèi)達(dá)到理想效果，提取時(shí)間選取120 min為宜。

圖7 提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響

2.2.6 酶解pH對(duì)紅藜種子黃酮得率的影響酶解pH對(duì)黃酮得率的影響結(jié)果見(jiàn)圖8。隨pH的增大，黃酮得率逐漸降低。這可能由于pH 4.0時(shí)纖維素酶的活性達(dá)到最強(qiáng)，破除細(xì)胞壁的能力也越強(qiáng)，利于細(xì)胞內(nèi)黃酮物質(zhì)的溶出提取。因此酶解的最佳pH應(yīng)選為4.0。

圖8 酶解pH對(duì)黃酮得率的影響

2.2.7 超聲時(shí)間對(duì)紅藜種子黃酮得率的影響超聲時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響結(jié)果見(jiàn)圖9。超聲時(shí)間30 min內(nèi)黃酮物質(zhì)得率升降不明顯；超聲30 min后黃酮物質(zhì)得率顯著降低。這可能因?yàn)殡S著超聲時(shí)間增大，纖維素酶的結(jié)構(gòu)及黃酮物質(zhì)成分被破壞，使提取液中的黃酮物質(zhì)濃度降低，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果降低。繼續(xù)延長(zhǎng)超聲時(shí)間不但浪費(fèi)時(shí)間，還加大提取成本。綜合來(lái)看，前30 min內(nèi)的超聲波基本上能有效提取紅藜種子黃酮物質(zhì)，最適超聲提取時(shí)間選為10 min。

圖9 超聲時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.3.1 紅藜種子黃酮物質(zhì)提取的結(jié)果與分析按照“1.3.5”項(xiàng)表1所示，利用正交設(shè)計(jì)對(duì)各因素的提取條件進(jìn)行優(yōu)化，以黃酮物質(zhì)得率為考察指標(biāo)，平行測(cè)量2次，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 紅藜種子黃酮物質(zhì)提取正交試驗(yàn)的結(jié)果分析

根據(jù)表7中的極差分析，比較極差R大小，得影響紅藜種子黃酮物質(zhì)得率的因素主次順序?yàn)榱弦罕龋ˋ）＞酶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（B）＞酶解溫度（C）＞超聲時(shí)間（D）。得到提取黃酮物質(zhì)的最優(yōu)組合為A2B3C2D1，即超聲時(shí)間為10 min，料液比為1∶40（g∶mL），纖維素酶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6%，酶解溫度60℃。此條件下黃酮物質(zhì)得率達(dá)2.78%。

2.3.2 驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果與分析由于正交優(yōu)化得到的提取黃酮物質(zhì)的最佳工藝參數(shù)與表7中黃酮得率最高的試驗(yàn)組合不相匹配，所以進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，同時(shí)做2組水平，得表8數(shù)據(jù)。如表8所示，在最優(yōu)工藝條件A2B3C2D1提取黃酮比試驗(yàn)組合A3B3C2D1提取黃酮效果更好，因此后續(xù)試驗(yàn)選擇最優(yōu)工藝參數(shù)較為合理。

表8 驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果比較

2.4 體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果

2.4.1 清除DPPH·的能力分析

1）DPPH·最大吸收波長(zhǎng)的確定。DPPH·最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖10。由圖10可知，實(shí)際值與理論值相符，即DPPH·在517 nm處有最大吸收峰。

圖10 DPPH·最大波長(zhǎng)的確定

2）紅藜種子黃酮物質(zhì)對(duì)DPPH自由基的清除效果。紅藜種子黃酮提取液對(duì)DPPH自由基的清除效果如圖11、圖12所示。在一定濃度范圍內(nèi)，隨濃度的增大，黃酮提取液對(duì)DPPH自由基的清除作用增強(qiáng)，兩者成一定量效關(guān)系。當(dāng)黃酮物質(zhì)濃度為0.084 6 mg/mL時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除率達(dá)92.91%；當(dāng)維生素C濃度僅為0.003 mg/mL時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除率高達(dá)95.83%；且0.08 mg/mL黃酮提取液與0.000 5 mg/mL維生素C清除DPPH自由基的能力相當(dāng)。通過(guò)模擬曲線方程，得維生素C的IC50為0.028 8 mg/mL，紅藜種子黃酮提取液的IC50為0.368 9 mg/mL，表明紅藜種子黃酮物質(zhì)具有一定的抗氧化活性。

圖11 紅藜種子黃酮物質(zhì)對(duì)DPPH·的清除作用

圖12 維生素C對(duì)DPPH·的清除作用

2.4.2 清除·OH的能力分析

1）·OH最大吸收波長(zhǎng)的確定?！H最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖13。如圖13可知，實(shí)際值與理論值相符，測(cè)定·OH清除率時(shí)的最大波長(zhǎng)在510 nm處。

圖13 ·OH最大波長(zhǎng)的確定

2）紅藜種子黃酮物質(zhì)對(duì)·OH的清除效果。紅藜種子黃酮提取液對(duì)·OH的清除效果如圖14、圖15所示。在一定濃度范圍內(nèi)，隨著濃度的增大，紅藜種子黃酮物質(zhì)對(duì)·OH的清除作用也逐漸增強(qiáng)。當(dāng)?shù)蜐舛葧r(shí)，紅藜種子黃酮物質(zhì)提取液對(duì)·OH的清除效果不及維生素C。當(dāng)紅藜種子黃酮物質(zhì)提取液濃度為0.084 6 mg/mL時(shí)，對(duì)·OH清除率是94.72%；而維生素C的濃度僅為0.003 mg/mL時(shí)，對(duì)·OH清除率高達(dá)99.84%；且0.08 mg/mL黃酮提取液與0.001 5 mg/mL維生素C清除·OH的能力相當(dāng)。通過(guò)模擬曲線方程，可知維生素C的IC50為0.007 9 mg/mL，黃酮的IC50為0.017 6 mg/mL。表明紅藜種子黃酮物質(zhì)具有一定的抗氧化活性。

圖14 紅藜種子黃酮物質(zhì)對(duì)·OH的清除作用

圖15 維生素C對(duì)·OH的清除作用

3 小結(jié)

在確定紅藜種子黃酮物質(zhì)提取方法前經(jīng)過(guò)多次預(yù)試驗(yàn)，參考并調(diào)整前人的研究方案。對(duì)比4種提取方法，得出在天然活性成分提取過(guò)程中，加以物理、生物方法輔助，能顯著提高活性成分提取率且不引入毒害物質(zhì)，具有一定的工業(yè)實(shí)踐價(jià)值。

通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)提取方法的各因素進(jìn)行優(yōu)化，最終把纖維素酶質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.6%，料液比1∶40（g∶mL），酶解溫度60℃，超聲時(shí)間10 min確定為最佳提取條件，黃酮得率達(dá)27.81 mg/g。且經(jīng)驗(yàn)證得實(shí)際值與理論值相符，具有一定的參考價(jià)值。

通過(guò)測(cè)定紅藜種子提取液對(duì)DPPH·及·OH的清除效果，研究了黃酮物質(zhì)的體外抗氧化活性，結(jié)果顯示紅藜種子黃酮提取液具有較高的清除DPPH·及·OH的能力，特別在較高濃度下，抗氧化能力接近維生素C。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)從臺(tái)灣紅藜種子中提取出的黃酮物質(zhì)具有一定的應(yīng)用前景，且作為一種天然有效的抗氧化劑，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品、食品加工等方面。