微生物源生防殺菌劑的篩選方法研究

張志剛，王開梅，吳兆圓，萬中義，方偉

（湖北省生物農藥工程研究中心/湖北省農業科技創新中心生物農藥分中心，武漢 430064）

微生物源生物殺菌劑（或微生物源提取物）的篩選和化學殺菌劑的篩選相比，生物殺菌劑樣品中不僅包括微生物代謝產物（化合物），而且還含有微生物菌絲（或孢子）。在篩選培養過程中，這些菌絲（或孢子）會持續擴張生長。同時，作為防治目標的模式靶標——植物病原真菌也會持續生長。由于樣品中的微生物和模式靶標同時生長，所以常用的應對措施是把2個微生物接種到同一培養基（例如PDA培養基）中，并且兩者之間有一定的空間間隔，通過觀察生長交匯區域的菌絲生長狀況來確定這2種微生物之間是否存在抑制作用。由于樣品微生物的代謝產物因培養基不同，其產量及種類有很大差異，所以這種方法不足以反映生防菌發酵液樣品全部成分的活性，只能比較2種菌在測試培養基中是否形成抑制［1，2］。在微生物源生物殺菌劑的篩選培養過程中，樣品微生物和靶標微生物均會持續擴張生長，形成對營養及空間的競爭，活性反應可能源于樣品微生物代謝產物的殺菌作用，也可能源于2種微生物之間的競爭。因此，為了明確篩選中的活性反應來源，準確反映發酵液樣品的真實活性，有必要對微生物源生物殺菌劑樣品進行分類后測試。按照菌體和化合物分開測試的原則，把發酵液分解成以下4類，即發酵液、離心后的上清液、過濾除去菌體的上清液、活菌體（菌絲或孢子）。……