氣相色譜法測(cè)定中藥制劑中11 種揮發(fā)性成分的含量

左軍鳳，熊馬劍，朱碧君

江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029

中藥材中含有揮發(fā)性成分的品種較多，如丁香、八角茴香、廣藿香、川芎、薄荷、艾葉、姜黃等。中藥揮發(fā)性成分主要來源于芳香類中藥，由多種成分組成，除含有脂肪族和芳香族的烴及含氧化物外，大多含萜類。萜類化合物在抗微生物、抗炎、抗腫瘤、抗菌抑病毒等方面發(fā)揮著重要的作用［1-6］，特別是單萜類化合物在抗血栓、抗氧化、改善血管彈性和調(diào)節(jié)心血管功能等方面有顯著的優(yōu)勢(shì)和潛力［7-12］。因此，為了更好地控制這一類中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用氣相色譜法，通過方法學(xué)研究建立了中藥制劑中11 種揮發(fā)性成分的含量測(cè)定方法，為行業(yè)完善相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

7890A 型氣相色譜儀，美國(guó)安捷倫公司；AL204-IC 型電子天平，美國(guó)梅特勒-托利多公司；CTC-256 型恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)箱，德國(guó)美墨爾特公司；KQ-500DE 型超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 試藥

芳樟醇對(duì)照品，批號(hào)111503-201603，含量97.8%；桉油精對(duì)照品，批號(hào)110788-201506，含量98.4%；棕櫚酸甲酯對(duì)照品，批號(hào)190030-201604，含量100.0%；α-蒎烯對(duì)照品，批號(hào)110897-201803，含量99.9%；β-蒎烯對(duì)照品，批號(hào)111827-201202，含量100.0%；樟腦對(duì)照品，批號(hào)110747-201810，含量99.0%；薄荷腦對(duì)照品，批號(hào)110728-200506，含量100.0%；冰片對(duì)照品，批號(hào)110743-201706，含量97.6%；以上對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。藁本內(nèi)酯對(duì)照品，批號(hào)72570008，含量100.0%；丹皮酚對(duì)照品，批號(hào)74330010，含量100.0%；以上二種對(duì)照品均購(gòu)自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。氧化石竹烯對(duì)照品，批號(hào)Y01N7N23918，含量100.0%，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。無(wú)水乙醇，批號(hào)2016012，色譜純，購(gòu)自永華化學(xué)科技（江蘇）有限公司。

1.3 樣品

31 批次中藥制劑，來源于國(guó)內(nèi)31 家藥品生產(chǎn)企業(yè)。主要?jiǎng)┬陀蓄w粒劑、散劑、丸劑和片劑。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-Innowax 毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.15 μm）；柱溫：初始溫度60 ℃，保持2 min，然后以20 ℃/min 升溫至200 ℃；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測(cè)器溫度：220 ℃；載氣：氮?dú)猓涣魉?.0 mL/min；分流比10∶1。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對(duì)照品溶液取各對(duì)照品適量，精密稱定，分別用無(wú)水乙醇使溶解并稀釋成各含50 μg/mL 的對(duì)照品儲(chǔ)備液，再吸取各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量混合并稀釋成不同濃度的混合對(duì)照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液取單包裝樣品，剪開，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)入錐形瓶中，精密加入無(wú)水乙醇20 mL，稱定重量，超聲提取（200 W，40 kHz）30 min，放冷，補(bǔ)足減失的量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 空白溶液取同批次無(wú)水乙醇，作為空白溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照品混合溶液、供試品溶液、空白溶液分別進(jìn)樣，結(jié)果11 種對(duì)照品分離良好，在色譜圖中按出峰時(shí)間由左到右依次為：α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精、樟腦、芳樟醇、薄荷腦、冰片、氧化石竹烯、棕櫚酸甲酯、丹皮酚、藁本內(nèi)酯，空白溶液無(wú)干擾，供試品溶液色譜中相應(yīng)成分出峰時(shí)間與對(duì)照品一致，見圖1。

圖1 氣相色譜圖：A.混合對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；C.空白溶液

2.4 線性關(guān)系考察

取各對(duì)照品混合液，分別精密吸取1 μL 注入氣相色譜儀，以濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，由于冰片分為左旋結(jié)構(gòu)和右旋結(jié)構(gòu)，在本實(shí)驗(yàn)條件下出雙峰，結(jié)果以兩個(gè)峰面積之和來計(jì)算，11 種揮發(fā)性成分在線性范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，見表1。

表1 線性關(guān)系 μg/mL

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次，結(jié)果11 種揮發(fā)性成分峰面積的RSD 在1.8%～5.0%之間，表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

選取小兒豉翹清熱顆粒，按“2.2.2”項(xiàng)下處理，制備6 份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果檢出α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷腦和藁本內(nèi)酯，其余成分未檢出，RSD分別為3.3%、4.8%、3.3%和4.1%，表明重現(xiàn)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

選取“2.6”項(xiàng)下同批次制劑，稱取1/2 袋內(nèi)容物，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)入錐形瓶中，加入約相當(dāng)于制劑中對(duì)照品含量80%、100%、120%的混合對(duì)照品溶液各2 份，按“2.2.2”項(xiàng)下處理，測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。11 種揮發(fā)性成分回收率在90.9%～104.8%之間，RSD值在2.4%～6.0%之間，表明回收率良好。結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2（續(xù)）

2.8 檢出限

取混合對(duì)照品溶液適量，逐級(jí)稀釋，以信噪比3∶1 計(jì)算檢出限，α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精、樟腦、芳樟醇、薄荷腦、冰片、氧化石竹烯、棕櫚酸甲酯、丹皮酚和藁本內(nèi)酯的檢出限分別為0.25 μg/mL、0.25 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.29 μg/mL、0.25 μg/mL、0.49 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.50 μg/mL 和0.50 μg/mL，表明靈敏度良好。

2.9 供試品含量測(cè)定

采用所建立的方法對(duì)來源于31 家藥品生產(chǎn)企業(yè)的31 批次中藥制劑進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果有7 批次中藥制劑中檢出上述揮發(fā)性成分，主要檢出成分有樟腦、薄荷腦、藁本內(nèi)酯、冰片、芳樟醇、α-蒎烯、β-蒎烯，見表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果 mg/袋

3 討論

本研究建立了氣相色譜法同時(shí)測(cè)定中藥制劑中11 種揮發(fā)性成分的方法并用于31 批次中藥制劑樣品的分析測(cè)定。建議藥品生產(chǎn)企業(yè)，對(duì)于生產(chǎn)的制劑含有相關(guān)的揮發(fā)性成分，尤其是揮發(fā)性成分具有重要功效的，可借鑒本方法來控制產(chǎn)品的質(zhì)量，以保障患者的用藥安全。