B(A)血型漏檢原因分析*

王 芳，陳 敏，楊冬燕，毛 偉

重慶市血液中心，重慶 400000

ABO血型正確定型和RhD正確定型是《血站技術操作規程》中規定采供血機構強制性檢測的項目，準確、快速的血型檢測也是為臨床提供血液的安全性要求之一，是保障安全輸血的重要前提[1]。全自動血型檢測系統具有快速、準確，易于標準化、信息化和自動化的優點，滿足采供血機構大規模標本的血型篩查[2-3]。由于全自動血型檢測系統受方法學的限制，時有ABO血型亞型漏檢的情況。本文就篩查實驗室用PK7300全自動血型檢測儀漏檢的血型進行原因分析和鑒定，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 獻血者，男，18歲，漢族，血型復查時發現ABO血型正反定型不一致，將標本送至中心輸血研究所進行血型的確認。

1.2試劑和儀器 單克隆抗A、抗B血型定型試劑(試劑1)、單克隆抗H定型試劑(上海血液生物)；單克隆抗A、抗B血型定型試劑(試劑2，長春博德)；人源抗A、抗B試劑(試劑3)、抗AB試劑(中國醫學科學院輸血研究所)；人ABO血型反定型用紅細胞試劑、A2細胞試劑(上海血液生物)，試劑均在有效期內。Gene Quant Pro型DNA 濃度測定儀(英國)、ABI PE9700型擴增儀(美國)、 Power Pac 3000型電泳儀(美國)、KST-5500型凝膠成像分析系統(北京東迅)、血型血清學離心機 KA-2200 SeromamticⅡ(日本KUBOTA)、全自動血型分析儀PK7300(貝克曼)(以下簡稱PK7300)。

1.3方法

1.3.1血清學檢測 ABO正反定型(紙板法、試管法)和吸收放散試驗按照相關試劑說明書及《全國臨床檢驗操作規程(第4版)》進行操作。

1.3.2基因檢測 (1)DNA提取。以Puregene Blood Core Kit B DNA提取試劑(德國Qiagen)抽提全血標本中基因組DNA。濃度大于20 ng/mL，A260/A280比值在1.6～1.9的標本可用于檢測，按照試劑盒說明書進行操作。(2)ABO血型基因SSP檢測。按照人類紅細胞ABO血型Cis-AB，B(A)基因分型試劑盒和A亞型基因分型試劑盒(PCR-SSP，天津秀鵬)試劑盒說明書進行操作。

1.4統計學處理 采用SPSS19.0對數據進行整理。

2 結 果

2.13種不同廠家標準血清試劑采用試管法檢測獻血者血型結果分析 通過血型血清學反應格局分析，獻血者的血型疑為A亞B型或B(A)，需用分子生物學方法進行確定。見表1。

表1 3種不同廠家試劑檢測ABO血型檢測結果

2.2紙板法和PK7300檢測結果分析 實驗室常規使用的檢測試劑(試劑2)進行血型的檢測，檢測結果顯示ABO血型為B型。

2.3ABO基因型檢測結果 人類紅細胞ABO血型-A亞型基因分型結果為B/O2，說明該獻血者沒有A基因，可以排除A亞B的可能。瓊脂糖凝膠電泳見圖1。人類紅細胞ABO血型-cis-AB，B(A)基因分型結果為B(A)04/O2，結合血清學檢測結果和A亞型分型試劑盒結果判斷該獻血者的血型結果為B(A)型，瓊脂糖凝膠電泳膠圖見圖2。

注：1～9為引物A201～A211；10～15為引物A301～A307；16～26為引物AW01～AW14；27～28為引物AM01～AM02；29～37為引物AX01～AX16；38～41為引物AeL02、04-06；42為引物A/O；43為引物B；44為引物O1；45為引物O2；46為陰性對照。圖1 ABO血型-A亞型基因分型電泳圖譜

注：1為引物cisAB01；2為引物cisAB01，B(A)01；3為引物B(A)01，B(A)03；4為引物cisAB02；5為引物B(A)02；6為引物cisAB03；7為引物B(A)04；8為引物B(A)06；9為引物cisAB04；10為引物B1；11為引物B2；12為引物O1；13為引物O2；14為陰性對照。圖2 ABO血型-cis-AB，B(A)基因分型電泳圖譜

3 討 論

PK7300檢測血型的原理是利用紅細胞的自然沉降通過機器視覺檢測系統(CCD系統)進行圖像數字化處理，利用獨特參數判斷是否發生凝集來進行血型的檢測。由于血型檢測數據保存在圖像處理器的內存中便于隨時調用和分析，同時原始結果均以數據形式保存，保證了結果的可靠性、完整性和可追溯性，在安全供血和舉證方面有積極的意義，已被血型檢測標本量大的采供血機構血液篩查實驗室廣泛使用[4]。

目前ABO血型的初篩和鑒定過程復雜，各個環節都可能造成漏檢，如試劑的批間差異、全自動血型儀初篩的局限性，檢測人員的個體差異以及亞型復雜的表型特征也是造成漏檢的原因[5]，采供血機構檢驗科為保證血型檢測的準確和及時，制訂了嚴格的檢測和疑難血型的送檢流程，便于發現因正反定型不相符、弱凝集、全凝集等導致血型檢測異常情況，盡可能避免罕見亞型漏檢。

B(A)血型是具有與cisAB相似的順式遺傳方式的罕見ABO亞型，目前共有7種B(A)等位基因，國內報道B(A)02、B(A)04、B(A)05和B(A)06共4種，B(A)04的基因頻率最高為1.6/100 000，其次是B(A)02頻率為0.78/100 000[6]，本研究的血型是中國人群中常見的B(A)04，在經典的血清學檢測中是不能區別具體是哪種亞型，需要通過分子生物學檢測才能確認具體的亞型型別。B(A)血型分子機制是由于單堿基突變，在B基因基礎上發生錯義突變，形成具有編碼A抗原和B抗原雙功能活性酶的能力，紅細胞上同時表達弱的A抗原和強的B抗原，血清學特點是紅細胞能與抗-B發生強凝集，與抗-A發生弱凝集或不凝集，血清中含有抗-A，能凝集或部分凝集A2紅細胞，表現為A弱B，因獨特血清學特點，易在血清學檢測中發生漏檢[6-8]。研究報道cisAB和B(A)與A或B基因雜合的獻血者漏檢頻率約為82.8%，cisAB和B(A)與O基因雜合是漏檢頻率約為11.8%[9]，單純依靠血清學方法無法準確鑒定cisAB和B(A)亞型，需要進行分子生物學鑒定，才能得到正確的血型結果。

通過對本例B(A)血型的鑒定和原因分析，發現檢驗科使用全自動血型檢測系統PK7300進行血型檢測時，通過血型分析儀參數的設定和制訂的檢測策略能檢出部分有問題的血型，而部分罕見亞型因方法學的局限性、試劑間的差異和亞型血清學特點的多態性，不能被有效檢出，漏檢的情況時有發生。因此有必要在篩查實驗室對血型檢測試劑的質量進行充分有效地評估和獻血者ABO亞型血地篩查，在現有基礎上制訂更加有效的篩查策略。