利用HPLC-MS/MS監測水環境中的唑嘧磺草胺

周世陽，賀芳，李俊，王睿＊

（1.貴州省檢測技術研究應用中心，貴州 貴陽 550014；2.貴陽市白云區疾病預防控制中心，貴州 貴陽 550016）

唑嘧磺草胺，化學名稱為2′,6′-二氟-5-甲基[1,2,4]三唑并[1,5-α]嘧啶-2-磺酰苯胺，是一種由Dow AgroSciences 公司開發的三唑并嘧啶磺酰胺類內吸性除草劑，通過根和葉吸收，在整株植物中傳導至生長點，主要用于防除大豆、豌豆、玉米田闊葉雜草和禾本科雜草[1]。

目前，對唑嘧磺草胺分析檢測方法報道主要有非水滴定法[2]、紫外分光光度法[3]、高效液相色譜法[4-6]、液相-串聯質譜分析法[7-8]，本試驗用Smart and Barko 培養基模擬穗狀狐尾藻在野外的生長條件中受到唑嘧磺草胺毒性危害，并建立一種對培養基中存在的唑嘧磺草胺進行定性和定量的高效液相色譜-串聯質譜分析方法，該方法操作簡單、快速，擁有良好的分離效果和線性關系，且精密度和回收率均符合要求，適用于唑嘧磺草胺在單劑或復配制劑進行化學農藥登記毒性試驗中的質量濃度測定，也適用于唑嘧磺草胺在環境水體中的殘留測定。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

液質聯用儀：Agilent 1290-6470A，具有AJS ESI離子源，Masshunter 數據采集、定性分析、定量分析工作站；梅特勒-托利多XSE205DU 型電子分析天平；Merck KGaA 色譜純乙腈；去離子水；唑嘧磺草胺標準物質：含量=99.4%（SWARDA Biochemical Inc）；唑嘧磺草胺原藥：含量98.0%；Smart and Barko培養基配制配方如表1。

表1 Smart and Barko 培養基配方

1.2 儀器操作條件

1.2.1 液相色譜操作條件

流動相：乙腈-0.1%甲酸水（體積比30∶70），柱溫：40 ℃，流速：0.3 mL·min-1，進樣體積：3.0 μL，色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）。

1.2.2 質譜操作條件

離子源參數：正離子模式；干燥氣：N2；干燥氣溫度：300 ℃；干燥氣流速：5 L·min-1；鞘氣：N2；鞘氣溫度：300 ℃；鞘氣流速：11 L·min-1；霧化器壓力（Nebulizer）：45 psi；噴嘴電壓：500 V；毛細管電壓（Capillary）：+3 500 V；監測模式：MRM，離子采集參數見表2。

表2 MRM 離子采集參數

上述液相-質譜操作條件是典型的的操作參數，可根據不同的儀器特點，做出適當調整，以期獲得最佳效果，唑嘧磺草胺標準品典型色譜圖見圖1。

圖1 唑嘧磺草胺標準品典型色譜圖

1.3 實驗步驟

1.3.1 標樣溶液的配制

稱取唑嘧磺草胺標樣0.010 7 g 置于100.0 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，得唑嘧磺草胺濃度為106.36 mg·L-1的標樣儲備液，用Smart and B a r k o 培養基將唑嘧磺草胺稀釋成濃度為53.18 μg·L-1的標準使用液。

1.3.2 唑嘧磺草胺工作液的配制

吸取適當體積的標準使用液，再用培養基稀釋一系列濃度為21.27、10.64、4.25、2.13、1.06、0.43、0.21、0.106 μg·L-1的唑嘧磺草胺工作溶液（采用的是基質配標的方法）。

1.3.3 樣品處理

用Smart and Barko 培養基配制準確濃度為4.51 μg·L-1唑嘧磺草胺試樣溶液，過膜后，取5 mL置于10 mL 試管中，加入5 mL 培養基配制的準確濃度為10.18 μg·L-1唑嘧磺草胺標樣溶液，搖勻，平行5 次。按1.2 儀器操作條件進行測試。

1.3.4 測定

選取0.21～21.27 μg·L-1的工作溶液用于制作校正曲線，濃度為2.13 μg·L-1的唑嘧磺草胺標液用于精密度測定，0.106 μg·L-1的唑嘧磺草胺標液用于檢出限和定量限實驗。

1.3.5 計算

本方法采用外標法對唑嘧磺草胺進行定量計算，工作曲線公式為：

其中：y—色譜峰響應值；

x—唑嘧磺草胺的濃度；

α—工作曲線的斜率；

b—工作曲線的截距。

2 結果與討論

2.1 線性相關性測定

在1.2 的液相色譜條件下，將1.3.2 中的標準工作溶液上機分析，分析結果見表3。

表3 線性相關性測定結果

結果顯示當唑嘧磺草胺在質量濃度 0.21～21.27 μg·L-1范圍時，濃度與響應呈良好線性關系，得到唑嘧磺草胺的線性回歸方程為y=314.10x+16.41，線性相關系數R2為0.999；以唑嘧磺草胺質量濃度為橫坐標、響應為縱坐標繪制標準曲線，見圖2。

圖2 唑嘧磺草胺線性關系曲線

2.2 分析方法的精密度

取2.13 μg·L-1的唑嘧磺草胺工作溶液用于方法精密度試驗，在1.2 的液相色譜條件下重復分析6 次，分析結果見表4。RSD（保留時間）＝0.23%，RSD（響應）＝1.23%，滿足定性分析和定量分析的基本要求。

表4 分析方法的精密度測定結果

2.3 檢出限和定量限

選取0.106 μg·L-1的唑嘧磺草胺工作溶液用于檢出限和定量限試驗，在1.2 的液相色譜條件下平行分析6 次，分析結果見表5。由信噪比（S/N）計算出檢出限（LOD=3×分析濃度/S/N）和定量限（LOQ=10×分析濃度/S/N），6 次分析平均結果的LOD＝0.024 μg·L-1，LOQ＝0.079 μg·L-1。

表5 分析方法的精密度測定結果

2.4 加標回收率試驗

用Smart and Barko 培養基配制準確質量濃度為4.51 μg·L-1唑嘧磺草胺試樣溶液，過膜后，取5 mL置于10 mL 試管中，加入5 mL 培養基配制的質量濃度為10.18 μg·L-1唑嘧磺草胺標樣溶液，搖勻，平行5 次。按1.2 儀器操作條件進行測試，唑嘧磺草胺在培養基中的平均加標回收率為105.76%，說明該方法有良好的準確度，滿足實驗要求，分析結果見表6。

表6 回收率試驗結果

3 結 論

本試驗建立了一種測定水體基質中唑嘧磺草胺質量濃度的高效液相色譜串聯質譜分析方法，該方法操作簡單，擁有良好的線性關系、精密度和回收率，檢出限和定量限也較低，適用于原藥和復配制劑中唑嘧磺草胺在進行環境影響或環境毒理評價時的質量濃度測定。