銀杏達莫注射液制備工藝優化研究

馬海霞，楊廣安，廖大敏，譚琪明，羅杰，2

（1.銅仁職業技術學院，貴州 銅仁 554300;2.銅仁市藥膳產業工程技術研究中心，貴州 銅仁 554300）

銀杏達莫注射液是臨床上用于治療心腦血管疾病的復方制劑，主要有效成分有銀杏葉提取物（GBE）和雙嘧達莫兩種成分，其中GBE 含有較高的總黃酮醇苷、萜類內酯等有效成分[1]，且總黃酮、總萜內酯含量要符合藥典要求，銀杏總黃酮對心腦血管疾病有著重要的作用，可以擴張冠脈血管、腦血管，改善腦缺血，改善患者記憶及清除自由基等功能[2-3]。雙嘧達莫具有抑制血小板聚集功效，高濃度（50 μg·mL-1）還可抑制血小板釋放。銀杏達莫臨床上用于抗血小板聚集、預防和治療動脈硬化及高血壓引起的冠狀動脈供血不足、心絞痛、心肌梗塞，如腦缺血，腦供血不足，腦部栓塞，腦梗，冠心病等疾病，是心腦血管及外周循環障礙的有效治療藥之一[4]。且隨著銀杏達莫注射液臨床應用越來越廣泛，數據表明其不良反應較多，尤其是中老年人群比例較高[5-7]。

注射劑是指藥物制成的供注入體內的無菌溶液(包括乳濁液和混懸液)以及供臨用前配成溶液或混懸液的無菌粉末或濃溶液。注射劑是注射使用，要求相對嚴格，但注射劑研制過程和生產過程相對比較復雜，安全性及患者機體適應性差，成本較高。目前銀杏達莫相關制劑如銀杏達莫凍干粉針劑、分散片、注射液等制備工藝研究較少，尤其是注射用的銀杏達莫制備工藝更是相對較少，銀杏達莫注射液生產廠家不同，則生產工藝并不完全相同[8-10]。本實驗中，對注射液溶媒、助溶劑、抗氧化劑、活性炭吸附作用、注射液pH 值選擇等進行了工藝優化研究，處方篩選以安全合理、質量穩定可控為原則，為大生產提供可靠理論依據。

1 實驗儀器與材料

1.1 實驗儀器

島津高效液相色譜儀（LC-20AT 二元泵、手動進樣器、SPD-M20A- 二極管陣列檢測器、CTO-10AS-柱溫箱、LC solution-工作站，日本島津公司）；InertsilRODS-3 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；電子天平（AL204-IC，上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；超聲儀（SG1200HE，上海冠特超聲儀器有限公司）；旋轉蒸發儀（IKAR RV 05 basic）；水浴鍋（IKAR HB 05.06 cn）；SZ-93 自動雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）；pH 計（上海儀電科學儀器股份有限公司）；澄明度檢測儀（天津博宇偉業科技有限公司）；紫外分光光度計（上海儀電分析儀器有限公司）；一次性針頭濾器（0.45 μm）；一次性使用無菌注射器等。

1.2 原料與試劑

色譜純乙腈（TEDIA company）；分析純丙二醇、吐溫-80、無水乙醇（成都金山化學試劑有限公司）；分析純硫酸、鹽酸、磷酸二氫鈉、磷酸、活性炭（天津市富宇精細化工有限公司）；雙蒸水（自制）；枸櫞酸、焦亞硫酸鈉、抗壞血酸（分析純，成都金山化學試劑有限公司）；銀杏葉提取物（水溶性銀杏葉提取物由貴州省生化工程中心提供、普通銀杏葉提取物為市售）；雙嘧達莫（中國藥品生物制品檢定研究所）；其他試劑均為分析純。

2 原料藥銀杏葉提取物的篩選

2.1 原料藥

水溶性銀杏葉提取物、普通銀杏葉提取物。

2.2 篩選結果

稱定水溶性銀杏葉提取物與普通銀杏葉提取物各1.0 g 放到試管中，加10 mL 注射用水，充分振搖均勻，高壓滅菌，溫度121 ℃，30 min，對比，觀察滅菌前后制備的銀杏達莫注射液是否澄清，其結果記錄如表1。

表1 滅菌前后溶液澄清度觀察

結果表明：水溶性銀杏葉提取物滅菌前后，溶液均澄清，無混濁；普通銀杏葉提取物，滅菌前后均表現不同程度的混濁，除此之外，水溶性銀杏葉提取物具有低銀杏酸、低殘渣，且蛋白質及鞣質去除均符合針劑要求，因此本實驗研究選擇水溶性銀杏葉提取物為原料[11]。

3 處方工藝

本實驗中，經多次小試試驗試制，優化為以下處方（見表2）：

表2 銀杏達莫注射液制備處方優化結果

選擇水溶性銀杏葉提取物為原料；注射用水為溶媒；1,2-丙二醇為助溶劑；焦亞硫酸鈉為抗氧化劑；稀氫氧化鈉/鹽酸溶液調節溶液pH 值；活性炭吸附熱原，脫色助濾。

3.1 注射液溶媒的選擇

本實驗，對注射用水、5%、10%葡萄糖溶液、0.9%氯化鈉溶液為注射液溶媒進行篩選。通過對比注射液外觀、pH 值、吸光度A 值等確定最佳溶媒。吸光度測定：以含5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液做空白，于200～400 nm掃描，結果表明銀杏達莫注射液在波長為243 nm處有最大吸收，故選擇243 nm 為測定波長。于0、1、2、3、4、5 h 時分別對各供試品測定A 值，測3次取平均值，以0 h 各供試品溶液在243 nm 處的吸光度為100%，計算銀杏達莫注射液在1、2、3、4、5 h 時的相對吸光度。注射液的外觀均為棕黃色、其pH 值及吸光度等變化情況記錄如表3。

表3 不同溶媒的相對吸光度隨時間變化情況

表4 不同溶媒的pH 值隨時間變化情況

由表可知銀杏達莫注射液溶媒為水時，注射液pH 值、吸光度5 h 內均無明顯變化，而溶媒為5%、10%葡萄糖、0.9%氯化鈉溶液時，注射液pH 值、吸光度5 h 內變化較大，注射液穩定性下降。

3.2 注射液助溶劑的選擇

本實驗中分別考察了常用的三種助溶劑：吐溫-80、乙醇、丙二醇，對比銀杏達莫注射液總黃酮、雙嘧達莫含量、外觀形狀、穩定性等情況分析，結果如表5。

表5 不同助溶劑對銀杏總黃酮和雙嘧達莫含量影響

結果發現三者均能使銀杏葉提取物在水中澄清，溶解度增加。但由于吐溫-80 具有降壓與輕微的溶血作用，影響注射液的臨床應用；乙醇具有易揮發性特點，對肌肉、血管刺激性大，同時也影響了注射液的再溶解性，綜合考慮患者安全性及順應性[12]，故選擇1,2-丙二醇為助溶劑。

3.3 注射液抗氧化劑的優化

查閱文獻，篩選亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、抗壞血酸三種抗氧化劑。對比發現，注射液滅菌前后，結果如表6。

表6 不同抗氧化劑滅菌前后含量影響

結果表明三種抗氧化劑對注射液棕黃色澄清液體的物理外觀無影響，其中焦亞硫酸鈉對有效成分雙嘧達莫、黃酮和內酯含量變化影響不大，并且注射液穩定性好，故選擇焦亞硫酸鈉作為注射液的抗氧化劑。

3.4 活性炭吸附試驗

生產過程中須采取有效措施，避免熱原對注射液的影響，保證產品質量及用藥安全。活性炭有吸附熱原和有色物質的作用，加入適量活性炭可以脫色助濾、提高產品澄明度，在制藥企業中被廣泛采用。

3.5 注射液pH 值的研究

按照上述優化處方工藝配制銀杏達莫注射液，用稀NaOH/HCl 調節pH 值分別為4.0、4.2、4.3、4.5、5.0、5.5，滅菌（121 ℃、30 min），考察滅菌前后總黃酮、雙嘧達莫含量、外觀性狀的影響，結果如表7。

表7 不同pH 值（4.0～5.5）對制劑影響

由表可知：該制劑在偏酸環境下較穩定，pH 值在5.5 時溶液中有沉淀產生，溶液變渾濁。pH 值為4.2～4.3 時，注射液澄明度良好，同時對總黃酮、雙嘧達莫含量影響最小。因此，確定最佳pH 值在

4.2～4 .3。

3.6 優化制備工藝

稱定水溶性銀杏葉提取物（相當于銀杏總黃酮1.0 g），加400 mL 丙二醇加熱溶解得銀杏葉提取物溶液；另稱定雙嘧達莫0.4 g，加枸櫞酸2.0 g 與適量注射用水加熱溶解后，緩慢加入上述銀杏葉提取物溶液，攪拌均勻，加入1.0 g 焦亞硫酸鈉，攪拌溶解，加入注射用水至足量，稀NaOH/HCl 溶液調溶液pH 值至4.21，加入0.1 g 活性炭粉末，于70 ℃水浴攪拌20 min，過濾脫炭，121 ℃，滅菌30 min，取出，放冷，加入安瓿瓶中，安瓿瓶密封好，121 ℃，滅菌30 min，即得。

4 小結與討論

1）相對普通銀杏葉提取物，水溶性銀杏葉提取物水溶性更佳，且經過降鞣質工藝處理的，鞣質雜質更低。水溶性銀杏葉提取物總黃酮和萜內酯含量均符合藥典要求，尤其是總黃酮含量明顯高于普通市售銀杏葉提取物[13]。

2）銀杏葉提取物易溶于水，但在酸性條件下溶解性差；雙嘧達莫難溶于水，易溶于稀酸，但pH值太低，銀杏葉提取物易析出。經查文獻及多次試驗發現，通過加入少量枸櫞酸調節pH 值控制在4.0～5.0 內，使兩藥溶解，且此范圍內注射液穩定性良好。

3）多次小試試驗發現銀杏達莫注射液與5%、10%的葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液配伍后，放置時間超過3 h，配伍液的性狀、pH 值、不溶性微粒及吸光度等變化較大，溶液穩定性下降，因此銀杏達莫注射液與以上溶液配伍后，需在3 h內使用。

4）吐溫-80 為助溶劑，但因其具有降壓與輕微的溶血作用，在本實驗中應慎用。乙醇易揮發，且對血管具有刺激性。因此該優化處方中選擇丙二醇為助溶劑。此外枸櫞酸用于調節酸性環境，焦亞硫酸鈉作為抗氧化劑，稀氫氧化鈉/鹽酸溶液調節pH 值。