血清8-羥基脫氧鳥苷、星形膠質源性蛋白B表達與顱內動脈瘤夾閉術后血管痙攣的相關性分析

馬志君，吉潔，呼鐵民，王維興，張繼偉，田甜

顱內動脈瘤是神經外科常見腦血管病，指顱內動脈血管異常改變，血管壁形成異常膨出突起樣瘤，其在腦血管病中發病率居第三位，一旦治療不及時導致瘤體破裂出血死亡率約30%，給人類的生命健康帶來嚴重威脅［1-2］。目前顱內動脈瘤夾閉術是臨床主要治療方法，但術后易并發腦血管痙攣（cerebral vasospasm，CVS），引起嚴重的腦組織缺血氧化，其是病人重殘或死亡主要原因［3-4］。目前臨床缺乏診斷CVS的有效生物學指標，因此探尋特異、可靠指標早期預測CVS的發生，對降低顱內動脈瘤病人術后CVS的發生率及死亡率在臨床有重要意義。8-羥基脫氧鳥苷（8-hydroxy-2 deoxyguanosine，8OHdG）是DNA氧化損傷主要標志物，與腦缺血/再灌注損傷關系密切［5］。星形膠質源性蛋白B（S100calcium binding protein B，S100B）作為神經營養因子在正常腦組織中參與神經組織修復與再生，當缺血、出血等腦組織損傷時，其血清水平升高可作為判斷腦組織損傷嚴重程度的標志物［6］。孫廣衛等［7］研究發現，顯微外科手術治療后顱內動脈瘤病人血清S100B水平顯著低于治療前，且預后良好組病人血清S100B水平顯著低于預后不良組病人，提示血清S100B水平對判斷病人預后有重要輔助意義。然而有關顱內動脈瘤病人夾閉術后血清8OHdG、S100B水平與CVS的關系鮮有報道，因此本研究探討血清8OHdG、S100B表達與顱內動脈瘤夾閉術后CVS的相關性，以期為臨床尋找診斷CVS的有效生物學指標，采取措施進行干預以降低術后CVS的發生率及死亡率提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年5月至2019年5月承德醫學院附屬醫院收治的顱內動脈瘤病人190例為研究對象，男112例，女78例，年齡范圍40～81歲，年齡（60.27±9.95）歲。按Hunt-Hess分級法［8］對術前病人病情進行分級，Ⅰ～Ⅱ級94例，Ⅲ～Ⅳ級96例。納入標準：（1）所有病人均符合《王忠誠神經外科學》中顱內動脈瘤的診斷標準［9］；（2）術前均經頭頸段CT成像（CAT）或者全腦血管造影（DSA）確診為顱內動脈瘤并行開顱顯微鏡下顱內動脈瘤夾閉手術病人；（3）發病72 h內手術者；（4）術前檢查均無其他神經系統疾病如癲癇、偏癱、失語者。排除標準：（1）嚴重心臟、肝臟、腎臟功能不全者；（2）臨床資料不完整者；（3）妊娠期、哺乳期婦女；（4）嚴重精神病者、過敏體質等病人；（5）凝血功能異常者；（6）免疫系統疾病、感染性疾病者；（7）手術禁忌證、腦外傷或腦梗死病人。病人或其近親屬知情同意，本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 方法

1.2.1 CVS診斷標準及評定方法CVS診斷標準［10］：（1）術后意識障礙或局灶性體征比術前加重；（2）出現新的神經系統體征（如偏癱、失語等）；（3）顱內壓升高；（4）多普勒超聲血流掃描顯示大腦前、中動脈血流速度≥120 cm/s，后動脈血流速度≥90 cm/s。

CVS評定方法［11］：術后4 d行DSA檢查，測量腦中動脈（M1、M2段）、前動脈（A1、A2段）及血管最狹窄處直徑，根據健康人腦血管直徑作為基準，評估CVS嚴重程度。無CVS：病人腦血管直徑與正常腦血管直徑相比，減少度＜10%；輕度CVS：10%≤減少度＜35%；中度CVS：35%≤減少度＜70%；重度CVS：70%≤減少度＜100%。

1.2.2 血清8OHdG、S100B水平檢測 分別于術前1 d、術后3 d采集病人空腹肘靜脈血5 mL，離心10 min（3 000 r/min），取上清液并密封后，保存于-80℃冰箱待測。測定樣品前，將其置于室溫或常溫水中復溶并搖勻。均采用酶聯免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法測定所有受試者血清8OHdG、S100B水平，試劑（北京百奧萊博科技有限公司，貨號ARB11575、SEA480Hu-1）檢測方案均參照說明書嚴格進行操作。

1.3 統計學方法采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據處理，計量資料以表示，兩組比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對樣本t檢驗，多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用SNK-q檢驗。計數資料以例（%）表示，采用χ2檢驗。采用向前逐步回歸變量篩選方法（Forward：LR法）進行二元logistic回歸分析，篩選影響顱內動脈瘤病人夾閉術后CVS的危險因素；繪制受試者工作特征曲線（receiver operator characteristic，ROC）曲線評價血清8OHdG、S100B水平對顱內動脈瘤病人夾閉術后CVS的診斷價值。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同程度CVS病人顱內動脈瘤夾閉術前、術后血清8OHdG、S100B水平比較術前，無CVS組病人與CVS組病人血清8OHdG、S100B水平差異無統計學意義（P＞0.05），術后，兩組病人血清8OHdG、S100B水平均低于術前（P＜0.05），且CVS組病人血清8OHdG、S100B水平顯著高于無CVS組病人（P＜0.05）。見表1。

表1 無CVS組與CVS組病人顱內動脈瘤夾閉術前、術后血清8OHdG、S100B水平比較/

表1 無CVS組與CVS組病人顱內動脈瘤夾閉術前、術后血清8OHdG、S100B水平比較/

注：8OHdG為8-羥基脫氧鳥苷，S100B為星形膠質源性蛋白B。

組別無CVS組術前術后t，P值CVS組術前術后t，P值兩組比較t，P值術前術后例數43 147 8OHdG/（ng/L）653.66±200.03 223.78±33.66 13.90，＜0.001 655.75±202.61 421.43±113.21 12.24，＜0.001 0.06，0.952 11.28，＜0.001 S100B/（μg/L）1.96±0.62 0.76±0.21 12.02，＜0.001 1.92±0.60 1.01±0.32 16.23，＜0.001 0.38，0.703 4.82，＜0.001

進一步對不同程度CVS組間比較顯示，術前不同程度CVS組病人血清8OHdG、S100B水平差異無統計學意義（P＞0.05），術后，不同程度CVS組病人血清8OHdG、S100B水平均明顯低于術前，且中度CVS組、重度CVS組病人血清8OHdG、S100B水平明顯高于輕度CVS組（均P＜0.05）；重度CVS組病人血清8OHdG、S100B水平明顯高于中度CVS組（P＜0.05）。見表2。

表2 不同程度CVS病人顱內動脈瘤夾閉術前、術后血清8OHdG、S100B水平比較/

表2 不同程度CVS病人顱內動脈瘤夾閉術前、術后血清8OHdG、S100B水平比較/

注：8OHdG為8-羥基脫氧鳥苷，S100B為星形膠質源性蛋白B。①與輕度CVS組比較，P＜0.05。②與中度CVS組比較，P＜0.05。

組別輕度CVS組術前術后t，P值中度CVS組術前術后t，P值重度CVS組術前術后t，P值三組比較F，P值術前術后例數52 57 38 8OHdG/（ng/L）658.32±201.15 328.37±67.75 11.21，＜0.001 657.65±203.11 436.53±119.21①7.09，＜0.001 651.28±203.57 499.39±152.67①②3.68，＜0.001 0.02，0.985 986.92，＜0.001 S100B/（μg/L）1.89±0.60 1.01±0.39 8.87，＜0.001 1.92±0.59 1.30±0.45①6.31，＜0.001 1.95±0.63 1.55±0.52①②3.02，0.003 0.11，0.896 541.66，＜0.001

2.2 顱內動脈瘤夾閉術后不同程度CVS病人一般資料比較無CVS組病人與CVS組病人性別、年齡、體質量指數（BMI）、飲酒、吸煙一般資料差異無統計學意義（P＞0.05），Hunt-Hess分級差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 顱內動脈瘤夾閉術后無CVS組與CVS組病人一般資料比較

進一步對不同程度CVS組間比較顯示，不同程度CVS病人性別、年齡、BMI、飲酒、吸煙一般資料差異無統計學意義（P＞0.05），Hunt-Hess分級差異顯著（P＜0.05）。見表4。

表4 顱內動脈瘤夾閉術后不同程度CVS病人一般資料比較

2.3 二元logistic回歸分析顱內動脈瘤夾閉術后CVS的危險因素分析以顱內動脈瘤夾閉術后病人是否發生CVS為因變量，以單因素分析中差異有統計學意義的Hunt-Hess分級（Ⅰ～Ⅱ級比Ⅲ～Ⅳ級）、8OHdG、S100B水平為自變量，進行二元logistic回歸分析。結果顯示，Hunt-Hess分級Ⅲ～Ⅳ級、血清8OHdG、S100B水平高表達是顱內動脈瘤夾閉術后病人發生CVS的危險因素（P＜0.05），見表5。

表5 顱內動脈瘤夾閉術后CVS 147開的二元logistic回歸分析

2.4 顱內動脈瘤夾閉術后病人血清8OHdG、S100B水平對顱內動脈瘤夾閉術后病人發生CVS的診斷價值分析ROC曲線分析血清8OHdG、S100B及二者聯合對顱內動脈瘤夾閉術后病人發生CVS的診斷價值，見圖1，表6。

表6 血清8OHdG、S100B及二者聯合檢測對顱內動脈瘤夾閉術后病人發生CVS的診斷價值結果

3 討論

顱內動脈瘤是多種因素導致的顱內動脈血管壁結構發生異常改變，在血流沖擊作用下，血管壁異常處形成的瘤狀突起。臨床多選擇開顱夾閉術治療顱內動脈瘤，但術后病人極易發生并發癥影響預后，其中術后CVS是顱內動脈瘤開顱夾閉術后最常見并發癥，研究表明，氧化應激在CVS中扮演著重要作色，CVS病人顱內動脈持續處于收縮狀態，使血管內皮細胞、平滑肌細胞超微結構發生異常，血腦屏障遭到破壞，進而引起局部腦組織缺血缺氧性損傷，加重血管氧化應激損傷，是最終導致病人死亡的主要原因［12］。

8OHdG是活性氧自由基如羥自由基、單線態氧等攻擊DNA分子中的鳥嘌呤堿基第8位碳原子而產生的一種氧化性加合物，與腦血管疾病氧化應激損傷有關，8OHdG水平越高表明氧化應激損傷越嚴重［13］。肖剛等［14］研究發現，蛛網膜下腔出血模型組大鼠腦組織中8OHdG水平顯著高于假手術組，而甘草甜素藥物低、中、高劑量組蛛網膜下腔出血大鼠腦組織中8OHdG水平顯著低于模型組，呈劑量依賴性，且提示甘草甜素可通過降低氧化應激反應改善大鼠蛛網膜下腔出血后血腦屏障損傷。本研究結果顯示，術后不同程度CVS病人血清8OHdG水平均明顯低于術前，且與無CVS組比較，不同程度CVS組顱內動脈瘤夾閉術病人血清8OHdG水平明顯升高，且隨嚴重程度加深而不斷升高。提示血清8OHdG水平異常高表達可能與顱內動脈瘤夾閉術后病人發生CVS關系密切。

S100B是神經組織蛋白質家族一員，特異性存在于中樞神經膠質細胞、星型細胞等，是腦特異性蛋白，在缺血性腦損傷早期，由壞死小膠質細胞釋放到腦脊液中，透過血腦屏障到達血液［15-16］。李舜等［17］研究發現，開顱夾閉術病人術后神經功能損傷有所改善，血清S100B顯著低于術前，血清S100B水平下降與神經功能損傷改善關系密切。本研究結果顯示，顱內動脈瘤病人夾閉術后，不同程度CVS組病人血清S100B水平均明顯低于術前，且S100B水平降低程度與CVS程度負相關，即CVS嚴重者術后S100B水平降低幅度小。提示血清S100B水平異常高表達可能與顱內動脈瘤夾閉術后病人發生CVS關系密切。原因可能與病人血腦屏障遭到破壞，局部腦組織缺血缺氧性損傷，壞死小膠質細胞釋放的S100B透過血腦屏障到達血液有關。Hunt-Hess分級法是對原發性蛛網膜下腔出血的分級法，一般采用其對動脈瘤性原發性蛛網膜下腔出血的臨床狀態進行分級，評估病人病情嚴重程度，評級越高，入院時病人病情越危重［18-19］。本研究分析病人一般資料發現，CVS程度高病人Hunt-Hess分級Ⅲ～Ⅳ級病人比例高。說明Hunt-Hess分級Ⅲ～Ⅳ級病人開顱夾閉術后發生CVS風險較大。二元logistic回歸分析結果顯示，Hunt-Hess分級Ⅲ～Ⅳ級、血清8OHdG、S100B水平高表達是顱內動脈瘤夾閉術后病人發生CVS的危險因素。提示臨床應盡早發現并確診顱內動脈瘤，并第一時間開展手術治療爭取更好的預后，且可以通過監測血清8OHdG、S100B水平評估CVS，及早采取措施進行干預以改善預后，提高病人生存質量。本研究ROC曲線顯示，血清8OHdG、S100B水平診斷顱內動脈瘤夾閉術后病人發生CVS的ROC曲線下面積AUC分別為0.87、0.86，二者聯合檢測診斷AUC為0.95。說明血清8OHdG、S100B水平聯合檢測對顱內動脈瘤夾閉術后病人是否發生CVS有較高診斷價值，可為臨床尋求可靠生物學指標早期診斷顱內動脈瘤夾閉術后病人是否發生CVS提供一定參考。

綜上所述，血清8OHdG、S100B水平異常高表達可能與顱內動脈瘤夾閉術后CVS發生發展有關，且二者聯合檢測對顱內動脈瘤夾閉術后病人是否發生CVS有較高診斷價值，可為臨床尋求可靠生物學指標早期診斷顱內動脈瘤夾閉術后病人是否發生CVS提供一定參考。然而本研究并未對二者在CVS中的具體作用機制進行闡述，后期應進行深入探討。