免疫組化技術和常規技術在腫瘤病理診斷中的效果比較分析

徐晶晶，黨啟華，孫興月，姜可，張順民

海軍軍醫大學第一附屬醫院病理科，上海 200433

隨著生活水平的提高，節奏的加快，促使腫瘤發病率呈直線上升趨勢，在早期無任何明顯表現，經臨床影像學診斷后多為中晚期，已錯失最佳治療機會。就此而言，在以往臨床上采取磁共振成像以及CT診斷等方式，雖具有一定的診斷效果，但是會經常性出現誤診率，隨著深入研究，采取不同檢查技術可出現不同診斷效果[1-2]。常見技術具有明確病灶分期、類型等優勢，但是對患者帶來嚴重不適感，不利于臨床推廣。對此，需要尋找一種安全可靠的診斷技術是至關重要的。本研究選取2019年2月—2021年2月海軍軍醫大學第一附屬醫院收治的135例疑似腫瘤患者作為研究對象，探討免疫組化技術和常規技術在腫瘤病理診斷中的效果。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇在本院接受治療的135例疑似腫瘤患者為本次研究對象，男69例，女66例，年齡49～72歲，平均（53.72±5.14）歲；病程1～13個月，平均（5.94±1.42）個月；體質量53～76 kg，平均（60.82±3.54）kg。其中，血管瘤18例，內膽管癌36例，轉移性腫瘤52例，肝癌29例。患者簽署知情同意書，本研究經醫學倫理委員同意。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①患者臨床資料齊全，且可追溯；②治療性好，能夠配合診斷。排除標準：①病情嚴重者，預期存活時間低于1個月者；②意識不清，無法配合本次研究者；③入院資料不全者；④不同意或中途退出本研究者。

1.3 方法

所有患者均進行免疫組化技術和常規技術診斷，操作如下。

1.3.1 常規技術①把切片置入蒸餾水中若干分鐘后取出，加入蘇木精水溶液進行染色若干分鐘；②在酸水及氨水中浸泡若干分鐘予以分色；③小注水流沖洗60 min后，采取蒸餾水蒸餾數分鐘；④分別加入規格為70%和90%乙醇予以脫水；⑤染色采取乙醇伊紅染色液，時間為120～180 s；⑥染色后的切片，采取純乙醇脫水，再經二甲苯使切片透明即可；⑦將已透明的切片滴上樹膠，蓋上蓋玻片封固；⑧待樹膠略干后，貼上標箋，切片標本即可使用。

1.3.2 免疫組化技術①將3μm常規石蠟切片脫蠟至水，采用PBS洗3 min，重復3次；②采用修復液，如pH 6.0檸檬酸、pH 9.0 EDTA等將常規石蠟切片修復，修復方式：高壓鍋熱修復，設置時間為10 min，取出后自然冷卻。③放入濃度為3%的過氧化氫浸泡10 min，來阻斷內源性過氧化物酶，采取PBS溶液清洗。④滴加特異性一抗，存放在4℃的環境過夜，采用PBS洗3 min，重復3次；⑤滴加酶標羊抗鼠/兔IgG多聚物,室溫孵育30 min，采用PBS洗3 min，重復3次；⑥采用DAB顯色6～8 min，用自來水清洗；⑦用蘇木素襯染本品1～2 min后,采取自來水清洗，隨后用鹽酸乙醇分化3～5 s，自來水返藍，系列乙醇脫水，中性樹膠封片。

1.4 觀察指標

①比較兩種技術的診斷正確率，以手術病理結果為金標準。

②兩種技術患者診斷滿意度情況。以調查問卷形式進行，問卷為百分制，高度滿意（患者在診斷過程無任何不適感，配合度高）、滿意（患者在診斷過程輕微不適感，總體而言配合度較高）、基本滿意（患者在診斷過程出現中度不適感，配合度一般）和不滿意（患者在診斷過程出現嚴重不適感，配合度差，致使中途終止診斷工作）4個版塊，滿意度=基本滿意率+滿意率+高滿意度率。

③比較兩種技術信任感評分、生理問題評分、心理顧慮評分：采取該院自行編制的問卷進行調查，采取百分制，患者分數越高，說明患者依從度好，對檢查方式影響小。

1.5 統計方法

采用SPSS 22.0統計學軟件處理數據，符合正態分布的計量資料用（±s）表示，采用t檢驗；計數資料用[n(%)]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種技術診斷正確率比較

免疫組化技術診斷正確率94.07%高于常規技術77.04%，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩種技術診斷正確率比較[n(%)]

2.2 兩種技術患者診斷滿意度比較

免疫組化技術患者診斷滿意度94.07%高于常規技術患者滿意度80.74%，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩種技術患者診斷滿意度比較[n(%)]

2.3 兩種技術患者診斷相關評分比較

免疫組化技術患者診斷相關評分中信任感、生理問題均高于常規技術患者，免疫組化技術患者心理顧慮評分低于常規技術患者，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩種技術患者診斷相關評分比較[(±s)，分]

表3 兩種技術患者診斷相關評分比較[(±s)，分]

方法常規技術（n=135）免疫組化技術（n=135）t值P值信任感81.65±1.95 92.55±2.06 91.773＜0.001生理問題70.84±1.64 89.45±1.98 50.169＜0.001心理顧慮88.20±1.48 73.48±2.45 44.539＜0.001

3 討論

腫瘤屬于臨床常見的一種疾病，分為良、惡性腫瘤，其中良性腫瘤不會對人體造成任何傷害，但是隨著病情的進展，可能會出現病變，轉化為惡性腫瘤[5-6]。而惡性腫瘤在早期無任何明顯病癥，往往是去醫院檢查時病情已發展至晚期，在很大程度上提高患者病死率，為掌握疾病進展，延長患者生命周期，需增加診斷精準概率。早期實施常規技術診斷，具有一定的診斷效果，但是諸多因素的影響，如灰塵污染、染液及試劑污染、染色失效等問題出現，從而影響診斷準確率。隨著近年來對于腫瘤病理診斷方式的研究及探討發現，采取免疫組化技術效果顯著，該診斷方式具有特異性強、敏感度高及定位準確等優勢。

本研究顯示，免疫組化技術診斷正確率94.07%高于常規技術77.04%（P＜0.05），這一研究與羅珂[7]研究中的免疫組化技術診斷正確率97.52%高于常規技術77.69%（P＜0.05）的結果一致。以往所采取常規技術雖有一定診斷效果，但仍有缺陷[8]。而免疫組化技術與特殊染色、電鏡觀察方面相似，被廣泛應用于診斷各種腫瘤疾病，然而免疫組化技術屬于輔助診斷技術，在進行此方法染色時，需要認真觀察HE切片，且以HE切片所觀察的結果作為診斷參考基礎，在依據抗體需求與實驗室規定來篩選抗體，以此來提高診斷精準率。在診斷過程中如果缺乏光鏡，需要通過觀察切片來了解患者腫瘤情況[9-10]。單單應用免疫組化技術來確認患者病理，很有可能會提高誤診率。在對其陽性結果判斷時，需要借助細胞形態學來判斷，通常采取免疫組化技術來辨別細胞的來源以及嚴重程度，形態學是每個腫瘤判斷的指標[11-12]。免疫組化展開病理診斷過程時，需要擇取20多種抗體進行診斷才能夠滿足臨床診斷標準，在抗體選擇過程中則要考慮成本的節約性，依據實際需要來選擇合適的抗體，抗體的特異性隨著免疫組化使用范圍的增大而增大[13-14]。由此可知，常規技術與免疫組化技術相比較，后者具有良好的臨床診斷價值，在實施診斷，依據患者腫瘤切片樣本抗原數量在腫瘤分狀態，來對抗原抗體實施定量定性以及定位研究工作[15-16]。

免疫組化技術患者診斷滿意度94.07%高于常規技術患者滿意度80.74%（P＜0.05），這一研究與石紅[17]研究中的研究組患者滿意度82.7%明顯高于對照組65.9（P＜0.05）的結果一致。由此可知將免疫組化技術應用在診斷腫瘤病理中診斷效果較為理想。通過本研究可知免疫組化技術各個層面優于常規技術，為了能夠進一步降低假陽性率，提高精準度，在進行免疫組化需要做好以下幾點避免不必要的錯誤出現：①組織固定：采取規格為10%中性緩沖甲醛固定液固定組織，固定時間長且不易脫落。②烤片：實施烤片時，要注意溫度的高低，通常一般情況下，將恒溫箱溫度調節至60～80℃之間，避免在溫度升高將組織片結構所破壞，影響診斷效果[18]。③抗原修復：抗原修復需要維持在8 min之內，且切片冷卻后，再實施染色時，進行反復染色需要采取蘇木精，避免顏色較濃影響最終診斷結果。④孵育：孵育過程中，避免液體浸染組織，需要確保液體均勻，降低假陰性率。⑤染色：組織染色時，切片從始至終保持濕潤狀態。

綜上所述，相對于常規技術，應用免疫組化技術于腫瘤病理診斷中效果顯著，提升診斷正確率，降低患者心理顧慮，增強其信任感。