艾草對肉雞抗氧化、免疫功能以及腸道菌群的影響

鄧聰聰，左 麗，曠年玲，石玉祥

（河北工程大學生命科學與食品工程學院，河北邯鄲 056000）

植物性飼料添加劑逐漸成為養殖戶的首選，廣泛應用于畜禽養殖，如中草藥、植物精油等[1-2]。在減抗、限抗的條件下，添加植物性飼料添加劑成為畜禽養殖業的關注點[3-5]。艾草又稱艾蒿，為菊科蒿屬，主要含有揮發油類、黃酮類、多糖類和三萜類等化學成分。

現代藥理研究顯示，艾草具有抗蟲、抗菌、抗病毒和抗癌等藥理作用[6-8]。隨著現代藥理學發展，艾草的更多藥理作用不斷被揭示，具有廣闊的應用前景[9-12]。基于此，本試驗主要探究艾草對肉雞抗氧化、免疫功能以及腸道菌群的影響，以期為后期艾草相關研究及其在肉雞養殖中的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.2 試劑與儀器

主要試劑：普通營養瓊脂培養基（北京索萊寶生物科技有限公司）、MRS 培養基（北京索萊寶生物科技有限公司）、碳酸鈣（北京化工廠）、生理鹽水（四川科倫藥業股份有限公司）等。

主要儀器：滅菌鍋（廈門致微儀器有限公司）、分析天平（常州奧豪斯儀器有限公司）、恒溫培養箱（力辰科技有限公司）、無菌操作臺（蘇州凈化設備有限公司）、高速冷凍離心機（北京京立離心機有限公司）等。

1.3 試驗設計

試驗選用120 只120 日齡羅斯308 肉雞，隨機分為3組，公、母各半，每組4個重復，每個重復10只雞。采用全自動3層籠養，常規飼養。對照組飼喂基礎日糧，試驗Ⅰ組飼喂基礎日糧加2%艾草，試驗Ⅱ組飼喂基礎日糧加4%艾草。試驗期30 d，每日記錄飼喂情況和試驗雞狀態。按照NRC（1994）營養標準配制的玉米-豆粕型基礎日糧，其原料組成及營養水平見表1。

表1 基礎日糧組成及營養水平Tab.1 Composition and nutritional composition of basel diet

1.4 測定指標及方法

試驗結束后，每個重復隨機挑選3 只肉雞，心臟采血，-20 ℃儲存，解剖取其盲腸，做好標記放入液氮，轉至-80 ℃冰箱保存。

1.4.1 血清抗氧化指標測定

血清樣品完全融化，測定丙二醛（MDA）含量與超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性以及總抗氧化能力（T-AOC）等血清抗氧化指標。按照試劑盒內說明書進行操作，試劑盒購自南京建成生物公司。

1.4.2 血清免疫指標測定

血清樣品完全融化，測定白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-6（IL-6）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白M（IgM）含量等血清免疫指標。按照試劑盒內說明書進行操作，試劑盒購自南京建成生物公司。

第一，企業應該不斷弘揚工匠精神。對于高職院校現代學徒制而言，企業是其實施的主體，很大程度上做到了招生即招工，很多學生在的發展過程中，大多是在企業中度過的。所以，企業應該加大對自身文化的宣傳，以保證可以有效提升學生的工匠精神。比如：企業可播放一些視頻以及紀錄片等，加大工匠精神的宣傳力度，保證學生能夠將工匠精神的含義合理運用的實際工作和生活中，保證在提升自身水平和工作效率的同時，還可以為企業創造很大的利益。[2]

1.4.3 腸道菌群測定

采用混合平板計數法進行計數。

腸道總菌落計數：稱取一定量的盲腸內容物，倍比稀釋，選擇10-6、10-7、10-8等3個濃度，每個濃度各吸取100 μL 接種于營養瓊脂培養基，每個濃度3 個重復，37 ℃培養24 h，進行菌落計數。

乳酸菌計數：稱取一定量的盲腸內容物，倍比稀釋，選擇10-6、10-7、10-8等3個濃度，每個濃度各吸取100 μL于無菌培養皿中，加入50～55 ℃含碳酸鈣的MRS培養基，混勻，每個濃度3個重復，凝固后37 ℃培養48 h，進行菌落計數，僅計數溶鈣圈明顯菌落。

1.5 數據統計與分析

試驗數據采用SPSS 20.0 軟件進行單因素方差分析（One-way ANOVA），Duncan's 法進行多重比較。結果以“平均值±標準差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 艾草對肉雞血清抗氧化指標的影響（見表2）

由表2 可知，與對照組相比，各試驗組肉雞血清T-AOC 提高，GSH-Px 和CAT 活性增加，MDA 的含量有所降低，但差異均不顯著（P＞0.05）。試驗Ⅰ組肉雞血清中SOD活性顯著高于試驗Ⅱ組（P＜0.05），但兩試驗組與對照組相比差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 艾草對肉雞血清抗氧化指標的影響Tab.2 Effect of Artemisia argyi on serum antioxidant indexes of broilers

2.2 艾草對肉雞血清免疫指標的影響（見表3）

由表3 可知，與對照組相比，各試驗組肉雞血清IgG、IgA、IgM含量差異均不顯著（P＞0.05）。試驗Ⅱ組肉雞血清IL-2含量高于對照組，但差異不顯著（P＞0.05）。試驗Ⅱ組肉雞血清IL-1β、IL-6的含量顯著高于試驗Ⅰ組（P＜0.05），但兩試驗組與對照組相比差異均不顯著（P＞0.05）。

表3 艾草對肉雞血清免疫指標的影響Tab.3 Effect of Artemisia argyi on serum immune indexes of broilers

2.3 艾草對肉雞腸道菌群的影響（見表4）

由表4可知，與對照組相比，各試驗組肉雞盲腸的菌落總數和乳酸菌總數均顯著提高（P＜0.05）。試驗Ⅱ組肉雞盲腸的菌落總數和乳酸菌總數均顯著高于試驗Ⅰ組（P＜0.05）。

表4 艾草對肉雞腸道菌群的影響Tab.4 Effect of Artemisia argyi on intestinal flora of broilers單位：×108 CFU/mL

3 討論

3.1 艾草對肉雞血清抗氧化指標的影響

當機體受到病原菌入侵或呈亞健康狀態時，機體抗氧化能力減弱，出現氧化損傷[13]。抗氧化還原系統通過協調氧化與抗氧化之間的穩定性，進而降低自由基水平。當抗氧化還原系統中各種酶的活性升高時，即可有效地抑制自由基的生成和制止脂質過氧化。因此，SOD、T-AOC等指標常應用于評價抗氧化能力[14]。

張旭等[15]研究發現，在日糧中添加3% 艾草粉顯著提高了京粉1 號蛋雞血清CAT、GSH 的活性，增強了機體抗氧化能力。趙飛[16]在日糧中添加艾蒿水提物，結果發現，肉仔雞血清中MDA 含量顯著降低，各艾蒿水提物添加組肉雞的總抗氧化能力均有不同程度的升高。本試驗結果與前人研究結論基本一致，表明在日糧中添加艾草可提高肉雞血清中抗氧化能力，改善抗氧化功能。

3.2 艾草對肉雞血清免疫指標的影響

免疫功能在維護動物機體健康的方面發揮重要作用，而血清中的免疫球蛋白不僅能夠誘導機體產生體液免疫，還可抵制外界病原菌的入侵，提高機體免疫能力[2]。免疫球蛋白與抗原相結合，參與體液免疫，其含量直接反應機體免疫能力的強弱，主要包括IgG、IgA、IgM、免疫球蛋白E（IgE）等[17]。研究表明，禽類的免疫球蛋白有3種，即IgG、IgA、IgM[18]。IgG 在免疫應答中起到激活補體、中和多種毒素的作用。IgA 在正常血清中的含量僅次于IgG，分為血清型及分泌型，分泌型IgA是機體黏膜局部抗感染免疫的主要抗體。IgM是免疫應答中首先分泌的抗體，主要作用為防止菌血癥。

炎性因子也是免疫功能表現的一個類型。其中IL-2由Ⅰ型免疫細胞因子分泌，參與細胞免疫；IL-6 具有調節機體免疫應答和誘導細胞生長分化的作用；IL-1β 在免疫應答和組織修復中起到重要作用，能夠介導多種炎癥反應。曹振興等[19]研究發現，在日糧中添加艾蒿粉可提高肉仔雞血清中IgG、IgA、IgM的含量。Yang等[20]研究發現，在日糧中添加艾蒿黃酮可作為一種天然免疫調節劑，改善肉雞生長性能，提高免疫功能。Zhang等[21]研究發現，艾蒿多糖可促進免疫球蛋白（IgG 和IgM）、細胞因子（IL-1β 和IL-6）產生，對肉雞外周血白細胞起到調節作用，進而調節機體免疫功能。

3.3 艾草對肉雞腸道菌群的影響

腸道菌群是一個復雜的微生物群落，其代謝能力是肝臟的100倍。腸道菌群一般在人和動物出生后不久即可定植，其結構受遺傳、飲食、年齡和健康狀況的影響[22-24]。有益的菌群可通過增加腸道有益菌落數量和限制病原體侵入，維護腸道健康，參與代謝，如乳酸菌[25]。有研究發現，乳酸菌不僅能提高肉雞生產性能，還能夠穩定腸道微生態，提高消化道免疫系統[26]。江陽[27]研究發現，在日糧中添加不同劑量的艾蒿提純物飼喂肉仔雞可不同程度地增加盲腸中乳酸菌數量，改善菌群結構。牛壯[28]研究表明，添加不同劑量的艾蒿多糖可顯著降低盲腸大腸桿菌，并提高乳酸菌的數量。

本試驗結果顯示，盲腸中菌落總數以及乳酸菌數量隨艾草劑量增加而增加，與前人研究結論一致，且本試驗條件下以艾草添加量為4%效果最好。

4 結論

本試驗結果表明，在肉雞日糧中添加艾草可提高羅斯308肉雞血清抗氧化能力，增強了肉雞免疫力，改善了腸道菌群組成。在日糧中添加2%艾草對肉雞血清抗氧化指標和免疫指標影響較大；添加2%、4% 艾草對盲腸菌落總數和益生菌總數具有顯著影響，且以添加4%艾草影響最大。