一例大林羚腸毒血癥的診斷

鄭秉武 智 宇 李彥軍 丁玉林 高 雅 劉佳利 張承天 王金玲*

(1.呼和浩特市動物園，呼和浩特，010050；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，呼和浩特，010051；3.內(nèi)蒙古阿拉善右旗動物疫病預(yù)防控制中心，阿拉善右旗，737300；4.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動物疾病臨床診療技術(shù)重點實驗室，呼和浩特，010010)

腸毒血癥(entorotoxaemia)是由產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens，魏氏梭菌)所引起的家養(yǎng)動物、野生動物和人的一種急性致死性傳染病[1-2]。大林羚(Tragelaphusoryx)，也叫大羚羊，屬于林羚屬的反芻動物，分布于非洲南部、中部和東部，從南非北部至剛果民主共和國和肯尼亞均有分布。大林羚的棲息地主要是林地和稀樹草原，從沿海平原至山區(qū)，從半沙漠到降雨量相對較高的地區(qū)。目前，大林羚是野生動物園內(nèi)重要的觀賞動物，關(guān)于其疾病的報道只涉及創(chuàng)傷性蠅蛆病[3]、睪丸小結(jié)石、腫瘤病[4]、牛病毒性腹瀉[5-6]、心包黏液樣脂肪肉瘤[7]和眼內(nèi)線蟲病[8]，尚未有腸毒血癥的文獻報道。本研究通過多種方法確診了1例大林羚腸毒血癥的死亡病例，為大林羚腸毒血癥的診斷和防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

1只病死成年大林羚，由大青山野生動物園提供。6只6周齡昆明種小白鼠(SPF級)，購于斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司。

1.2 尸體剖檢

對病死大林羚進行系統(tǒng)尸體剖檢，觀察和記錄大體病變。剖檢過程中分別取心、肝、脾、肺和腎等各組織器官(1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm)，立即放入10%福爾馬林溶液中固定。

1.3 病理組織切片制備和觀察

對固定24 h的組織進行修塊，脫水、透明、石蠟包埋、切片(厚度為3 μm)、蘇木素-伊紅染色(HE)、封片和烤片后，顯微鏡下觀察。

1.4 觸片檢查

無菌環(huán)境下，在嚴(yán)重出血的小腸黏膜表面制備觸片，自然干燥，革蘭氏染色，油鏡下觀察。

1.5 小白鼠毒素試驗

取空腸血樣內(nèi)容物3 mL，加2倍生理鹽水稀釋后，3 000 r/min 離心5 min，取上清液，均勻分成2份，1份60 ℃加熱30 min，1份不加熱。取6只小白鼠，隨機分為2組，3只/組。2份上清液分別腹腔注射于1組小白鼠，1.2 mL/只，觀察結(jié)果至接種后24 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床病史

2016年8月31日晨，動物園僅存的1只15歲大林羚死于圈舍內(nèi)，死亡前1 d未出現(xiàn)任何臨床癥狀，于死亡當(dāng)日上午進行全面的尸體剖檢。

2.2 剖檢病變

尸體角弓反張(圖1A)，眼結(jié)膜和肛門黏膜輕度發(fā)紺。空腸出血性腸炎，腸壁變薄，局部腸管內(nèi)有較多血樣內(nèi)容物(圖1B)，腸黏膜呈彌漫性深紅色。十二指腸黏膜嚴(yán)重出血性腸炎，腸黏膜彌漫性暗紅色到黑紅色，腸腔內(nèi)充有大量血樣內(nèi)容物(圖1C)。皺胃黏膜充血呈紅色，黏膜面有大量出血性壞死灶。輕度腹腔積水，腹水呈淡黃色。心包腔內(nèi)積有較多淡黃色透明液體，左心室向心性肥大，心壁增厚明顯。肝臟和腎臟腫大，呈暗紅色至黑紅色。肺臟大面積呈暗紅色，質(zhì)度輕度變實，尖葉和心葉氣腫嚴(yán)重。全身淋巴結(jié)輕度腫大。其他組織器官無明顯眼觀病理變化。

2.3 組織病理學(xué)變化

十二指腸和空腸嚴(yán)重的出血性壞死性腸炎，整個腸黏膜層均發(fā)生壞死，呈均質(zhì)粉紅染(圖1D)，伴有大小不等的出血灶或彌漫性出血。大腸局部黏膜絨毛頂部上皮細胞壞死，肌層可見較多的中性粒細胞浸潤。壞死性皺胃炎，皺胃黏膜層水腫，局部胃黏膜在上1/3處壞死明顯，壁細胞變性明顯，可見散在壞死。中毒性肝損傷，肝淤血和水腫，狄氏腔顯現(xiàn)，肝細胞普遍小泡性脂肪變性和部分大泡性脂肪變性，肝細胞散在性壞死(圖1E)，肝小葉邊緣肝細胞壞死相對明顯。中毒性腎損傷，腎淤血，上皮細胞嚴(yán)重腫脹，呈明顯的顆粒變性和水泡變性，散在性壞死，細胞核濃縮(圖1F)。腎上腺髓質(zhì)腺上皮細胞多數(shù)腫脹，散在壞死。胰腺以整個腺胞為單位發(fā)生散在性壞死，壞死腺泡細胞胞漿紅染加深，核溶解消失。肺淤血，局部區(qū)域肺泡壁毛細血管內(nèi)可見較多中性粒細胞。其他組織器官不同程度充血和變質(zhì)。

圖1 大林羚病理結(jié)果

2.4 觸片檢查

產(chǎn)氣莢膜梭菌的菌體呈直桿狀，兩端鈍圓，單個或成雙，短鏈很少出現(xiàn)，革蘭氏染色陽性。無鞭毛，不運動。芽孢大而卵圓，位于菌體中央或近端，使菌體膨脹[2]。通過革蘭染色，在大林羚腸黏膜觸片上可見散在或成簇的單個或成雙的革蘭陽性粗大的桿菌，有的菌體中央已形成芽孢，與產(chǎn)氣莢膜梭菌形態(tài)一致(圖2)。

圖2 革蘭陽性粗大的產(chǎn)氣莢膜梭菌 (×1 000)

2.5 小白鼠毒素試驗

不加熱組小白鼠于接種后13～18 h全部死亡，加熱組小白鼠接種后24 h未見異常。試驗結(jié)果表明腸血樣內(nèi)容物有致死性毒素存在。

3 診斷

根據(jù)臨床病史、剖檢病變、組織病理學(xué)變化、觸片檢查和毒素試驗綜合診斷為大林羚腸毒血癥。

4 討論

家養(yǎng)反芻動物的腸毒血癥主要見于牛[9-10]、羊[9-12]和駱駝[13]等，野生反芻動物的腸毒血癥常見于鹿(Cervidae)[14]和羊駝(Vicugnapacos)[15-16]等，腸毒血癥還報道于豬[17]、馬[18]、貓科(Felidae)動物[19]、熊(Ursidae)[20]、狐貍(Vulpes)[21]、雞[22]、鴕鳥(Struthiocamelus)[23]和白鸛(Ciconiaciconia)[24]等。反芻動物腸毒血癥的臨床特點為發(fā)病急，死亡快，多數(shù)在沒有任何癥狀下突然死亡，生前有短暫的角弓反張、搐搦和昏迷等神經(jīng)癥狀[25]，具有證病意義的病變?yōu)槭改c和空腸嚴(yán)重的出血性或出血—壞死性腸炎，腸黏膜呈暗紅色或紫紅色血樣，腸腔內(nèi)有大量血樣內(nèi)容物，俗稱“血腸子病”。腎臟皮質(zhì)軟化而有波動感，嚴(yán)重病例質(zhì)軟如泥，因此本病又有“軟腎病”之稱[25]。腎的軟化程度取決于動物死后的剖檢時間，如果動物死后短時間內(nèi)剖檢，常見腎臟腫大，淤血；若尸體在10 h后剖檢，則腎臟皮質(zhì)很快自溶而軟化[16，25]。在出血性壞死性腸炎病變基礎(chǔ)上，中毒性肝損傷在反芻動物腸毒血癥時也具有特征性，肝臟表現(xiàn)肝淤血和水腫，肝細胞脂肪變性和散在性壞死，肝小葉邊緣肝細胞壞死相對明顯。

本研究中大林羚的十二指腸和空腸表現(xiàn)典型的出血性壞死性腸炎，與“血腸子病”病變相似。“軟腎病”的病變在本例不典型，只出現(xiàn)腎臟腫大，但組織病理學(xué)病變顯示腎小管上皮細胞普遍腫脹和散在性壞死。這是由于本研究中大林羚于死亡后2 h內(nèi)剖檢，腎臟無明顯“軟腎病”病變。為了預(yù)防野生動物園內(nèi)大林羚等動物腸毒血癥的發(fā)生，建議定期進行羊快疫、羊猝狙、羔羊痢疾和腸毒血癥三聯(lián)四防滅活疫苗免疫或定期在飼草料中添加磺胺咪片(按說明書用量)，1次/d，連續(xù)用藥3～5 d。