五味子藤總木脂素抗氧化活性研究

喬巍，郭娜，張穎智，崔玉海，魏淑梅，接偉光*

（1.黑龍江東方學院，黑龍江哈爾濱 150066；2.哈爾濱首智生物技術有限公司，黑龍江哈爾濱 150016）

五味子（Schisandra chinensis）作為一味傳統中藥材，主要入藥部位是其成熟果實。木脂素是廣泛分布在植物中的小分子量次生代謝產物，是五味子主要的活性物質，具有抗氧化、保肝、抗炎等作用。北五味子藤莖是五味子的干燥藤莖，經證實，五味子藤莖中存在有效成分——木脂素，可發揮與其果實相似的藥理作用。

抗氧化功能評價主要包括體內評價和體外評價。體外評價包括化學評價法和生物活性評價法，且已經形成系統的體系。化學評價法以其原理簡單、費用低廉、快速簡便等優勢廣泛應用于抗氧化活性物質的初篩階段，主要包括體外總抗氧化能力測定法（T-AOC）、清除各類活性氧自由基法（·OH、·O2-）、清除自由基法（DPPH法、ABTS法、ORAC法）。根據實驗材料及目的，本文選用化學評價法中具有代表性的總抗氧化能力試劑盒及對超氧陰離子自由基清除效果兩種方法評價五味子藤總木脂素抗氧化活性。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 儀器

BS124S分析天平，賽多利斯科學儀器有限公司；T6新世紀紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司。

1.1.2 試劑與材料

95%乙醇，分析純，天津市光復科技發展有限公司；總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒，鄭州和成新材料科技有限公司；VC對照品（批號：O19EB100374）、焦性沒食子酸（批號：C14A9C58726），上海源葉生物科技有限公司；三羥甲基氨基甲烷（批號：2020/11），北京博奧拓達科技有限公司。

五味子藤總木脂素固形物：原料為五味子藤，以95%乙醇為提取溶劑，通過加熱回流法在料液比1∶10、提取次數3次、提取時間5 h條件下提取制得粗提液，再經AB-8大孔樹脂在上樣濃度1.5 mg/mL、吸附速率2 BV/h、上樣量6 BV、95%濃度乙醇洗脫、洗脫速率2 BV/h、洗脫劑用量8 BV條件下純化后干燥制得（BV為樹脂床體積）。

1.2 方法

1.2.1 原理

（1）總抗氧化能力

Fe3+可以被樣品中的抗氧化物質還原成Fe2+，Fe2+可與菲啉類物質形成穩固的絡合物，通過紫外分光光度計進行測定[1-2]。

（2）超氧陰離子自由基清除力

鄰苯三酚在堿性條件下發生自氧化反應，能產生穩定濃度的·O2-和有色中間產物。由于自氧化的速率與·O2-的濃度相關，消除·O2-則抑制自氧化反應，阻止氧化產物的積累，因此可以通過測定某一波長吸光度值的線性積累評價受試樣品清除·O2-的能力[2-5]。

1.2.2 T-AOC測定

將總木脂素固形物配制成濃度為0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL的溶液，取上清液0.1 mL作為供試品溶液。配制濃度0.2 mg/mL的VC溶液作為對照品溶液。

按照T-AOC試劑盒（比色法）操作步驟，采用紫外分光光度法，在520 nm處測定各溶液吸光度值，每組實驗重復3次。以總抗氧化能力單位（U）為指標計算各濃度供試品溶液和對照品溶液的總抗氧化能力，如公式（1）。

式中，ODt和ODc分別為試劑盒中測定管和對照管吸光度；V1和V2分別為配置溶液總量和取樣量，mL；f為稀釋倍數；TA為總抗氧化能力，U/mg。

1.2.3 超氧陰離子自由基清除力測定

（1）分別標記空白管、對照管、VC對照管和0.05 mg/mL、0.10 mg/mL、0.20 mg/mL的3個濃度樣品管。空白管和對照管中加入4 mL蒸餾水，VC對照管加入0.2 mg/mL的VC對照品4 mL，樣品組各加入對應濃度的4 mL樣品溶液。（2）向（1）中各管加入0.1 mol/L的Tris-HCl緩沖溶液（pH=8.2）4.5 mL，25 ℃水浴20 min。（3）空白管加入0.5 mL蒸餾水，其余各管加入3 mmol/L鄰苯三酚溶液0.5 mL，充分振搖后立即測定320 nm處吸光度值，以空白管調零。每30 s測量1次，共10次，記錄時間和對應的吸光度值，每組實驗重復3次。（4）以時間t為橫坐標，吸光度值A為縱坐標繪制曲線，得回歸方程，直線斜率V為吸收速率。抑制率IC的計算方法如公式（2）所示。

1.2.4 統計分析

實驗結果使用SPSS 26.0軟件進行分析處理，P＜0.05為差異顯著，結果以均值±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 五味子藤總木脂素總抗氧化能力

五味子藤總木脂素總抗氧化能力測定結果見表1。由表1可知，隨著五味子藤總木脂素固形物濃度的增加，總抗氧化活性呈升高趨勢，各濃度的抗氧化活性具有顯著差異；與VC比較，五味子藤木脂素的抗氧化值約是同等濃度VC的1/5。

表1 五味子藤木脂素總抗氧化能力測試結果

2.2 五味子藤總木脂素對超氧陰離子自由基清除作用

五味子藤總木脂素對超氧陰離子自由基的清除作用見表2。由表2可知，隨著五味子藤總木脂素固形物濃度的增加，對鄰苯三酚自氧化產生的超氧陰離子自由基的抑制作用呈現上升趨勢，各濃度間抑制率具有顯著差異；同等濃度下，五味子藤木脂素固形物對超氧陰離子自由基的清除能力約是VC的1/4。

表2 超氧陰離子自由基清除效果匯總

3 結論

按照總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒（比色法）測定，五味子藤總木脂素固形物總抗氧化值約是同等濃度下VC的1/5；對超氧陰離子自由基的抑制作用約是同等濃度下VC的1/4，五味子藤總木脂素固形物具有一定的抗氧化活性。