終末期腎臟病血液透析患者血清LncRNA CASC15 LncRNA MALAT1表達及臨床意義

費冰茹， 周 惠， 王蘇雨， 莊 凌

(南京醫科大學附屬淮安第一醫院, 江蘇 淮安 223000)

慢性腎臟病(Chronic kidney disease，CKD)在全球屬于發病率高、死亡率高、疾病負擔高的慢性疾病，對公共衛生系統產生較大負擔[1]。當慢性腎臟病患者代謝產物和毒素無法排出時可進展至終末期腎臟病(End-stage renal disease，ESRD)階段，雖然腹膜透析或血液透析治療在一定程度上可延長患者預期壽命，但是目前仍缺乏有效的生物標志物，用于病情及預后的評估[2,3]。長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA，LncRNA)是一類長度超過200bp的非編碼RNA，近年來研究[4,5]不斷闡明了LncRNA參與遺傳性疾病、腫瘤、肝、腎疾病調控過程。目前研究[6]發現LncRNA存在多個細胞來源，在不同疾病中發揮多樣化生物調控作用，其中LncRNA CASC15被發現參與腎臟足細胞損傷過程，而敲低LncRNA MALAT1 則與急性腎損傷緩解有關；對接受血液透析治療的終末期腎臟病患者而言，其血清中LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達改變及其臨床意義尚不明確，本研究對此進行探討，現將結果報道如下。

1 對象與方法

1.1研究對象:選擇本院2019年1月至2020年12月開始規律透析治療終末期腎臟病患者為研究組。納入標準：①以CKD-MDRD公式計算估算的腎小球濾過率(Estimated glomerular filtration rate，eGFR)，符合KDIGO標準中CKD5期診斷。②首次在本院行血液透析且入院時病情穩定。③臨床資料完整。④>18周歲。排除標準：①合并惡性腫瘤。②合并嚴重感染性疾病。③透析治療史。④未完成隨訪。經篩選共納入終末期腎臟病患者62例，按照1∶1比例隨機選擇本院首次開始透析治療的CKD Ⅲ～Ⅳ期患者62例為對照組，研究組和對照組性別、年齡、原發疾病比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究納入對象均簽署知情同意書且研究設計嚴格遵循《赫爾辛基宣言》。

1.2臨床資料:①通過電子病歷系統獲取所有患者性別、年齡和原發疾病情況。②研究組均在首次開始透析前1d抽血，采用SYSMEX五分類全自動血球計數儀(日本希森美康)和Cobas c800全自動生化分析儀(美國羅氏公司)對血液標本中血肌酐(Serum creatinine，SCr)、尿酸(uric acid，UA)、eGFR、總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglycerides，TG)、尿素氮(Urea Nitrogen，BUN)、血紅蛋白、C反應蛋白(C reactive protein，CRP)、血鈣和血磷含量進行檢測。

1.3血清LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達檢測:研究組、對照組均在首次開始透析前1d抽取外周靜脈血3mL，常規分離血清后以Trizol法(日本TAKARA公司)提取外周血總RNA，以NanoDrop2000超微量分光光度計分析RNA純度及濃度，合格標本并按照逆轉錄試劑盒說明書規定步驟將其逆轉錄為cDNA，保存于-80℃備用。按照文獻[7,8]中所用LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1引物序列合成相關引物，并使用GAPDH作為內參基因，引物合成由南京金斯瑞生物公司合成。以實時熒光定量聚合酶鏈式反應(Real-time Quantitive Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)基于SYBR Green法擴增目的序列，反應體系為25μL，反應條件設置為：預變性95℃ 3min，95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 36s，35個循環結束后，以2-ΔΔct法計算LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1相對表達量，根據計算結果中位數，將研究組患者分為LncRNA CASC15高表達組、LncRNA CASC15低表達組、LncRNA MALAT1高表達組、LncRNA MALAT1低表達組。

1.4隨訪:所有患者均在首次開始進入血液透析之日起接受隨訪，隨訪間隔為3個月，隨訪終點為隨訪達到1年或患者全因死亡，統計所有尿毒癥患者開始血液透析1年可能導致患者死亡的臨床終點事件，包括心血管事件(心力衰竭、嚴重心律失常、心肌梗死)、腦血管意外、嚴重感染、消化道出血和放棄治療情況。

2 結 果

2.1兩組一般資料比較:研究組血清LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達顯著高于對照組，差異具有統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組血清LncRNA CASC15和LncRNA MALAT1表達比較

2.2研究組LncRNA CASC15高表達和低表達臨床資料比較:LncRNA CASC15高表達組和LncRNA CASC15低表達組性別、年齡、原發病、UA、TC、TG、CRP、血鈣和血磷比較差異無統計學意義(P>0.05)，LncRNA CASC15高表達組SCr、BUN高于LncRNA CASC15低表達組，eGFR、血紅蛋白低于LncRNA CASC15低表達組，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 研究組LncRNA CASC15高表達和低表達臨床資料比較

2.3研究組LncRNA MALAT1高表達和低表達臨床資料比較:研究組LncRNA MALAT1高表達和LncRNA MALAT1低表達組性別、年齡、原發疾病、TC、TG、BUN、CRP、血鈣和血磷水平比較差異無統計學意義(P>0.05)；LncRNA MALAT1高表達SCr、UA、BUN高于LncRNA MALAT1低表達組，eGFR、血紅蛋白低于低表達組，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表3。

2.4不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達水平發生終點事件比較:不同LncRNA CASC15表達水平尿毒癥患者發生心血管事件、全因死亡率差異具有統計學意義(P<0.05)，不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達水平放棄治療(全因死亡)比較差異具有統計學意義(P<0.05)，不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達水平分組腦血管意外、嚴重感染和消化道出血發生率比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表4、表5。

表5 不同LncRNA MALAT1表達水平發生終點事件比較

3 討 論

由于地區經濟水平差異、患者情況差異等諸多因素影響，終末期腎臟病患者進入血液透析時機存在較大差異。糖尿病腎病已成為終末期腎臟病患者進入血液透析的首要病因，其原因可能與合并糖尿病患者來院復查次數較多，相關檢查較多，易于發現腎功能改變有關。目前臨床中針對終末期腎臟病患者發生各類臨床終點時間的危險因素已有較多報道，但尚缺乏有效的生物標記物反映患者整體性功能狀態并對其預后進行準確預測。

LncRNA CASC15在既往報道中主要被發現參與急性腎損傷、膀胱癌、肝細胞癌等惡性腫瘤病理發展過程，與LncRNA CASC15相比LncRNA MALAT1與腎相關疾病關系已有較多報道：Liu等[7]研究發現lncRNA MALAT1參與梗阻性腎病腎組織細胞纖維化進程；Zhou等[8]研究結果中，LncRNA MALAT1在糖尿病腎病患者中高表達，與肌酐等傳統實驗室指標聯合檢測可提高糖尿病腎病診斷價值；本研究結果顯示研究組血清LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達顯著高于對照組，說明與CKD3～4期患者相比，CKD5期患者LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1呈顯著上調，可能與CKD3～4進展至CKD5期有一定關聯；本研究進一步分析首次終末期腎臟病開始血液透析前LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1與臨床資料關系，結果顯示二者均與SCr、BUN、eGFR、血紅蛋白等終末期腎臟病患者腎功能指標及營養功能指標相關，在UA指標上存在一定差異。說明LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1可能參與了終末期腎臟病患者腎功能惡化進程，但不同LncRNA 影響腎功能指標差異可能與指標有關或與病例數較少有關還需進一步研究。

包括心力衰竭、嚴重心律失常、心肌梗死等在內的心血管事件是導致終末期腎臟病患者血液透析期間死亡的重要原因之一，在本研究統計結果中心血管事件相較其他臨床終點事件發生率也較高。本研究比較結果發現不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達水平發生心血管事件和放棄治療(全因死亡)存在顯著差異，說明LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達對終末期腎臟病血液透析患者預后有一定影響，而腦血管意外、嚴重感染和消化道出血發生率無差異，可能與本研究納入患者病例數較少有關。足細胞是腎小球上“章魚樣”高度特異性細胞，是腎小球濾過屏障的重要組成部分，足細胞損傷是導致CKD患者病理進展的重要機制，Qin等[9]研究顯示LncRNA CASC15在糖尿病誘導的慢性腎功能衰竭中可通過下調miR-34c表達的方式促進足細胞凋亡過程，LncRNA MALAT1則可通過調控ERK/MAPK信號通路對糖尿病大鼠微血管病變和糖尿病腎病產生促進作用[10]，據此研究結果推測，LncRNA CASC15和LncRNA MALAT1可能分別通過影響足細胞凋亡和微血管病變途徑影響終末期腎臟病患者心血管并發癥和預后。

綜上所述，本研究分析結果發現LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1在終末期腎臟病血液透析患者血清中顯著上調，與患者臨床參數和透析臨床終點時間密切相關，有望成為治療靶點進行深入研究，但本研究為單中心研究，隨訪過程中無法對所有變量完全控制，所得結論還需更大樣本的前瞻性研究檢驗和完善。