沉默N-cadherin對人牙髓干細胞增殖和遷移能力的影響

近年來，基于牙髓干細胞（dental pulp stem cells，DPSCs）的牙髓再生是一個研究熱點

。DPSCs 作為牙髓再生的重要種子細胞，其生物學特性受到復雜因素的調控

。間充質干細胞的再生潛能很大程度取決于其所處的由各種組織成分、細胞群體和可溶性因子組成的微環境

。鈣黏蛋白（cadherins）是一類鈣依賴性的黏附分子，目前在人類中已鑒定出100 多種，分為11 個亞家族

。它們具有不同的組織分布，E-cadherin 主要表達于上皮細胞，N-cadherin 則主要表達于間充質細胞

。Ncadherin 屬于單次跨膜糖蛋白，其胞外結構域以鈣離子依賴性的方式介導鈣黏蛋白分子之間的相互作用，形成細胞間黏附連接；其胞內結構域不僅與細胞骨架蛋白相連從而使細胞錨定，而且與黏著斑蛋白、α-catenin 和β-catenin 等多種信號分子相互作用，調節細胞內信號轉導，參與細胞增殖、凋亡、遷移和分化等生理過程

。本課題組前期研究顯示，N-cadherin 表達于人DPSCs

，沉默N-cadherin可在體內外促進DPSCs 成牙本質向分化

。然而，N-cadherin 是否可以調控DPSCs 的增殖和遷移能力，尚未見報道。因此，本研究探討沉默N-cadherin對人DPSCs 增殖和遷移能力的影響。

1 材料和方法

1.1 主要試劑與儀器

胎牛血清、青霉素、鏈霉素、DMEM 培養基（Gibco，美國）；PrimeScriptTM RT Master Mix 試劑盒、SYBR

Premix Ex TaqTM 試劑盒（Takara，日本）；蛋白裂解液、蛋白酶抑制劑PMSF、磷酸酶抑制劑、BCA 蛋白濃度測定試劑盒（碧云天，中國）；N-cadherin 抗體（Santa Cruz，美國）；GAPDH 抗體、羊抗兔IgG 二抗（Abcam，美國）；CCK-8 試劑（同仁，日本）；細胞凋亡檢測試劑盒、細胞周期檢測試劑盒（凱基，中國）；Transwell 小室（Corning，美國）；CO

恒溫培養箱（Thermo Forma 311，Thermo，美國）；超微量分光光度計（NanoDrop 2000，Thermo，美國）；MD 多功能酶標儀（SpectraMax M5，Molecular Devices，美國）；流式細胞儀（FACSCanto II，BD，美國）；實時熒光定量PCR 系統（Light Cycler 480，Roche，瑞士）；……