聚氨酯創面敷料的細菌內毒素檢查法

徐紅梅，李發家，王亮

（1.蘇州凱瑞斯生物科技有限公司，江蘇 張家港 215600；2.江蘇艾迪爾醫療科技股份有限公司，江蘇 張家港 215600）

聚氨酯（PU）創面敷料具有材質柔軟，孔徑大小均勻，吸濕透氣高吸收性等優點，其多孔層狀的結構有利于排出創面產生的分泌物，能夠抵御外界細菌的侵入，防止創面受到細菌的感染，促進傷口在一個相對濕潤的微環境中快速愈合［1-3］；另外因其具有良好的韌性和彈性、加工性能好、加工方式多樣等優點，被廣泛應用于潰瘍創面、創傷創面等方面的治療［4-5］，在臨床上對于急性創面、慢性難愈合創面及外科手術后滲出液較多的創面等情況，聚氨酯創面敷料多與負壓吸引裝置聯合使用，能夠加快創面的愈合，大大減少感染的概率，在臨床上得到廣泛的使用［6］。

細菌內毒素檢測是食品、生物醫藥、醫療器械等行業必不可少的安全檢測手段［7-8］。如若創面敷料的細菌內毒素含量超標輕則會引起機體的發熱，重則當細菌內毒素在進入人體血液中的濃度足夠大時會引起更嚴重的安全問題，如敗血癥性休克，從而導致死亡。因此為了避免創面敷料在生產過程中引入的質量風險，保證產品在實際使用中的安全性，有必要對其細菌內毒素的含量進行嚴格控制。查閱相關標準可知［9-10］，目前細菌內毒素檢查方法主要分為凝膠法和光度法［11-12］。最常用的檢測方法是凝膠法，鱟試劑中的凝固酶和凝固蛋白原能夠被微量的細菌內毒素激活，其中凝固酶被激活轉化成具有活性的凝固酶原，繼而使可溶性的凝固蛋白原轉變成凝固蛋白而最終形成凝膠，這便是細菌內毒素檢查法（凝膠法）的作用機理［13］。該文采用凝膠法對聚氨酯創面敷料進行細菌內毒素的檢查，通過對鱟試劑靈敏度復核試驗、干擾試驗及凝膠限度試驗，建立該產品的細菌內毒素檢查方法，為不同規格型號的該產品的細菌內毒素檢查提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

研究所使用的材料與試劑見表1。

表1 材料與試劑

1.2 儀器與設備

研究所使用的儀器與設備見表2。

表2 儀器與設備

1.3 試驗方法

1.3.1 器具處理 試驗過程中所用到的所有玻璃器皿需為耐高溫材質制成，全部清洗干凈之后放入潔凈的不銹鋼滅菌盒內，經過250℃烘烤1 h 除去可能存在的外源性內毒素，避免試驗過程假陽性的現象出現。如若使用非金屬以及不耐高溫玻璃材質的器具，應該選用對試驗過程無干擾的標明無內毒素的器具，如微孔板和吸頭等。

1.3.2 細菌內毒素限值（L）的確定 根據YY/T0618 標準［14］，對于醫療器械而言，每件器械內毒素限值K＜20 EU，取3 批聚氨酯創面敷料（Y2004006、Y2004013、Y2004028），根據創面敷料的規格（300×200×30）mm 設定每件的沖洗液總量V 為600 mL，根據公式，試驗液內毒素限值=KN/V，計算可得在該沖洗量的情況下該規格的聚氨酯創面敷料的試驗液內毒素限值為0.033 EU/mL，以此限度進行聚氨酯創面敷料的細菌內毒素方法研究。

1.3.3 聚氨酯創面敷料最大有效稀釋倍數（MVD）的確定 根據公式：MVD=CL/λ，其中L 為聚氨酯創面敷料的試驗內毒素限值0.033 EU/mL，C 為聚氨酯創面敷料浸提液的濃度，即為1.0 mL/mL，λ為鱟試劑的標示靈敏度，此次試驗采用兩種廠家生產的靈敏度均為0.03 EU/mL 的鱟試劑，則該規格的聚氨酯創面敷料試驗液的最大有效稀釋倍數（MVD）為1 倍，即為該供試品600 mL 浸提液原液。

2 結果

2.1 鱟試劑靈敏度復核

根據2020 版《中華人民共和國藥典》［10］中的細菌內毒素檢查法，對兩種廠家生產的靈敏度均為0.03 EU/mL 的鱟試劑進行靈敏度復核試驗。具體試驗結果見表3，結果顯示兩種生產廠家生產的標示靈敏度λ 為0.03 EU/mL 的鱟試劑的λc分別是0.025 EU/mL 和0.03 EU/mL，均在0.5 λ～2 λ 之間，均符合要求，即可證明這兩種鱟試劑均可用于供試品的干擾試驗和供試品細菌內毒素檢查試驗。

表3 鱟試劑靈敏度復核試驗結果

2.2 干擾試驗

干擾試驗目的是為了驗證供試品在一定濃度或者一定量的浸提液中，鱟試劑與內毒素的凝膠反應是否受到干擾［15］。當鱟試劑或者供試品的生產廠家、配方、生產工藝以及試驗環境等發生了其他有可能影響試驗結果的變化時，需要重新做干擾試驗。本實驗分別將3 批的聚氨酯創面敷料置無熱原玻璃器皿或者無熱原取樣袋內，分別加600 mL BET 水振搖數次，在（37±1）℃恒溫箱中浸泡浸提不少于1 h，即得聚氨酯創面敷料浸提液，供試品的浸提液貯存周期應≤2 h，本次試驗分別采用符合上述靈敏度復核試驗的兩種生產廠家的0.03 EU/mL 鱟試劑進行干擾試驗。具體試驗結果見表4。結果表明，3 批聚氨酯創面敷料的浸提液對這兩種鱟試劑生產廠家生產的0.03 EU/mL 的鱟試劑與細菌內毒素的反應均不存在干擾作用，均不影響其凝膠反應，即ES均在0.5 λ～2 λ 之間，Et均在0.5 ES～2 ES之間，則證明可在該600 mL 浸提液下對此供試品進行細菌內毒素檢查，結果均符合要求。

表4 聚氨酯創面敷料的干擾試驗結果

2.3 供試品細菌內毒素檢查凝膠限度試驗

用這兩種鱟試劑分別對3 個批次的聚氨酯創面敷料的浸提液進行細菌內毒素檢查，具體檢測結果見表5。結果表明，用0.03 EU/mL 靈敏度的鱟試劑進行細菌內毒素檢查，3 批聚氨酯創面敷料的浸提液的細菌內毒素檢查結果均符合要求，即可證明該3 批創面敷料的浸提液試驗內毒素含量小于0.033 EU/mL，聚氨酯創面敷料的細菌內毒素含量小于20 EU/件，符合要求。

表5 聚氨酯創面敷料細菌內毒素檢查結果

3 討論

本研究采用首先對兩種不同廠家生產的鱟試劑（0.03 EU/mL）的靈敏度分別進行復核試驗，然后對3 批聚氨酯創面敷料（300 mm×200 mm×30 mm）的干擾試驗及細菌內毒素凝膠限度進行試驗，建立了聚氨酯創面敷料的細菌內毒素檢查法。鱟試劑靈敏度復核試驗結果證明兩種不同廠家生產的鱟試劑（0.03 EU/mL）的靈敏度復核試驗結果均符合規定；然后分別采用這兩種0.03 EU/mL 的鱟試劑對3 批聚氨酯創面敷料進行干擾試驗，試驗結果證明該規格的聚氨酯創面敷料在600 mL 的沖洗量的情況下對鱟試劑反應無干擾作用，確定所采用的方法可行；再對該試驗條件下的3 批聚氨酯創面敷料進行細菌內毒素檢測，結果均符合規定。證明該檢測方法適用于聚氨酯創面敷料的細菌內毒素檢測，具有可行性。對于不同規格的聚氨酯創面敷料應根據實際情況確定沖洗量，繼而確定試驗內毒素限值。