miRNA-602聯合S100β檢測對急性腦出血的診斷價值

高 偉 (福州市第一醫院神經外科，福建 福州 350009)

腦出血是中老年高血壓患者一種常見的嚴重腦部并發癥，指非外傷性腦實質內血管破裂引起的出血，常見的病因是高血壓、腦動脈硬化、顱內血管畸形等，常因用力、情緒激動等因素誘發，故大多數患者為在活動中突然發病[1]。臨床上腦出血發病十分迅速，主要表現為意識障礙、肢體偏癱、失語等神經系統的損害[2]。治療超急性腦梗死的有效性，包括靜脈內溶栓或取栓，通常限于缺血事件發生后6 h內，因此快速、準確的診斷是臨床決策的關鍵[3]。microRNAs(miRNAs)是一種小的類似于siRNA的分子，由高等真核生物基因組編碼。包括miRNA-602在內的許多miRNA已被證明在多種表觀遺傳水平上調節基因表達與中風的病理發生有關，中樞神經特異性蛋白(S100β)蛋白具有廣泛的生物學活性，在細胞增生、分化、基因表達、細胞凋亡中具有重要作用，影響著神經膠質細胞的生長、增殖、分化，維持鈣穩態[4-5]。然而，尚未有研究探討二者聯合檢測對急性腦出血患者的診斷價值。因此，本研究探討了miRNA-602聯合S100β檢測的臨床機制，以期為腦出血患者的早期診斷提供更多依據。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2019年1月～2021年5月我院收治的70例急性腦出血患者為病例組。納入標準：①均經影像學手段確診為腦出血。②從卒中發作到入院的時間小于6 h。③年齡30～80歲。④臨床資料完整。排除合并免疫性疾病、創傷、冠狀動脈疾病、器官衰竭、惡性腫瘤和感染等疾病的患者。同時，選擇同期在我院行體檢的60名健康志愿者為對照組，兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。具有可比性。見表1。本研究經過本院醫學倫理委員會同意。

表1 兩組基線資料比較(n)

1.2RT-PCR檢測：在患者入院后立即經肘靜脈采集靜脈血5 ml，并立即離心。上清液轉移到無核糖核酸酶的EP管中，保存于-80℃冰箱。從血漿中提取總RNA，利用瓊脂糖凝膠電泳法測定RNA完整性。miRNA-602、S100β引物序列見表2。RT-PCR反應條件如下：95℃預變性10 min，然后95℃變性30 s，50℃退火30 s，40個循環，最后70℃延伸10 min結束。

1.3神經功能缺損評分：在患者入院后即進行神經功能缺損評分(NIHSS)。NIHSS量表主要用于腦中風患者神經功能狀態的評估，對病情合理評估，個體化治療。質量表簡潔、可信度高、準確性高，且具有共通性和低敏感度，其內容包括11個評估項目，分別為意識程度、回答問題的能力、遵從指令的能力、眼球運動、視野、面癱、上肢運動功能、下肢運動功能、肢體協調功能、感覺、語言、構音和忽視，每個項目計分分為3～5個等級，評分范圍0～42分，分數越高表示神經功能受損越嚴重[6]。

表2 miRNA-602、S100β引物序列

2 結果

2.1兩組患者血清中miRNA-602、S100β的表達水平：RT-PCR檢測結果顯示，病例組、對照組患者的miRNA-602相對表達水平分別為(27.68±1.42)、(6.74±0.52)，S100β相對表達水平分別為(24.39±2.03)、(6.57±1.03)，差異均具有統計學意義(P<0.05)；病例組患者血清miRNA-602、S100β的表達水平均顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2患者血清中miRNA-602、S100β表達的相關性分析：Pearson相關性分析顯示，腦出血患者血清中miRNA-602與S100β的表達水平呈顯著正相關(r=0.769,P<0.001)，且miRNA-602(r=0.512,P<0.001)、S100β(r=0.446,P<0.001)表達水平也均于NIHSS評分呈顯著正相關(r=0.446,P<0.001)。見圖1。

圖1 腦出血患者miRNA-602與S100β表達的相關性

2.3血清中miRNA-602、S100β檢測對急性腦出血的診斷價值：ROC曲線分析顯示，血清miRNA-602、S100β對急性腦出血診斷的靈敏度分別為52.9%、46.8%，特異度分別為88.4%、76.3%，AUC分別為0.68、0.61，對二者進行聯合檢測后，靈敏度提高至67.8%、特異度提高至81.5%。見表3、圖2。

表3 血清中miRNA-602、S100β檢測對急性腦出血的診斷價值

圖2 miRNA-602、S100β檢測對急性腦出血的診斷價值

3 討論

隨著社會經濟的發展，急性腦出血的發生率呈明顯上升趨勢，其治療和康復已成為嚴重的社會負擔。腦出血超急性期的早期診斷極大地影響著患者的治療和管理方案[7]。本研究探討了miRNA-602、S100β作為早期診斷標志物的價值。有研究者發現，S100β蛋白是自噬的關鍵調節因子，可能在大腦中動脈閉塞損傷后發揮重要作用，其主要是通過抑制鞘磷脂合成酶活性，增加神經酰胺水平，進而上調p21誘導的細胞周期阻滯，對腦梗死后的腦組織具有保護作用[8]。腦缺血損傷時細胞損傷是一個漸進的過程，腦缺血損傷后又出現再灌注損傷而引起腦水腫加重，使血腦屏障通透性進一步增高，導致血液中的S100β蛋白增多，同時神經細胞損傷也可能持續一段時間[9]。腦出血的神經損傷源于血腫的原發性損傷外，更重要的是繼發性損傷，主要包括腦水腫、腦細胞的毒性損傷及繼發性缺血[10-12]。

本研究發現，急性卒中發生后，S100β蛋白濃度8～24 h即明顯升高，并在卒中發生72 h后S100β蛋白濃度隨著病情的好轉逐漸下降。許多經典的信號通路也被發現參與了腦梗死的病情進展，如miRNA-602介導的神經元凋亡參與了缺血性腦損傷[13]。與此同時，miRNA-602可影響NF-κB與p300的結合，阻斷NF-κB介導的信號轉導，還可影響P53轉移至線粒體的生物學過程，引起細胞色素酶的釋放[14]。本研究相關性分析也發現，腦出血患者血清中miRNA-602與S100β的表達水平呈顯著正相關，且miRNA-602、S100β達水平也均于NIHSS評分呈顯著正相關。這表明，miRNA-602與S100β在腦出血的發生發展過程中，可能存在著一定的協同作用，且二者表達量與患者神經功能密切相關。

綜上所述，miRNA-602及S100β聯合檢測對急性腦出血有較高的診斷價值，值得臨床推廣。但本研究為單中心研究，且樣本量較小，未來在多中心聯合的基礎上實施更大樣本量的研究，或能得出更具說服力的證據。