β地中海貧血患兒T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞、B淋巴細胞水平的變化及臨床意義

郭文麗，劉香萍，陳信，張倩

深圳市寶安區人民醫院檢驗科，廣東 深圳 518101

因β珠蛋白基因的缺失或缺陷，引起β珠蛋白鏈合成受到抑制，進而致使珠蛋白鏈比例失衡的溶血性貧血為β地中海貧血，其為常染色體隱性遺傳性血紅蛋白疾病，該病臨床特征主要表現為貧血、特殊面容、肝脾腫大、腎臟受損等[1-2]。目前臨床上尚無能改變β地中海貧血異常基因的準確治療方法，多數患兒只能采取定期紅細胞輸注配合鐵螯合劑去鐵治療，以此維持體內血紅蛋白濃度，保證正常生活質量[3]。同種異體輸血弊端在于會導致免疫功能抑制，造成細胞防御功能受到損害，患兒在治療過程中易受到細菌病毒及腫瘤的侵害；長期輸血治療造成紅細胞不斷分解，進而使鐵質大量聚集，引發鐵過載，過量的鐵沉積在重要臟器，導致多組織及臟器功能受損，極易出現心力衰竭、糖代謝紊亂等嚴重并發癥，威脅到患兒生命安全[4-5]。β地中海貧血患兒的長期貧血和輸血治療，使其常出現反復感染，這會進一步造成惡性循環，影響患兒生活質量，為家庭及社會帶來沉重負擔[6]。因此，臨床檢測T淋巴細胞亞群、自然殺傷(NK)細胞、B淋巴細胞水平變化，以此為基礎正確評價患兒免疫狀況，制定針對性免疫干預治療，達到減少患兒反復感染、提升長期生存質量的目的。為此，本研究旨在探討β地中海貧血患兒T淋巴細胞亞群、NK細胞、B淋巴細胞水平的變化及臨床意義，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年3月至2020年3月深圳市寶安區人民醫院收治的84例β地中海貧血患兒作為研究組。納入標準：①患兒經診斷確診為β地中海貧血[7]；②患兒長期接受高量輸血治療；③臨床資料完整；④患兒家屬均知曉此研究，且同意參與。排除標準：①合并惡性腫瘤；②有內分泌疾病；③合并其他血液疾病；④嚴重心臟、肝、腎功能異常；⑤嚴重精神、意識障礙。研究組中男性45例，女性39例；年齡2～15歲，平均(6.82±3.04)歲；體質量指數(BMI)14～19 kg/m2，平均(18.21±1.48)kg/m2；發病年齡3個月～4歲，平均(1.15±0.28)歲；病程1～11年，平均(3.47±1.49)年。選取同期84例健康兒童作為對照組，其中男性44例，女性40例；年齡2～16歲，平均(6.75±2.98)歲；BMI 15～20 kg/m2，平均(18.33±1.54)kg/m2。兩組兒童的性別、年齡和BMI比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經我院倫理委員會批準。

1.2 檢測方法選用BeckmanCoulter DxFLEX檢測T淋巴細胞亞群(CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、CD4+/CD8+比值)、NK細胞、B淋巴細胞(CD19+細胞)水平。具體步驟：(1)于清晨采集兒童空腹靜脈血1 mL，將其置于EDTA抗凝管中，并于6 h內進行處理；(2)采用四色直接免疫熒光法進行檢測，將熒光素標記的各種單克隆抗體加入到全血中，與白細胞膜上相應的抗原結合，經過溶血、洗滌(和固定)等步驟后，在流式細胞儀上進行分析；(3)根據檢測樣本的數量，一個樣本需要做兩管檢測，分別向已編好號的試管中加入10μL T亞群混合抗體，10μL BNK亞群混合抗體；(4)分別向試管中加入混勻的100μL抗凝血，渦旋混勻，避光，室溫(19℃～22℃)孵育15 min；(5)向每個檢測管中加入OptiLyse C 500μL，并渦旋10 s，充分混勻，避光，室溫(19℃～22℃)孵育10 min至溶液由渾濁變為澄清；(6)每管中加入200μL生理鹽水或者PBS，混勻；(7)小心加入100μL絕對計數微球，上機進行檢測。

1.3 觀察指標比較兩組兒童T淋巴細胞亞群(CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、CD4+/CD8+比值)、NK細胞、B淋巴細胞(CD19+細胞)水平。

1.4 統計學方法應用SPSS19.0統計軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組兒童的T淋巴細胞亞群比較研究組患兒的CD3+細胞、CD4+細胞、CD4+/CD8+比值明顯低于對照組，CD8+細胞明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組兒童的T淋巴細胞亞群比較(±s)

表1 兩組兒童的T淋巴細胞亞群比較(±s)

2.2 兩組兒童的NK細胞、B淋巴細胞比較研究組患兒的NK細胞水平明顯低于對照組，CD19+細胞水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組兒童的NK細胞、B淋巴細胞比較(±s，%)

表2 兩組兒童的NK細胞、B淋巴細胞比較(±s，%)

3 討論

β地中海貧血是危害性極大的遺傳病，多發于我國廣西、廣東等華南地區。為保證β地中海貧血患兒正常的生長發育及生活質量，患兒需要長期接受輸血治療[8]。但在長期的貧血狀態下，患兒進行大量輸血會增加其機體鐵負荷，導致患兒出現免疫功能下降，進而出現呼吸道感染等各種并發癥，危及患兒生命安全；且輸血治療過程中若不進行去鐵治療，過量的鐵負荷也會導致患兒出現生長發育遲滯、肝硬化、糖尿病等疾病[9-10]。患兒接受同種異體輸血會引起免疫功能的抑制，由此推測患兒長期進行輸血治療會抑制其固有免疫系統。因此，臨床通過檢測T淋巴細胞亞群、NK細胞、B淋巴細胞水平診斷患兒病情，評估其免疫狀況，并在此基礎上采取針對性干預治療，對改善患兒免疫紊亂、提升患兒生活質量、減輕家庭及社會負擔有重要意義。

T淋巴細胞亞群水平關系到患兒病情進展與預后效果，有研究表明T淋巴細胞亞群比例失調是惡性腫瘤病情發展的重要原因之一[11]。總T細胞的值由CD3+代表，其水平的降低表示免疫功能下降，CD4+則表達于輔助T細胞，CD8+主要表達于抑制細胞殺傷性T細胞，若CD3+、CD4+、CD8+水平發生異常變化則提示患兒免疫功能發生紊亂[12]。患兒長期生存率受T細胞免疫重建影響，若其免疫重建推遲會導致病毒感染或疾病復發幾率的增加。本研究顯示，相比健康兒童，β地中海貧血患兒的CD3+細胞、CD4+細胞、CD4+/CD8+比值明顯降低，CD8+細胞水平明顯升高，這表明β地中海貧血患兒會出現CD8+細胞活性增高，CD3+細胞、CD4+細胞活性降低等情況，細胞免疫功能紊亂會導致CD4+/CD8+比值倒置，進而造成患兒細胞免疫功能失調。臨床檢測β地中海貧血患兒的T淋巴細胞亞群水平，有利于評估其機體免疫狀況，對早期采取針對性治療干預措施促進患兒預后有重要意義。

機體細胞受NK細胞監視，在其發揮作用的同時能夠促進B淋巴細胞的成熟及分化，調節胸腺細胞，進而提高各臟器免疫功能。NK細胞是固有免疫系統的重要組成部分，能夠分泌多種細胞因子起到細胞毒殺傷功能；即無需抗原預先致敏，也無需抗體參與，在出現病毒感染細胞及腫瘤細胞的早期能夠及時識別清除，充分發揮橋梁作用鏈接固有免疫與適應性免疫，促進免疫調節[13-14]。CD4+T細胞的分化、增殖、功能受NK細胞的影響，與膜上CDl6+CD56+、輔助性T細胞細胞膜上的CD4+發生免疫黏附，通過影響CD4+T細胞調節T細胞免疫效應，若其水平降低則會影響到機體免疫功能[15]。本研究顯示，相比健康兒童，β地中海貧血患兒的NK細胞水平明顯降低，其原因可能在于患兒長期反復接受同種異體輸血，導致人體調節性T細胞抑制功能增強，進一步抑制了NK細胞活性。臨床檢測β地中海貧血患兒的NK細胞水平，能夠清晰觀察患兒臨床免疫狀況，為后續免疫干預治療提供新策略。B淋巴細胞參與機體體液免疫反應的方式為分泌血清Ig，而CD19+是其特有的表面分化蛋白，能夠作為B淋巴細胞特異性標志[16]。本研究顯示，相比健康兒童，β地中海貧血患兒的CDl9+細胞水平明顯升高。其原因可能在于患兒長期接受輸血治療導致諸如病毒等外來病原體侵入風險大幅提升；加之患兒體弱易發生各種感染，免疫系統受到刺激會導致體內淋巴細胞增生；在此基礎上B淋巴細胞增殖分化的加強，顯著提升其活性，Ig分泌進一步提升，致使體液免疫功能受到影響[17-18]。

綜上所述，β地中海貧血患兒T淋巴細胞亞群、NK細胞、B淋巴細胞水平明顯異于健康兒童，普遍存在免疫功能紊亂，臨床加強對T淋巴細胞亞群、NK細胞、B淋巴細胞水平的檢測，監測其水平變化，有利于患兒病情診斷、免疫狀況評估及早期針對性干預治療，對降低患兒的感染風險、顯著提高其生存質量意義重大。