肺腺癌組織中TGF-α、p53、Ki-67、E-cadherin蛋白表達水平及其相關性

盧柳，程鈺

安康市中心醫院病理科，陜西 安康 725000

肺腺癌屬非小細胞癌，是肺癌的一種，約占肺癌總數的55%。肺癌的發病率呈現逐年上升趨勢，尋找到更加有效精確的標志物是腫瘤醫療的重要課題。在2011年，肺腺癌共識意見重新確定了原位腺癌(AIS)、微浸潤性腺癌(MIA)和貼壁生長為主的浸潤性腺癌(LPA)的病理類型。此外，MIA和腺瘤樣增生(AAH)由于組織學特征不夠典型也給疾病的診斷帶來困擾[1-2]。轉化生長因子-α(TGF-α)是一種促進細胞有絲分裂的有效因子，其在機體中的過度表達會導致腫瘤的發生。抑癌基因(p53)是重要的抑癌基因，其表達與腫瘤的分化程度有關[3]。細胞核增殖抗原(Ki-67)是一種與細胞增殖相關的核蛋白，是細胞增殖的標志基因。上皮鈣黏蛋白(E-cadherin)則會密切參與腫瘤的侵襲和轉移過程，是一種重要的黏附因子[4]。本研究主要探討肺腺癌組織中TGF-α、p53、Ki-67以及E-cadherin蛋白的表達水平及其相關性，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2018年1月至2020年12月期間在安康市中心醫院行手術切除的87例肺腺癌患者的肺部標本(觀察組)進行研究，并選擇87例肺部腫瘤標本的癌旁正常肺組織標本作為對照組。納入標準：①經兩名病理醫師聯合診斷，病理切片確診；②行手術切除前，患者未服用免疫制劑；③行手術切除前，患者未進行化療或放療；④臨床資料齊全。87例患者中男性19例，女性68例；年齡46～75歲，平均(57.63±8.85)歲；根據組織病理學分級的增高順序進行分類[4]，其中原位腺癌(AIS)35例，微浸潤性腺癌(MIA)23例，貼壁生長為主的浸潤性腺癌(LPA)29例；腫瘤直徑6～18 cm，平均(8.66±4.02)cm。本研究經本院倫理委員會批準。

1.2 檢測方法①試劑：小鼠抗人TGF-α、Ki-67、p53及E-cadherin多克隆抗體(北京中杉金橋公司)，DAB顯色液(福州邁新生物技術開發有限公司)。②檢測方法：本院的專業人員嚴格按照試劑盒的操作說明進行所有的檢測操作。應用免疫組化MaxVision法檢出標本中的p53、TGF-α、Ki-67及E-cadherin的表達水平。首先用10%的中性緩沖福爾馬林液進行標本固定，脫水后用石蠟進行包埋，用切片機將石蠟切片4～5μm，行連續厚切片，磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗，3%過氧化氫甲醇消化內源性過氧化物酶，加入血清封閉并滴加生物學一抗，室溫孵育60 min后經PBS清洗，滴加生物學二抗，再次孵育5 min后經PBS清洗和DAB顯色、梯度乙醇脫水，制片封閉。以PBS代替一抗作為陰性對照，鏡下觀察是否為陽性。

1.3 結果判定所有的結果均由兩名病理醫生獨立觀察后再取平均值作為最終結果，若兩者相差較大，則報上級醫師判定。定位標準：TGF-α陽性在細胞質定位，p53和Ki-67陽性在細胞核定位，E-cadherin陽性則在細胞膜定位。判斷標準：陽性判斷需綜合考慮陽性細胞的染色強度以及切片所觀察細胞中的陽性細胞所占的百分比計分[5]，采用半定量判斷法。計分標準：(1)陽性細胞染色強度：細胞未著色記0分，顯示為淡黃色記1分，棕黃色記2分，黃褐色記3分；(2)陽性細胞所占百分比：無陽性細胞記0分，占百分比＜25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，＞76%記4分。將兩個分數相乘為最終判定得分，0～3分判定為陰性(-)，＞3分則判定為陽性(+)。

1.4 觀察指標比較肺腺癌組織標本以及正常肺組織標本的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達水平；比較AIS，MIA以及LPA組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達水平；比較肺腺癌組織中的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin蛋白表達水平的相關性。

1.5 統計學方法應用SPSS18.0軟件進行數據統計學分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman非參數相關分析法進行。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肺腺癌組織和正常肺組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達水平比較相較于正常肺組織，肺腺癌組織的TGF-α、p53及Ki-67陽性率明顯較高，E-cadherin陽性率則明顯較低，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 肺腺癌組織和正常肺組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達水平比較[例(%)]

2.2 AIS、MIA及LPA組織TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達水平比較隨著肺腺癌組織病理學分級的增高，TGF-α、p53及Ki-67的陽性率升高，E-cadherin的陽性率下降；AIS、MIA及LPA組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin陽性率比較差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 AIS、MIA及LPA組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達水平比較[例(%)]

2.3 肺腺癌組織中TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin蛋白表達的相關性經Spearman相關分析結果顯示，肺腺癌組織中，TGF-α表達與E-cadherin呈負相關(r=-1.984，P=0.001)，p53表達與E-cadherin呈負相關(r=-2.044，P=0.001)，Ki-67表達與E-cadherin呈負相關(r=-2.320，P=0.000)。

3 討論

轉化生長因子-α(TGF-α)是一種產生于巨噬細胞的腫瘤環境因子。與正常的組織和細胞相比，腫瘤細胞中的TGF-α水平明顯較高[5]。據TGF-α轉基因小鼠研究結果顯示，TGF-α的過度表達可導致組織中的細胞增生，還可導致肝腫瘤和乳腺腫瘤。TGF-α的表達在正常組織、非典型增生以及腺癌組織中呈現增強趨勢，這表明TGF-α能夠促進細胞分化，刺激細胞癌變[6-7]。我院本次研究的結果與上述結論相符，結果顯示，肺腺癌組織的TGF-α陽性率顯著高于正常肺組織，且隨著肺腺癌組織病理學分級的增高，TGF-α蛋白的陽性率呈現升高趨勢。

在所有惡性腫瘤中，約有50%以上都會出現p53的突變[8]。由p53編碼的蛋白質是一種轉錄因子，控制細胞周期的啟動，突變后，細胞的生長凋亡過程不再受其調控，細胞增殖失控，最終導致細胞惡變[9-10]。本次研究結果顯示，肺腺癌組織的p53陽性率顯著高于正常肺組織，隨著肺腺癌組織病理學分級增高，p53陽性率也升高。這一結論同時也可能在提示p53突變能夠促進肺腺癌的浸潤發展過程。

Ki-67是一種與細胞增殖有關的核蛋白，并與核糖體RNA轉錄密切相關。其不僅在細胞周期的G1，S，G2和M期均有表達，并且能夠很好地評估某一細胞群的增殖比例，因此能夠作為細胞增殖的標志物[11]。國內外研究顯示，Ki-67的陽性表達不僅與前列腺癌、乳腺癌等腫瘤患者的生存期密切相關，還會影響癌癥的復發風險，陽性率越高，腫瘤生長就越快，機體的組織分化能力就越差，患者的預后較差，很難完全治愈[12]。本次研究中，肺腺癌組織的Ki-67陽性率顯著高于正常肺組織，并肺腺癌組織病理學分級增高，這一點與Ki-67的增殖隨著腫瘤細胞的惡性程度增高而增加的臨床結論也相符合。

E-cadherin蛋白在保持上皮細胞間的同質黏附方面作用顯著，是一種重要的細胞黏附因子[13]。有研究發現，E-cadherin蛋白在乳腺癌和胃癌中呈現出低表達[14-15]。本次結果顯示，E-cadherin的陽性率隨著組織病理學分級的增高而降低，這可能是由于E-cadherin表達下調會降低細胞間的連接，使得肺上皮細胞發生癌變，并且會促進癌細胞浸潤，引發病期惡化。本次的相關性分析則顯示，TGF-α、p53及Ki-67與E-cadherin蛋白之間可能存在共同的細胞調控通路，在肺腺癌的發展和侵襲轉移方面發揮共同作用，但確切的共同作用機制有待新的研究進一步證實。

綜上所述，TGF-α、p53及Ki-67的表達上調與E-cadherin表達下調可能通過共同的調控通路促進肺腺癌的發生和發展，聯合診斷該四種蛋白可能有利于肺腺癌的早期確診，并在肺腺癌的分型和預后方面發揮作用。本次研究仍存在不足，四種蛋白的聯合作用機制仍待更大樣本容量的研究進行明確。