術中快速冰凍病理檢查診斷肺亞厘米結節的準確率及影響因素

陶群星，陳婷，江秋菊

龍巖市第二醫院病理科 (福建龍巖 364000)

肺癌是臨床常見的惡性腫瘤，且其發病率呈逐年增高的趨勢[1]。研究顯示，針對肺癌患者，早診斷、早治療是抑制不良預后的關鍵[2]。肺結節指肺內直徑≤30 mm的不規則病灶或類圓形病灶，且經影像學檢查可見密度增高陰影。肺亞厘米結節即指直徑≤8 mm的結節。目前，隨著影像學技術的不斷更新與發展，肺亞厘米結節的檢出率逐年升高。但由于肺亞厘米結節的病灶體積較小，且癥狀不典型，導致其難以通過經胸穿刺活檢、纖維支氣管鏡診斷等常規方法確診[3]。術中快速冰凍病理檢查是一種高效的病理檢查方法，或可在肺亞厘米結節的診斷中取得優勢。基于此，本研究評估術中快速冰凍病理檢查診斷肺亞厘米結節的準確率及影響因素，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年6月至2020年7月我院收治的88例肺亞厘米結節患者作為研究對象，其中男31例，女57例；平均年齡(46.5±12.1)歲；結節直徑0.1～0.8 cm，平均(0.46±0.13)cm。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。

納入標準：均經胸部CT檢查確診；臨床資料完整；自愿參與本研究；對研究方案依從性良好。排除標準：伴有認知功能障礙；有外科手術治療史；處于妊娠期或哺乳期；合并其他部位腫瘤、凝血功能障礙。

1.2 方法

所有患者均接受術中快速冰凍病理檢查及術后病理檢查。(1)術中快速冰凍病理檢查：術中，于患者結節暴露后，由病理醫師對其取材，根據結節大小選擇1～3片結節組織；然后利用恒溫冰凍切片機(徠卡顯微系統貿易有限公司，CM1950系列)處理標本；在制作冰凍切片前，先于設備冷凍頭表面涂抹一層包埋劑，然后將所得結節組織置于冰凍切片機上，在確認結節組織充分貼緊冷凍頭后，對組織進行冷凍，在冷凍至邊緣包埋劑凝固后停止冷凍操作，最后用切片機將結節組織切成厚度為5～7 μm的薄片，制備成冰凍切片；在冰凍切片制作完成后，先將薄層結節組織充分浸潤于酒精醋酸福爾馬林混合固定液中進行持續固定，然后在肺結節組織固定充分后，采用HE染色法對結節組織進行染色，隨后分別以1%乙醇、1%氨水及梯度乙醇進行分化、藍化及脫水處理，最后運用中性樹膠材料固定結節組織標本(封片處理)；醫師根據術中快速冰凍病理檢查方法對結節的定性結果，確定術中切除范圍。(2)術后病理檢查：對術中快速冰凍病理檢查后剩余的全部肺結節組織進行取材，并立即投入10%中性緩沖福爾馬林固定液(湖北泰康醫療設備有限公司，鄂孝食藥監械生產備20160010號，規格 2 500 ml/瓶)中充分固定，然后放入全自動脫水機(德國徠卡病理系統，Leica ASP300S自動組織脫水機)中脫水、透明；將透明度好的組織塊置入已在溫箱(58～60 ℃)內熔化的石蠟內浸蠟，然后包埋；將包埋好的蠟塊固定于切片機上，切成薄片(一般厚度為5～8 μm)，然后將薄片放入加熱(40 ℃)的水中燙平，再貼到載玻片上，于45 ℃恒溫箱[上海精宏，DHG-9053A電熱恒溫(鼓風)干燥箱]中烘干；用二甲苯脫去切片中的石蠟，再經由高濃度到低濃度乙醇置換二甲苯，最后入蒸餾水水化，之后對切片進行HE染色；并將染色的切片經梯度乙醇脫水、二甲苯透明，再在載玻片上加中性樹膠封片；最后醫師根據術后病理檢查方法對結節進行閱片、診斷。

1.3 觀察指標

以術后病理檢查結果為金標準，判斷術中快速冰凍病理檢查診斷肺亞厘米結節的準確率及影響因素。結節的定性判斷：良性結節，細胞學、病理學均未發現惡性細胞或組織，至少有一項查到良性細胞或組織；惡性結節，細胞學、病理學至少有一項查到惡性細胞或組織；陰性，細胞學、病理學均未發現有診斷意義的細胞或組織，即未成功獲取標本。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 術中快速冰凍病理檢查的診斷準確率

88例肺亞厘米結節患者，經術后病理檢查顯示，68例惡性結節，20例良性結節；經術中快速冰凍病理檢查顯示，66例惡性結節，19例良性結節，3例誤診或漏診，診斷準確率為96.59%(85/88)。

2.2 影響術中快速冰凍病理檢查診斷準確率的單因素分析

單因素分析結果顯示，準確診斷組與誤診或漏診組的冷凍溫度、冷凍時間及取材規范性比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.3 影響術中快速冰凍病理檢查診斷準確率的多因素分析

多因素Logistic回歸分析結果顯示，冷凍溫度、冷凍時間、取材規范性均為影響術中快速冰凍病理檢查診斷準確率的因素(P<0.05)，見表2。

表2 影響術中快速冰凍病理檢查診斷準確率的多因素分析

3 討論

隨著肺亞厘米結節患病人數的增加，此類肺部病變在臨床診斷工作中逐漸受到關注。依據既往經驗，肺亞厘米結節中惡性結節的占比較高[4]。然而，受病灶體積、癥狀等因素的影響，臨床對肺亞厘米結節的診斷存在一定的困難[5]。為了避免因誤診或漏診而影響惡性肺亞厘米結節患者的預后，臨床需及時采取有效的方法進行診斷。

術中快速冰凍病理檢查基于恒溫冰凍切片機的支持，主要通過術中快速病理檢查對結節進行定性，為患者手術方案的制定、組織切除范圍的確定提供依據。該檢查方法的應用優勢較多，具體如下。(1)診斷效率較高：術后病理診斷需經過組織處理、制備切片、檢查結果判斷等環節[6]，整個檢查流程的耗時較長，難以為惡性肺亞厘米結節患者的臨床治療提供有效支持；而術中快速冰凍病理檢查方法采用恒溫冰凍切片機，其具有冰凍、切片準備一體化的特征，可有效提高病理診斷效率。(2)診斷準確率較高：本研究結果顯示，術中快速冰凍病理檢查的診斷準確率為96.59%，分析原因可能為，該方法可在短時間內完成標本檢測，降低外部因素的影響，因此準確率較高。(3)保障手術效果：術中快速冰凍病理檢查、術后病理檢查均屬于有創性診斷方法，若采用術后病理檢查方法，術中醫師只能依據經驗判定肺亞厘米結節患者的手術切除范圍(術中暴露病灶位置、顏色等)，這對醫師的手術經驗、手術操作熟練程度等均提出了較高的要求[7]，若醫師經驗不足，可能會影響肺亞厘米結節患者的手術效果；而采用術中快速冰凍病理檢查方法，醫師可在術中獲取肺結節的診斷結果，并據此合理確定結節病灶的切除范圍，如為良性，僅切除肺亞厘米結節組織即可，如為惡性，則需同時切除肺亞厘米結節及周圍一定范圍的組織，且術中快速冰凍病理檢查可幫助肺結節尤其是肺癌患者實現早期治療，減少不良預后。(4)提高患者滿意度：在臨床診療工作中，肺亞厘米結節患者的滿意度主要受診斷效率、手術時間等因素的影響[8]；與術后病理檢查方法比較，術中快速冰凍病理檢查方法可在較短時間內獲取肺結節的診斷結果，不僅可避免等待檢查結果時間過長的問題，還可提高手術效率，控制手術時間，因此，患者的滿意度較高。

本研究多因素Logistic回歸分析結果顯示，影響術中快速冰凍病理檢查診斷準確率的因素主要包含以下幾方面。(1)取材規范性：肺亞厘米結節患者的病灶組織較小，在采集肺結節標本時，若取材不規范(疏忽微小標本的超聲處理、結節采集不完整等)，易影響切片質量，進而增加誤診或漏診風險。(2)冷凍溫度：在應用術中快速冰凍病理檢查方法診斷肺亞厘米結節的過程中，肺結節組織的冰凍溫度也會影響診斷準確率，如冷凍溫度過低，會損害肺結節組織結構及細胞完整性，進而影響最終診斷準確率；如冷凍溫度偏高，可能會因組織冰凍不充分，進而干擾肺亞厘米結節診斷的可靠性。(3)冷凍時間：冷凍時間過短或過長均可能干擾診斷準確率，這是因為當冷凍時間不達標時，可能導致細胞出現體積脹大、細胞拉長、胞內空泡、細胞核變形等假象，增加診斷困難。

為提升術中快速冰凍病理檢查的診斷準確率，我們可采取以下措施。(1)加強取材管理：鑒于肺結節組織取材規范性與術中快速冰凍病理檢查結果的密切關聯，可將取材管理作為重點，通過對病理醫師開展培訓的方式，確保其能夠規范、熟練地掌握肺結節取材方法及微小標本超聲處理方法等技能，以便提升冰凍切片質量，進而提升術中快速冰凍病理檢查準確率，為此類肺部疾病患者的后續治療提供支持。(2)合理設置組織冷凍溫度及冷凍時間：不同類型標本對冷凍溫度的要求不同，通常情況下，脂肪組織標本的最佳冷凍溫度為<-50 ℃，而卵巢、子宮等組織的最佳冷凍溫度為-18～-20 ℃，為保障冰凍肺結節切片的質量，在針對肺結節組織進行冰凍處理時，應注意將冷凍溫度設置為-15～-20 ℃；而在冷凍時間方面，我們需根據組織邊緣的凝固狀況，確定最佳冷凍時間。

本研究仍存在不足之處，如在對影響術中快速冰凍病理檢查診斷結果進行單因素分析時，由于誤診或漏診樣本數較少，無法通過分組對照試驗更加精準地確認影響檢測結果的單因素，因此，在后續的研究中應擴大樣本規模，通過差異性對比的方式找出影響診斷準確率的單因素，進而使多因素分析得到更高等級的證據支持。

綜上所述，術中快速冰凍病理檢查診斷肺亞厘米結節的準確率較高，為充分發揮該方法的價值，需加強檢查期間取材的規范，以及對冷凍溫度和冷凍時間的控制。