基于ddPCR檢測荷斯坦牛自由馬丁現象的研究

王玉嬌，李彥芹，張汝美，蔡高占，趙秀新，顧祥國，李俊婷，姚文龍，李建斌*，仲躋峰*

（1.山東省農業科學院 畜牧獸醫研究所，濟南 250100；2.山東奧克斯畜牧種業有限公司，濟南 250108；3.寧波市牛奶集團有限公司，浙江 寧波 315033；4.寧波市鄞州瞻岐鷹山牛場，浙江 寧波 315145）

自由馬丁（freemartinism）綜合征是異性雙胎牛性器官發育紊亂疾病，主要表現為母牛生殖器官發育不全、雄性化或不育等特征，其主要機制是雙胎胚胎早期的尿膜絨毛膜血管之間有吻合支，雄性胎兒分泌的雄性激素會通過吻合支進入雌性胎兒體內，抑制雌性生殖器官的發育。異性雙胎對公牛生殖能力的影響尚不確定，然而確有造成生殖能力下降的報道。牛雙胎時多達97%胎兒會發生尿膜絨毛膜血管吻合。荷斯坦牛雙胎率大約為5%，個別牛群可達10%甚至更高。而且牛的雙胎率可能會越來越高，自然會造成自由馬丁發生率的增加。

自由馬丁初步診斷一般是基于小母牛生殖道的臨床檢查，以及是否來自雙胎或多胎等信息。而確診需要進行遺傳學檢查，即確定細胞中是否存在XX／XY嵌合體。細胞遺傳學和分子技術可以應用于自由馬丁診斷，一般染色體分析是最常見的方法。細胞遺傳學鑒定常用的方法包括吉姆薩染色法、染色體分帶或性染色體探針熒光原位雜交法等。分子技術主要包括PCR、qPCR或性染色體連鎖微衛星標記分型法等。細胞遺傳學分析可以精準確定XX和XY細胞比例，但費時費力，而且整個程序涉及無菌采集血液樣本、迅速（約24 h內）運到實驗室、白細胞培養（48 h或72 h內）、專業人員進行分析等。……