采前噴施水楊酸和茉莉酸甲酯對秀珍菇產量和采后生理的影響*

李昕霖，陳國平，施樂樂，吳小平，李建芳，黃志龍**

（1.福建省食用菌技術推廣總站，福建 福州 350003；2.漳州市經濟作物站，福建 漳州 363000；3.福建農林大學菌物研究中心，福建 福州 350002；4.順昌縣農業農村局食用菌站，福建 順昌 353200）

秀珍菇（Pleurotus pulmonarius），別名袖珍菇、小平菇等，屬擔子菌門（Basidiomycota） 傘菌目（Agaricales） 側耳科（Pleurotaceae） 側耳屬（Pleurotus）[1]，是一種營養極豐富的珍稀食用菌，其肉質脆嫩，風味獨特，味道鮮美，被譽為“菇中極品”，市場前景較好[2]。福建省是全國秀珍菇主產區，羅源縣更被譽為“全國秀珍菇第一縣”，早在2013年全縣秀珍菇的栽培量就已突破1億袋[3]。由于新鮮秀珍菇子實體柔軟，且含水量高達90%以上[4]，在采后及運輸過程中極易出現失水、腐爛等現象，極大降低了其營養價值和商品價值[5]。因此，控制秀珍菇采后劣變是提高秀珍菇產業經濟效益的重要途徑。

水楊酸 （salicylic acid，SA） 和茉莉酸甲酯（methyl jasmonate，MeJA） 被認為是高等植物體內普遍存在的內源信號分子和新型植物激素[6-7]，不僅參與果蔬成熟等生理生化過程，還可參與植物的抗逆反應[8]，近年來被廣泛應用于果蔬的貯藏保鮮和植物抗病性研究[6-9]。研究發現，采前用SA和MeJA處理葡萄[10]、芒果[11]、甜瓜[12]等果蔬均能達到抗病保鮮的效果，目前有關SA和MeJA對秀珍菇保鮮效果方面的研究還未見報道。以金臺4號秀珍菇為試材，研究采前噴施SA和MeJA對秀珍菇產量及保鮮效果的影響，以期為SA和MeJA處理應用于秀珍菇貯藏保鮮提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 菌株

秀珍菇菌株金臺4號，來源于福建農林大學菌種保藏中心。

1.1.2 試劑及溶液

濃度為150 μmol·L-1的水楊酸溶液由濃度為10 mmol·L-1的母液稀釋所得。母液配制方法為：稱取0.21 g水楊酸，用0.9 mL無水乙醇溶解，加入0.1 g Tween 20攪拌均勻，再加入80 mL蒸餾水定容到100 mL，4℃冰箱保存備用。

濃度為50 μmol·L-1的茉莉酸甲酯的配制方法參照參考文獻[13]。

1.1.3 主要培養基

PDA培養基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，pH自然。

木屑培養基：木屑39%、棉籽殼39%、麩皮20%、CaCO32%，含水量60%。

1.1.4 儀器設備

ZEAL WAY G154DW型滅菌鍋，蘇州賽恩斯儀器有限公司；SW-CJ-1FB超凈工作臺，蘇州凈化設備有限公司；HWS26型恒溫水浴鍋，上海恒一科技有限公司；HITACHI RXII series高速冷凍離心機，天美科技有限公司；LEGEND MICRO 17離心機，北京豐美天合科技有限公司；Lx-100掌型離心機，上海隆拓儀器設備有限公司；Bio-Rad C1000 PCR儀，上海實維實驗儀器技術有限公司；METASH UV-5型，上海元析儀器有限公司；METASH V-5型紫外/可見分光光度計，上海元析儀器有限公司；AHRP-1000A型人工氣候箱，金壇區西城文武儀器廠；Tissuelyser-24型全自動樣品快速研磨儀，上海凈信科技；CP313型電子天平，奧豪斯儀器（常州）有限公司；奧特光學B203生物顯微鏡，重慶奧特光學儀器有限責任公司。

1.2 處理方法

試驗栽培袋采用規格為17 cm×3 cm的聚丙烯塑料袋裝料，每袋干料重500 g。123℃高壓滅菌2.5 h。冷卻至25℃接種，之后于20℃～24℃培養室培養，待菌絲長滿栽培袋并經后熟培養后，10℃以上的溫差刺激進行開袋。開袋后置于23℃，濕度85%～90%的培養箱內出菇。

依據參考文獻[14-18]及預試驗結果，得到水楊酸處理最適濃度為150 μmol·L-1，茉莉酸甲酯最適濃度為50 μmol·L-1。將栽培袋隨機分為3組：對照組（CK）、水楊酸（SA） 處理組、茉莉酸甲酯（MeJA） 處理組。每處理50袋，3次重復，共450袋。

開袋后，每天早晚將150 μmol·L-1水楊酸和50 μmol·L-1茉莉酸甲酯以30 mL·m-2均勻噴施于秀珍菇表面，對照組噴施相同體積的蒸餾水。

1.3 指標測定

1.3.1 產量的測定

隨機各采收7袋不同處理的子實體，計算平均每袋產量。

1.3.2 失重率的測定

以子實體采收時的質量和貯藏期間測定時的質量變化、計算各處理的失重率（Y，%），每個處理3個重復，其公式為：

式中：M0為采收時不同處理子實體的質量（g）；Mi為之后每天同一時間子實體的稱量質量（g）。

1.3.3 硬度的測定

采用質構儀測定采收后經不同處理的子實體菌蓋的硬度，每個處理3個重復，測定菌蓋中心位置。

1.3.4 乙烯受體基因表達檢測

1） RNA提取和cDNA的合成

使用OMEGA植物RNA提取試劑盒提取采收后經不同處理的子實體RNA，所有步驟按試劑盒操作說明進行。采用北京全式金生物技術有限公司的TransScript All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR試劑盒進行RNA反轉錄，將反轉錄后得到的cDNA用于之后的熒光定量。

反轉錄體系共20 μL，擴增程序為42℃，15 min；80℃，5 s；反轉錄結束后產物保存于4℃中。

2） 熒光定量PCR檢測

熒光定量PCR檢測使用北京全式金生物技術有限公司試劑盒，在BIO-RAD CFX96 PCR儀上運行，每個處理設置3個重復。

PCR反應體系含2 μL cDNA、10 μL 2× SybrGreen qPCR Master Mix、7.2 μL RNase-free 水、0.4 μL 引物F、0.4 μL引物 R。反應條件：94℃預變性150 s；94℃變性5 s，60℃退火30 s，40次循環；60℃延伸5 s。

秀珍菇乙烯受體基因引物見表1。

表1 秀珍菇乙烯受體基因引物Tab.1 The primers used for expression analysis of Pleurotus pulmonarius ethylene receptor gene

1.3.5 營養成分的測定

對采收后經不同處理的子實體營養成分進行測定。依據SN/T 4260-20155出口植物源食品中粗多糖的測定苯酚-硫酸法[19]的方法測定粗多糖，依據GB 5009.124-2016食品安全國家標準食品中氨基酸的測定[20]的方法測定氨基酸，依據GB 5009.268-2016食品安全國家標準食品中多元素的測定[21]的方法測定微量元素。

2 結果與分析

2.1 采前水楊酸和茉莉酸甲酯處理對秀珍菇產量的影響

不同處理組秀珍菇的產量見表2。

由表2可知，MeJA和SA處理組產量均高于對照組。MeJA處理組秀珍菇的產量提高了8.34%，且MeJA處理組與SA處理組、對照組比較，差異顯著。SA處理組與對照組比較，差異不顯著?？赡苁峭庠碝eJA誘導了秀珍菇防御反應基因的表達，提高秀珍菇對病蟲害的防御能力。

表2 噴施水楊酸和茉莉酸甲酯對秀珍菇產量的影響Tab.2 Effects of spraying salicylic acid and methyl jasmonate on the yield of Pleurotus pulmonarius

2.2 采前水楊酸和茉莉酸甲酯處理對秀珍菇失重率的影響

采前SA、MeJA處理對秀珍菇失重率的影響見圖1。

圖1 秀珍菇失重率測定結果Fig.1 Results of weight loss rate of Pleurotus pulmonarius

如圖1所示，采前SA、MeJA處理組和對照組的秀珍菇失重率均隨著放置時間的延長而逐漸升高，且失重率的斜率隨著放置時間的延長逐漸降低。整個試驗過程中，采前SA、MeJA處理組的失重率均低于對照組，與對照組之間差異顯著（P＜0.05）。由此可知，采前SA、MeJA處理可以延緩秀珍菇子實體失重率的上升，且SA處理組上升更緩慢。

2.3 采前水楊酸和茉莉酸甲酯處理對秀珍菇菌蓋硬度的影響

硬度下降是子實體衰老的重要標志之一，采前水楊酸和茉莉酸甲酯處理對秀珍菇菌蓋硬度影響結果見圖2。

圖2 不同處理方式對秀珍菇菌蓋硬度的影響Fig.2 Effects of different treatments on the hardness of Pleurotus pulmonarius cap

如圖2所示，在整個放置時間內，采前SA、MeJA處理組和對照組的秀珍菇的菌蓋的硬度均呈下降趨勢，這可能與子實體中游離水的流失速度有關。在起始至1 d時，及2 d～3 d時，對照組硬度下降幅度最大，SA處理和MeJA處理下降幅度顯著低于對照組（P＜0.05），說明SA處理和MeJA處理對秀珍菇有一定的保鮮作用。室溫放置1 d～2 d，3種處理后的菌蓋硬度下降幅度差異不顯著（P＞0.05）。由此可見，采前MeJA處理不會影響秀珍菇采收時的硬度，還可以減緩秀珍菇常溫放置過程中硬度的下降速度，但采前SA處理會降低秀珍菇采收時的硬度。

2.4 采前水楊酸和茉莉酸甲酯處理對秀珍菇乙烯受體基因表達量的影響

提取秀珍菇子實體RNA進行乙烯受體相關基因表達量的分析，見圖3。

圖3 不同處理對秀珍菇乙烯受體基因表達量的影響Fig.3 Effects of different treatments on ethylene receptor gene expression of Pleurotus pulmonarius

如圖3所示，與對照組相比，SA處理組乙烯受體基因PpuETR1表達水平顯著降低，MeJA處理組乙烯受體基因PPACC2表達水平顯著降低，說明采前SA、MeJA處理在不同程度上抑制了乙烯受體基因PpuETR1或PPACC2的表達水平，減緩了乙烯信號通路對秀珍菇成熟衰老的作用。由此，可以從分子水平上判斷采前SA處理和MeJA處理對秀珍菇有一定的保鮮作用。

2.5 采前水楊酸和茉莉酸甲酯處理對秀珍菇營養成分的影響

2.5.1 粗多糖含量分析

不同處理組粗多糖含量的統計結果見圖4。

圖4 不同處理組粗多糖含量Fig.4 Crude polysaccharide content in different treatment groups

由圖4可知，SA處理組、MeJA處理組和對照組的粗多糖含量無顯著性差異，且對照組略高于其他2組。

2.5.2 氨基酸含量分析

氨基酸是秀珍菇營養評價的重要指標，不同處理組氨基酸含量統計見圖5。

圖5 不同處理組氨基酸含量Fig.5 Amino acid content in different treatment groups

由圖5可知，對照組秀珍菇子實體氨基酸含量最高，與MeJA處理后的子實體氨基酸含量無顯著差異，而經過SA處理后的子實體氨基酸含量顯著降低。

2.5.3 微量元素含量分析

秀珍菇富含多種微量元素，不同處理組鈣含量統計見圖6，不同處理組鐵含量統計見圖7。

圖6 不同處理組鈣含量Fig.6 Calcium content in different treatment groups

圖7 不同處理組鐵含量Fig.7 Iron content in different treatment groups

由圖6、圖7可知，MeJA處理組的秀珍菇子實體鈣、鐵含量顯著高于SA處理組和對照組；SA處理組的子實體中鈣含量與對照組無顯著差異，鐵含量顯著高于對照組。

3 討論

秀珍菇子實體的成熟和衰老與菌類的品質和貯藏保鮮息息相關。宋媛等[18]研究發現，采前噴施50 μmol·L-1MeJA可能使雙孢蘑菇生長過程中一些酶活力、基因的表達以及生長代謝活動受到調控，促進雙孢蘑菇的個體增大。弓德強等[22]研究發現，采前SA處理可以提高芒果采后果實品質，抑制芒果乙烯合成和軟化基因的表達。何慶等[23]研究發現，采前MeJA處理能夠通過誘導提高葡萄酶活性來提高果實采后抗病性，從而提高葡萄貯藏保鮮效果。劉慶安等[24]研究發現，外源MeJA和SA混合處理能有效防止黃瓜病害發生，使產量增加27.85%。本研究中，采前噴施SA和MeJA可以有效延緩秀珍菇子實體失重率的上升和硬度的下降，且不同程度抑制秀珍菇乙烯受體基因PpuETR1或PPACC2的表達水平。說明采前用SA、MeJA處理可以提高秀珍菇子實體的貯藏期商品品質，有一定的保鮮效果，與前人的研究結果基本一致[10-12]，且MeJA處理組秀珍菇的產量提高了8.34%。

秀珍菇富含18種氨基酸及多種礦物質、微量元素[25]。研究發現，與對照組相比，采前經MeJA處理，秀珍菇子實體中鈣、鐵等微量元素含量均顯著提高，粗多糖、氨基酸等營養成分含量無顯著差別；采前經SA處理，秀珍菇子實體中鐵含量顯著提高，氨基酸含量顯著降低，粗多糖、鈣等營養成分含量無顯著差別。

研究結果表明，秀珍菇采前用150 μmol·L-1SA和50 μmol·L-1MeJA處理可以提高子實體的貯藏期商品品質，MeJA處理還可提升秀珍菇產量，但是SA處理對秀珍菇采收時的硬度、氨基酸含量等均有不利影響。綜上，MeJA處理更適合用于秀珍菇的采前保鮮。