云南地區栽培的3種羊肚菌的培養基篩選及生物學特性分析*

羅祥英 ，李 健 ，許天休 ，李文芝 ，曹 瑤 ，楊林雷 ，陸青青 ，沈真輝 ，楊曉君 ，李榮春 **

（1.云南菌視界生物科技有限公司，云南 昆明 651708；2.昆明市（食用菌）企業工程技術中心，云南 昆明 651708）

羊肚菌（Morchella spp.）隸屬于子囊菌門（Ascomycota） 盤菌綱 （Discomycetes） 盤菌目 （Pezizales） 羊肚菌科（Morchellaceae），是一類富含營養價值和藥用價值的珍稀食用菌。目前，全國廣泛推廣栽培的羊肚菌品種屬于黑色羊肚菌支系（Elata Clade）。雖然已有較多關于羊肚菌生物學特性的研究，但因栽培區域、種類以及菌株等的差異，導致研究結果不盡相同，甚至相反。因此，以云南地區栽培的主要羊肚菌種類六妹羊肚菌（M.sextelata）、梯棱羊肚菌（M.importua） 和七妹羊肚菌（M.eximia）為研究材料，系統研究不同碳源、氮源、2種無機鹽對3種羊肚菌共15個菌株的菌絲生長及菌核產生的影響，并優化、篩選最佳培養基配方，為云南地區羊肚菌的大規模生產及栽培提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試羊肚菌菌株均由云南菌視界生物科技有限公司保存、提供，具體信息詳見表1。

表1 供試菌株清單Tab.1 The list of tested strains

1.2 培養基配方

配方1培養基：馬鈴薯200 g（去皮）、葡萄糖20 g、瓊脂粉18 g、VB110 mg，蒸餾水1 000 mL，pH 6.0。

配方2培養基：糊精20 g（碳源）、蛋白胨5 g（氮源）、瓊脂粉18 g、VB110 mg，蒸餾水1 000 mL，pH 6.0。

1.3 試驗方法

1.3.1 菌種初篩

利用配方1培養基活化供試菌種，獲得純培養菌絲。統計15個菌株的菌絲平均生長速度，篩選出長勢最好的3個菌株進行下一步試驗。

1.3.2 不同碳源對羊肚菌菌絲生長影響試驗

以另外14種碳源分別替代上述配方2培養基中的糊精，包括葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖、果糖、甘露醇、可溶性淀粉、乙醇、丙三醇、幾丁質、麥粒煮汁、山梨醇、木糖，均分別稱取20 g；以無碳源的培養基作對照。統計分析不同碳源對3個初篩菌株菌絲生長的影響。

以六妹羊肚菌JSJ-M1菌株為試驗材料，每隔12小時測量菌落半徑，研究其在不同碳源下的生長曲線。

1.3.3 不同氮源對羊肚菌菌絲生長影響試驗

以另外10種氮源分別替代上述配方2培養基中的蛋白胨，包括豆餅粉、玉米粉、酵母膏、牛肉膏、硫酸銨、硝酸鈉、硝酸銨、硝酸鉀、氯化銨、酒石酸銨，均分別稱取5 g；以無氮培養基作對照。統計分析不同氮源對3個初篩菌株菌絲生長的影響。

以六妹羊肚菌JSJ-M1菌株為試驗材料，每隔12小時測量菌落半徑，研究其在不同氮源下的生長曲線。

1.3.4 不同溫度對六妹羊肚菌JSJ-M1菌株影響試驗

使用篩選出的最佳培養基作為供試培養基，以六妹羊肚菌JSJ-M1菌株為材料，設置恒溫培養箱溫度分別為4℃、9℃、12℃、15℃、18℃、21℃、24℃、28℃、34℃共9個處理，每個處理5個重復，黑暗條件培養。

1.3.5 不同pH對六妹羊肚菌JSJ-M1菌株影響試驗

以六妹羊肚菌JSJ-M1菌株為材料，使用篩選出的最佳培養基作為供試培養基，培養基滅菌前用濃度為 0.1 mol·L-1的 NaOH 和濃度為 0.1 mol·L-1的HCl調節pH，采用PHS-2C型酸度計測定，設置pH為 4.0、4.5、 5.0、 5.5、6.0、6.5、 7.0、7.5、8.0、9.0共10個處理，每個處理5次重復。

1.3.6 KH2PO4和MgSO4對羊肚菌菌絲生長的影響試驗

1）單因素試驗設計：使用篩選出的最佳培養基作為供試培養基，在培養基中分別加入KH2PO4和MgSO4，均設置6個質量濃度梯度為0.5 g·L-1、1.0 g·L-1、1.5 g·L-1、2.0 g·L-1、2.5 g·L-1、3.0 g·L-1，以不添加無機鹽的培養基為對照，每個處理5次重復。

2）雙因素組合試驗：在單因素的基礎上，通過全面試驗設計法研究2種無機鹽的不同組合對羊肚菌菌絲生長及菌核形成的影響，每個組合設置3個重復。

1.3.7 數據測量方法

試驗采用90 mm的一次性滅菌培養皿，每個培養皿倒20 mL的培養基，固定培養基厚度相同。接種塊大小為直徑5 mm，置于培養皿中央，接種后用1層封口膜封口并置于18℃恒溫培養箱黑暗培養。接種后采用劃線法每隔12小時劃線測量1次菌絲生長速度，并觀察菌絲長勢以及菌核形成情況。接種培養15天后，挑取菌核，烘干，測量菌核干質量。用Excel記錄并進行數據分析，用SPSS 25.0進行均值分析、方差分析、單/雙因素ANOVA檢驗。

菌絲生長速度（V，mm·d-1）的計算公式為：

式中：L為菌絲平均直徑（mm）；t為菌絲培養時間 （d）。

2 結果與分析

2.1 不同菌株在同一培養基內菌絲長勢存在差異

15個菌株在配方1培養基上的菌絲生長速度見圖1。

圖1 不同菌株在配方1培養基上的菌絲生長速度Fig.1 Growth rate of different strains on formula 1 medium

如圖1所示，15個菌株在配方1培養基上的菌絲長勢存在差異。其中生長最快的菌株為六妹羊肚菌JSJ-M1，平均生長速度為12.65 mm·d-1；菌株JSJ-M2菌絲生長較快，平均生長速度為11.96 mm·d-1。七妹羊肚菌中菌絲生長較快的菌株為JSJ-M6，平均生長速度為12.34 mm·d-1。梯棱羊肚菌中生長較快的菌株為JSJ-M14和JSJ-M15，平均生長速度分別為11.71 mm·d-1和 11.98 mm·d-1。通過篩選，以菌株JSJ-M1、JSJ-M6、JSJ-M15為材料進行后續試驗。

2.2 不同碳源對3個羊肚菌菌株的影響

3個羊肚菌菌株在不同碳源培養基上菌絲的生長速度見圖2。

圖2 3個羊肚菌菌株在不同碳源培養基上的菌絲生長速度Fig.2 Mycelial growth rate of three Morchella strains on the different carbon sources media

由圖2可知，不同碳源對羊肚菌菌絲生長影響較大，JSJ-M1、JSJ-M6和JSJ-M15菌株生長的最佳碳源均為可溶性淀粉，平均菌絲生長速度分別為14.57 mm·d-1、14.30 mm·d-1和 14.04 mm·d-1。其次是糊精、幾丁質和蔗糖；其中JSJ-M1菌株對糊精的利用優于幾丁質和蔗糖，JSJ-M6菌株對幾丁質的利用優于糊精和蔗糖，JSJ-M15菌株對蔗糖的利用優于幾丁質和糊精。在以乳糖、麥芽糖、山梨醇、甘露醇為碳源時，JSJ-M1和JSJ-M6菌株的生長速度與不添加碳源的對照組的菌絲生長速度無顯著差異，不加碳源的對照組雖然菌絲生長較快，但是菌絲非常稀疏、纖細；3個菌株對乳糖的利用存在較大的差異，以乳糖為碳源時，JSJ-M1、JSJ-M6、JSJM15菌株的菌絲生長速度分別為11.76 mm·d-1、8.66 mm·d-1、5.56 mm·d-1。JSJ-M15 菌株對丙三醇和麥粒煮汁的利用與麥芽糖無異而優于乳糖，這與JSJM1和JSJ-M6菌株相反。3個菌株菌絲生長最差碳源均為半乳糖、乙醇和木糖。

通過觀察、統計3個羊肚菌菌株的菌絲生長狀態，分析羊肚菌對碳源的綜合利用情況，結果見表2。

表2 不同碳源對羊肚菌菌絲生長的影響Tab.2 The effects of different carbon sources on the growth of Morchella spp.mycelia

如表2所示，通過統計學數據分析，發現在不同碳源條件下羊肚菌菌絲的生長速度存在顯著差異，即不同碳源對羊肚菌菌絲生長的影響較大。在可溶性淀粉為碳源的培養基上3個羊肚菌菌株的綜合平均生長速度最快，為14.30 mm·d-1，顯著優于其他碳源。其次是蔗糖、幾丁質和糊精，綜合平均生長速度分別為 12.22 mm·d-1、11.99 mm·d-1和 11.93 mm·d-1，雖然這3個碳源之間無顯著差異，但顯著優于除了可溶性淀粉以外的其他碳源。在麥芽糖為碳源的培養基上生長的菌絲較粗壯、濃密，長勢較好，綜合菌絲平均生長速度為9.89 mm·d-1。以山梨醇、乳糖、甘露醇作為碳源以及對照培養基內的菌絲生長速度雖然較快，但是菌絲非常稀疏、纖細，長勢很弱，說明羊肚菌菌絲生長不能很好的利用乳糖、甘露醇、山梨醇。以丙三醇、果糖等作為碳源的培養基上菌絲生長較粗壯，但是生長速度很慢。而在以木糖、半乳糖、乙醇作為碳源的培養基上，羊肚菌菌絲基本不能生長。綜上所述，羊肚菌菌絲生長的最優碳源為可溶性淀粉；以可溶性淀粉、糊精、幾丁質和蔗糖作為碳源時，羊肚菌菌絲粗壯、濃密、長勢很好，為羊肚菌栽培的優選碳源。

2.3 不同氮源對3個羊肚菌菌株的影響

3個羊肚菌菌株在不同氮源培養基上菌絲的生長速度見圖3。

圖3 3個羊肚菌在不同氮源培養基上菌絲生長速度Fig.3 Mycelial growth rate of three Morchella strains on the different nitrogen sources media

如圖3所示，3個羊肚菌菌株在以酒石酸銨為氮源的培養基上，菌絲生長速度明顯低于對照組，此外其他試驗組與對照組相差不明顯。JSJ-M1和JSJ-M6菌株對氮源的適應利用范圍較廣，但JSJM15菌株僅在以豆餅粉為氮源的培養基中菌絲生長速度較對照組有所提高。

通過觀察、統計3個羊肚菌菌株的菌絲生長，分析羊肚菌對氮源的綜合利用情況，結果見表3。

表3 不同氮源對羊肚菌菌絲生長的影響Tab.3 The effects of different nitrogen sources on the growth of Morchella spp.mycelia

由表3可知，羊肚菌菌絲生長可利用的氮源較為廣泛，供試的氮源條件下羊肚菌菌絲生長較快。豆餅粉、硝酸鈉、玉米粉、蛋白胨、酵母粉、硝酸鉀、牛肉膏為羊肚菌菌絲生長的優選氮源，其綜合菌絲平均生長速度在 11.46 mm·d-1～13.11 mm·d-1之間，無顯著差異，且菌絲粗壯、濃密。以氯化銨、硫酸銨為氮源時，菌絲生長速度與對照無顯著差異，但是菌絲較對照組粗壯、濃密、長勢較好。以酒石酸銨為氮源時菌絲生長速度最慢，為6.72 mm·d-1；在生長后期形成絨毛狀菌絲，白色，易老化。此外，以硝酸鈉和硝酸鉀作為氮源時，氣生菌絲生長茂盛，菌絲粗壯、濃密。

2.4 不同條件下六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的生長情況

2.4.1 不同碳源下六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的生長曲線

比較初篩獲得的最優菌株六妹羊肚菌JSJ-M1在不同碳源下的生長曲線，見圖4。

圖4 六妹羊肚菌JSJ-M1菌株在不同碳源培養基中的生長曲線Fig.4 The growth curve of Morchella sextelata JSJ-M1 strain on the different carbon sources media

由圖4可知，六妹羊肚菌JSJ-M1菌株在半乳糖、乙醇和木糖為碳源時，菌絲生長緩慢，生長速度顯著低于對照；供試的其他碳源條件下，菌絲生長趨于線性增長。

2.4.2 不同氮源下六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的生長曲線

比較初篩獲得的最優菌株六妹羊肚菌JSJ-M1在不同氮源下的生長曲線，見圖5。

圖5 六妹羊肚菌JSJ-M1菌株在不同氮源下的生長曲線Fig.5 The growth curve of Morchella sextelata JSJ-M1 strain on the different nitrogen sources media

由圖5可知，在以酒石酸銨為氮源時，六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的菌絲生長最緩慢；其他供試的氮源條件下，菌絲均趨于線性增長。

2.4.3 不同溫度對六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的影響

不同溫度下六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的菌落形態見圖6，菌絲生長速度見圖7。

由圖6和圖7可知，六妹羊肚菌JSJ-M1菌株能夠在4℃～28℃的溫度范圍內生長。在21℃、24℃條件下菌絲生長最快，生長速度分別為13.29 mm·d-1和13.30 mm·d-1。在12℃～18℃時易形成菌核，菌絲分泌色素較少。在28℃時不形成菌核，菌絲分泌大量色素，變黃。34℃時菌絲停止生長。

圖6 不同溫度下六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的菌落形態Fig.6 Colony morphology of Morchella sextelata JSJ-M1 strain at different temperatures

圖7 不同溫度下六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的菌絲生長速度Fig.7 Mycelial growth rate of Morchella sextelata JSJ-M1 strain at different temperatures

2.4.4 不同pH對六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的影響

不同pH對六妹羊肚菌JSJ-M1菌株菌絲生長速度的影響見圖8。

由圖8可知，適合六妹羊肚菌JSJ-M1菌株菌絲生長的pH范圍較廣，pH 4.0～9.0范圍內均能生長；最適pH為5.5～7.0。

圖8 不同pH條件下六妹羊肚菌JSJ-M1菌株的菌絲生長速度Fig.8 Mycelial growth rate of Morchella sextelata JSJ-M1 strain under different pH conditions

2.5 無機鹽對羊肚菌菌絲生長及菌核形成的影響

2.5.1 單因素試驗

不同質量濃度KH2PO4的培養基以及不同質量濃度MgSO4的培養基中3個羊肚菌菌株的菌絲生長情況及形態分別見圖9和圖10。

如圖9和圖10所示，在培養基中單獨添加不同質量濃度的KH2PO4均能夠促進3個菌株的菌核形成；單獨添加不同質量濃度MgSO4時，除了JSJ-M6菌株在1.0 g·L-1MgSO4培養基中可形成菌核外，其他處理均不能形成菌核。

圖9 不同KH2PO4質量濃度的培養基上3個羊肚菌菌株的菌絲生長情況Fig.9 Mycelial growth of three Morchella strains on medium with different mass concentrations of KH2PO4

圖10 不同MgSO4質量濃度的培養基上3個羊肚菌菌株的菌絲生長情況Fig.10 Mycelial growth of three Morchella strains on medium with different mass concentrations of MgSO4

不同濃度的KH2PO4對羊肚菌菌絲生長速度、菌核形成的影響見圖11。

圖11 不同KH2PO4質量濃度對3個羊肚菌菌株的菌絲及菌核的影響Fig.11 The effect of different mass concentrations of KH2PO4on the mycelia and sclerotia of three Morchella strains

如圖 11 所示，在 0.5 g·L-1～3.0 g·L-1KH2PO4培養基中3個菌株的菌絲生長速度均低于不添加KH2PO4的培養基，但均有菌核形成。在0.5 g·L-1～2.0 g·L-1KH2PO4培養基中，3個菌株形成菌核較多；KH2PO4質量濃度為0.5 g·L-1時形成菌核最多，JSJM1、JSJ-M6、JSJ-M15菌株的菌核干質量分別為0.038 g/皿、0.048 g/皿、0.075 g/皿；KH2PO4質量濃度為3.0 g·L-1時，3個菌株的菌核形成最少；不添加KH2PO4的培養基中無菌核形成。

不同質量濃度的MgSO4對羊肚菌菌絲生長速度的影響見圖12。

如圖12所示，培養基中添加質量濃度為0.5 g·L-1～2.0 g·L-1的 MgSO4時能夠促進羊肚菌菌絲的生長。MgSO4質量濃度為1.0 g·L-1時，JSJ-M1和JSJ-M6菌株的菌絲生長最快，分別達到18.14 mm·d-1和15.87 mm·d-1；而JSJ-M15菌株在質量濃度為0.5 g·L-1時菌絲生長最快，達到16.16 mm·d-1。

圖12 不同MgSO4質量濃度對3個羊肚菌菌株菌絲生長的影響Fig.12 The effect of different mass concentrations of MgSO4 on the growth of mycelia of three Morchella strains

綜上所述，培養基中添加KH2PO4可以促進羊肚菌菌核的形成，且質量濃度為0.5 g·L-1～2.0 g·L-1時較好，但對菌絲的生長沒有顯著的促進作用；培養基中添加MgSO4對羊肚菌菌絲的生長有顯著促進作用，且質量濃度為0.5 g·L-1～2.0 g·L-1時較好，但對菌核的形成沒有促進作用。

2.5.2 雙因素組合試驗

在單因素的基礎上進行雙因素組合試驗，統計3個菌株的綜合平均菌絲生長速度及綜合平均菌核干質量，結果見表4。

由表4可知，MgSO4質量濃度相同時，隨著KH2PO4質量濃度的增加羊肚菌菌絲的生長速度呈現下降趨勢；KH2PO4質量濃度相同時，隨著MgSO4質量濃度的增加羊肚菌菌絲生長速度呈現上升趨勢。在不同組合條件下均有菌核形成，菌核的干質量與2種無機鹽的添加量之間無明顯規律。

表4 雙因素組合試驗結果Tab.4 Results of two-factor combination experiment

對組合試驗進行方差分析，結果見表5。

由表5可知，MgSO4和KH2PO4對羊肚菌菌絲生長有顯著的影響，且2個因素對菌絲生長的影響存在顯著的交互作用。

表5 雙因素方差分析Tab.5 Two-way analysis of variance

2.5.3 驗證試驗

結合菌絲生長速度、菌核形成的質量及生產成本等因素，無機鹽的添加量應優先選擇組合1（KH2PO4的質量濃度為0.5 g·L-1、MgSO4的質量濃度為0.5 g·L-1），此條件下羊肚菌的綜合平均菌絲生長速度為18.93 mm·d-1，綜合平均菌核干質量為0.15 g/皿。以此條件進行驗證試驗，結果見圖13。

如圖13所示，CK為不添加任何無機鹽時3個菌株的菌絲生長及菌核情況，綜合平均菌絲生長速度為14.81 mm·d-1，培養15天后不形成菌核；添加組合1的培養基中3個菌株的綜合平均菌絲生長速度為19.03 mm·d-1，培養15天后測量綜合平均菌核干質量為0.17 g/皿。

圖13 組合1培養基中3個羊肚菌菌株的菌絲生長及菌核形成情況Fig.13 Mycelial growth and sclerotium formation of three Morchella strains in the medium of group 1

2.6 羊肚菌的菌核形態

2.6.1 梯棱羊肚菌JSJ-M15菌核形成的形態變化

羊肚菌菌核在形成過程中形態不斷發生變化，以梯棱羊肚菌JSJ-M15為例，其菌核形態變化見圖14。

如圖14所示，梯棱羊肚菌JSJ-M15菌核形成初期為白色；后期慢慢聚集變大，顏色逐漸變黃，形狀不規則；隨著培養時間的延長，菌核細胞分泌大量色素，菌核顏色呈現淺黃色、黃色、棕褐色、黑色的順序變化。

圖14 梯棱羊肚菌JSJ-M15菌核形成過程Fig.14 The sclerotium formation process of Morchella importuna JSJ-M15

2.6.2 3個羊肚菌菌株的菌核類型

在對3個不同品種的羊肚菌菌株進行培養的過程中發現出現了不同的菌核類型，見圖15。

如圖15所示，3個羊肚菌菌絲在試管和平板中的菌核形成情況不同，會出現4種菌核類型及無菌核的現象。出現的菌核類型包括：1）試管I型：菌核聚集在試管壁邊緣；2）試管Ⅱ型：菌核分布在培養基表面；3）平板I型：菌核聚集在接種塊中央，向邊緣擴散；4）平板Ⅱ型：菌核在培養基表面分散分布。

圖15 羊肚菌不同的菌核類型Fig.15 Different sclerotium types of Morchella spp.

供試的六妹羊肚菌JSJ-M1、七妹羊肚菌JSJ-M6和梯棱羊肚菌JSJ-M15菌株在相同條件下，菌核的形成率分別為88%、85%和90%。就形成菌核的形態分布而言，六妹羊肚菌JSJ-M1和七妹羊肚菌JSJM6菌株形成的菌核多為試管Ⅱ型和平板Ⅱ型，梯棱羊肚菌JSJ-M15菌株形成的菌核多為試管Ⅰ型和平板I型。

3 結論與討論

已有研究證明羊肚菌屬真菌有土壤腐生型和外生菌根共生型2種生態型[1]，因此，在羊肚菌屬中僅有少數土壤腐生型品種實現了人工栽培，其中六妹羊肚菌、梯棱羊肚菌和七妹羊肚菌是全國廣泛栽培的羊肚菌種類[2]。刁治民[3]、董雪[4]、柴林山[5]、朱永真[6-7]、熊亞等[8]對單個菌株或同一品種不同菌株的碳源、氮源利用情況進行研究，但因研究種類不同、菌株不同、栽培地域不同等差異，導致研究結果不盡相同；這說明不同地區、不同種類甚至同一物種的不同菌株之間的生物學特性均存在較大差異。因此，通過選擇3個主栽品種的不同菌株進行對比試驗，結果顯示不同菌株對碳源、氮源的利用、無機鹽的敏感程度以及菌核形成類型等均存在差異。通過比較分析，篩選出3個菌株通用的較優碳源為可溶性淀粉、糊精、幾丁質、蔗糖和麥芽糖，較優氮源為玉米粉、豆餅粉、硝酸鉀、硝酸鈉等。3個菌株菌絲生長最差碳源均為木糖、半乳糖和乙醇，菌絲生長最差氮源均為酒石酸氨；羊肚菌菌絲對硝態氮的利用優于銨態氮。同時通過對初篩時菌絲生長速度最快的六妹羊肚菌JSJ-M1菌株進行育種試驗，發現該菌株不適宜在以半乳糖、乙醇和木糖為碳源和以酒石酸銨為氮源的培養基上生長，其菌絲生長的最適溫度為18℃～24℃，最適pH為5.5～7.0。在培養基中添加KH2PO4可以促進羊肚菌菌核的形成，且當質量濃度為0.5 g·L-1～2.0 g·L-1時較好，但對菌絲的生長沒有顯著的促進作用；在培養基中添加MgSO4對羊肚菌菌絲的生長有顯著促進作用，且當質量濃度為0.5 g·L-1～2.0 g·L-1時較好，但對菌核的形成沒有促進作用。這一結論為羊肚菌菌種生產、液體培養條件優化等提供參考依據。

Buscot等[9]認為，羊肚菌在人工栽培條件下能夠形成2種菌核：一種形成時間早并簇集分布在培養皿邊緣，稱為簇集菌核，簇集菌核可能與形成子實體有關；另一種形成晚且分散分布，稱為分散菌核，分散菌核主要起儲藏營養和抵御低溫的作用。此次供試的3個羊肚菌菌株在同一培養基上的菌絲生長情況、菌核形成能力以及菌核形成類型也不同，六妹羊肚菌和七妹羊肚菌2個品種形成的菌核多為試管Ⅱ型和平板Ⅱ型，梯棱羊肚菌品種形成的菌核多為試管Ⅰ型和平板I型。Volk[10]認為羊肚菌形成菌核的條件是低溫培養或養分枯竭。試驗結果表明，較低溫有利于菌核的形成，4℃～21℃易形成菌核而且數量較多，高于24℃不能形成菌核，而且菌絲變黃，老化，分泌大量色素。

羊肚菌的菌核在菌種生產、栽培時常有發生，菌核的形成與培養基種類、培養基厚度、培養基pH、培養溫度、氧氣、光照、無機鹽等許多因素密切相關[11-14]。在進行單因素試驗，特別是以菌核為指標時，必須控制其他因素一致，否則結果可能差異比較大。這也可能是造成不同研究者的結果之間差異較大的原因之一。目前，雖然對羊肚菌的生物學特性研究較多，但碳氮比、溫度、pH、氧氣等影響菌絲生長、菌核形成的因素之間的相互作用關系，以及菌絲吸收營養的內在機制，誘發菌絲向菌核轉變的機制等還有待進一步深入研究。