響應(yīng)面法優(yōu)化赤霞珠葡萄皮渣白藜蘆醇提取工藝的研究

王海波 李薇

(武漢生物工程學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖北 武漢 430415)

葡萄皮渣是葡萄發(fā)酵釀酒之后的剩余物，含有大量的多酚類物質(zhì)[1,2]，其中白藜蘆醇就是重要的組成部分。研究證明，白藜蘆醇具有廣泛的生物學(xué)活性，對多種疾病有顯著的治療效果[3,4]。當(dāng)前，葡萄皮渣被當(dāng)作廢棄物處理，或者簡單的制作成飼料，易造成環(huán)境污染，生物利用度小，不符合對資源充分利用的發(fā)展理念[5,6]。本實驗以寧夏赤霞珠葡萄的皮渣為研究對象，采用超聲波破碎和乙醇浸提相結(jié)合、單因素實驗和響應(yīng)面實驗結(jié)合分析[7,8]的方法對白藜蘆醇進(jìn)行提取[9,10]，以期改進(jìn)葡萄皮渣中白藜蘆醇的提取工藝條件，從而為葡萄釀酒工業(yè)中皮渣的綜合開發(fā)利用及白藜蘆醇的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。

1 實驗方法

將皮渣烘箱50℃烘干，用中草藥粉碎機粉碎40目篩過篩，用石油醚進(jìn)行脫脂處理，脫脂后50℃烘干[11]。

1.1 白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

精確稱取0.0025g白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)品，用無水乙醇完全溶解并用棕色容量瓶定容至50mL。不同稀釋倍數(shù)后，分別得到1μg·mL-1、2μg·mL-1、3μg·mL-1、4μg·mL-1、5μg·mL-1白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。在波長306nm下用無水乙醇作為空白對照分別測吸光值，得出線性回歸曲線方程為y=0.194x+0.0057，其中R2=0.9997，表明白藜蘆醇濃度在1～5μg·mL-1存在較好的線性關(guān)系，可用于后期樣品的濃度分析。

1.2 白藜蘆醇提取與得率計算

稱取葡萄皮渣0.5g，加入乙醇混合均勻，水浴鍋中浸提后，3000r·min-1離心5min，取上清液稀釋100倍，在306nm下測量吸光度值，通過白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度，進(jìn)而計算得率。

白藜蘆醇的得率(μg·mg-1)=(C×V×n)/(m×1000)