血清TAP、bFGF及CDCA5在老年宮頸癌患者中表達水平及其與預后的關系

覃小敏 邢輝 李琳 周敏 毛小剛 呂華兵 楊將

(湖北文理學院附屬醫院 襄陽市中心醫院婦產科，湖北 襄陽 441021)

宮頸癌是常見的女性生殖器官癌癥，其發病率在所有女性惡性腫瘤中排第二位，據最新統計資料顯示，我國每年新增宮頸癌患者達13萬，嚴重威脅女性健康〔1〕。宮頸癌患者的發病率逐漸升高可能與環境污染、生活壓力、飲食習慣等多方面因素有關，流行病調查研究顯示，人類乳頭瘤病毒(HPV)感染是造成宮頸癌變的重要原因之一，宮頸癌患者中，HPV感染率達90%以上〔2〕。腫瘤標志物在一定程度上反映了腫瘤的發展程度，絕大多數宮頸癌患者死亡的原因為腫瘤對周圍組織的侵襲和腫瘤細胞的散播，但目前仍缺乏可靠的宮頸癌細胞生長、浸潤、轉移的抑制性指標〔3〕。腫瘤異常蛋白(TAP)是腫瘤細胞代謝過程中釋放的，是由糖鏈結構異常的糖蛋白和鈣組成的復合物，TAP水平直接反映癌變的程度和數量〔4〕；堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)是一類強有力的細胞有絲分裂原和促血管新生因子，在腫瘤細胞的增殖、分化和血管形成過程中具有重要作用，可反映腫瘤復發和轉移〔5〕；細胞分裂周期相關蛋白(CDCA)5是后期促進復合物的底物之一，可調控腫瘤細胞周期，但目前有關CDCA5的表達及作用機制類的研究較少〔6〕。本研究擬分析血清TAP、bFGF及CDCA5表達及其與預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年2月至2019年1月于湖北文理學院附屬醫院治療的98例宮頸癌患者為癌癥組，另選取同期女性體檢健康的56例為健康組，本研究經醫院醫學倫理委員會許可。納入標準：①符合《宮頸病變的診斷與治療》〔7〕中相關診斷標準，且經病理學檢查確診；②無放化療、免疫治療史；③年齡65～85歲；④患者及家屬均對本研究知情同意。排除標準：①合并感染性疾病和免疫功能疾病者；②近3個月內有糖皮質激素類藥物使用史；③合并其他部位惡性腫瘤者。癌癥組年齡65～82歲，平均(75.16±2.05)歲；健康組年齡66～84歲，平均(73.12±2.41)歲。兩組年齡差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2方法 ①TAP測定：采集患者清晨空腹靜脈血置于載玻片，涂抹均勻并晾干，置于水平凈化操作臺，將TAP凝劑充分搖勻后均勻滴到血片上，待標本干燥后放置顯微鏡下觀察其形態。TAP正常(無明顯凝聚物)：未見明顯類晶體凝聚物，呈顆粒狀，凝聚物面積0～121 μm2；TAP弱陽性(凝聚物較小)：邊緣較完整的類晶體凝聚物，凝聚物面積121～225 μm2；TAP陽性(凝聚物較大)：邊緣較完整的類晶體凝聚物，凝聚物面積≥225 μm2。②bFGF檢測：采用Western印跡法進行測定，采集患者靜脈血，離心處理后取上清液，在聚苯乙烯板中加入0.1 ml上清液，置于4℃的環境中過夜孵育，加入磷酸鹽緩沖液沖洗3次，3 min/次，加入bFGF抗體，37℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液沖洗3次，3 min/次，后對各標本進行免疫組化染色。計算各個標本中bFGF的表達水平。③CDCA5測定：采集患者癌組織研磨取總蛋白，使用Bradford法進行蛋白質定量，將提取的總蛋白經聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉膜、加入5%脫脂牛奶后封閉處理，加入CDCA5抗體，置于4℃的環境中過夜孵育后加入2抗，37℃孵育2 h后采用電化學發光法檢測，分析CDCA5表達量。

1.3統計學方法 采用SPSS19.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗或Fisher精確檢驗、Cox比例風險模型分析。

2 結 果

2.1兩組血清TAP、bFGF及CDCA5水平比較 癌癥組TAP、bFGF及CDCA5水平明顯高于健康組(P<0．05)，見表1。

表1 兩組血清TAP、bFGF及CDCA5表達比較

2.2影響老年宮頸癌患者預后的單因素分析 98例患者中生存年限<2年15例，≥2年83例。單因素分析結果顯示，初潮時間、病理類型、FIGO分期、TAP、bFGF及CDCA5的表達水平在生存年限<2年和≥2年的患者中具有統計學意義(P<0．05)，而年齡、孕次、產次和病理分化程度比較無統計學差異(P>0.05)，見表2。

表2 影響老年宮頸癌患者預后的單因素分析〔n(%)〕

2.3影響老年宮頸癌患者預后的多因素分析 病理類型、FIGO分期、TAP、bFGF及CDCA5的表達水平均為影響老年宮頸癌患者預后的相關因素(P<0.05)，見表3。

表3 影響老年宮頸癌患者預后的多因素分析

3 討 論

隨著人口老齡化的加劇，老年宮頸癌的發病人數逐漸增多〔8〕。雖然目前多種治療方式的綜合應用明顯改善了宮頸癌患者的治療效果，但老年宮頸癌患者的死亡率仍較高，5年生存率相對較低，這主要與其臨床和病理特征有關〔9，10〕。主要原因如下，①老年患者由于雌激素水平降低，發生宮頸萎縮、鱗柱交界區上移等改變，故在體檢時不易發現異常〔11〕；②大多數患者在發現疾病時就已處在疾病中晚期，治療難度大〔12〕；③腺癌對放療不敏感，已發生轉移〔13〕；④老年人體質弱，不耐受手術，放化療不良反應多，預后差〔14〕。宮頸癌已嚴重影響到我國婦女的健康和生存質量，若能找到診斷宮頸高敏感性的指標，可提高宮頸癌早期診斷率，有效協助制定方案，改善患者預后。

大部分腫瘤形成時常伴有糖鏈的變化，TAP是多種惡性腫瘤發展過程中產生的糖鏈結構異常的糖蛋白和鈣共同組成的蛋白化合物的總稱，積累到一定程度后釋放入外周血液，血清TAP水平可間接表示癌變的程度，且TAP對全身腫瘤均具有敏感性，可檢測90%以上腫瘤形成的異常糖鏈糖蛋白，通過診斷腫瘤“蛋白異常形態”提高腫瘤檢測的靈敏性，具有檢測便利、多種腫瘤信號易感的特點，對篩查無臨床癥狀腫瘤患者意義重大〔15，16〕。但關于TAP是否能作為預后指標的研究較少。有研究〔17〕提出“血管生成的開關平衡假說”，認為血管生成促進因子和血管生成抑制因子共同調控血管生成以來，臨床已分離、純化多種血管生成相關因子，bFGF為首個發現的促微血管生長因子，其特性類似于激素，微量即可促進細胞分裂增殖，體內幾乎所有細胞如巨噬細胞、內皮細胞和成纖維細胞均能產生bFGF，在人體內分布廣泛〔18〕。bFGF可能是通過細胞膜微小破裂或細胞死亡而釋放，也可能是由自分泌或旁分泌形式發揮生物學作用，并依賴內質網-高爾基復合通路將其釋放至細胞外，作用于靶細胞。bFGF對靶細胞的生物學效應主要通過高親和力的酪氨酸激酶受體和低親和力的肝素/硫酸乙酰肝素蛋白聚糖受體發揮作用，可促分裂、分化、促進血管生成和胚胎發育，在腫瘤發生、發展和轉移過程中有重要作用〔19，20〕。腫瘤組織學檢查發現，在腫瘤血管新生過程中，bFGF對內皮細胞有高度選擇性〔21〕。相關文獻也表明bFGF可促進癌細胞分裂增殖和血管生成，在腫瘤的發生、發展、浸潤和轉移過程中起重要作用〔22〕。另有研究〔23〕表明，當組織發生炎癥或外傷時，受損細胞產生以bFGF為主的多種因子進入創傷部位，刺激相關細胞快速增殖，合成新的細胞間質和毛細血管增生，bFGF的高表達可促進創傷修復。CDCA5蛋白是由CDCA5基因編碼的，最初是作為后期促進復合物的一個底物被發現，CDCA5是有絲分裂過程中姐妹染色單體結合和分離的關鍵因素之一〔24〕。研究〔25〕表明CDCA5在多種腫瘤組織中表達明顯上調，如胃癌、肝細胞癌、口腔鱗狀細胞癌和肺癌等。有研究〔26〕報道了CDCA5的高表達與尿路上皮癌患者晚期臨床癥狀和不良預后聯系密切，但CDCA5在腫瘤細胞中的分子作用機制和促癌的潛在機制仍有待進一步研究。最新研究〔27〕發現，CDCA5的高表達還可提示胃癌患者預后不良。本研究結果表明TAP、bFGF及CDCA5的高表達可能參與了宮頸癌的發生和發展，且可作為評估老年宮頸癌患者遠期預后的有效指標。

綜上，血清TAP、bFGF及CDCA5在老年宮頸癌患者中以較高水平表達，與癌癥的發生和發展關系密切，可作為評估預后的有效指標。