蒙藥協日嘎四味湯對糖尿病大鼠腎保護作用的實驗研究

摘要：為探究蒙藥協日嘎四味湯對糖尿病大鼠腎保護作用。選取雄性健康Wister大鼠48只，隨機分為6組，即正常組、DM模型組、協日嘎四味湯低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照組。除正常組外其余各組均注射鏈脲佐菌素糖尿病模型。協日嘎四味湯低劑量組以0.34g/kg/d、中劑量組以0.68 g/kg/d和高劑量組以1.35g/kg/d灌胃給藥，正常組和模型組給予等量20g/kg/d蒸餾水灌胃，陽性對照組依那普利1.5mg/kg/d灌胃給藥，每周稱體重調整用藥劑量，連續用藥8周。結果發現協日嘎四味湯對于DM大鼠的腎臟損傷有一定的保護作用，其中高劑量蒙藥組血糖較模型組顯著降低，可降低糖尿病大鼠的血糖。

【中圖分類號】 ?R587.1【文獻標識碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）15--02

前言

隨著人們生活水平的提高，人均壽命延長，一些慢性疾病的患病率正逐年增長。糖尿病（Diabetes Mellitus，DM）是一種由胰島素分泌及作用缺陷引起，以血糖升高為主要特征的慢性代謝性疾病[1]。2016年4月6日首次發布的全球糖尿病報告顯示：在最近40年，全球范圍內的糖尿病患者已達到4.22億人，較之前增加了3倍。據世界衛生組織（World Health Organization，WHO）預測，到2030年，糖尿病將成為第七項主要死亡原因[2]。目前，糖尿病在全球范圍內廣泛流行，糖尿病及其并發癥已成為嚴重危害人類健康的世界性公共衛生問題，引起了世界各國的高度重視。

氧化應激在糖尿病發病機制中發揮著非常重要作用，幾乎所有糖尿病并發癥相關通路的激活均與機體氧化應激反應有關[3]。機體內抗氧化與促氧化物質相互作用而處于動態平衡狀態。機體各種病理因素導致抗氧化物質數量減少，或者促氧化物質數量增多，以及抗氧化應激反應不充分等，使得機體內活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）含量增加。ROS能夠氧化蛋白、脂類、細胞膜等生命基本物質，使其結構和功能發生變化，導致糖尿病、腫瘤等疾病發生[4]。因此，清除體內過剩自由基、抑制體內氧化應激，已成為預防和治療糖尿病有效途徑之一。蒙藥在防治糖尿病等方面有其獨特優勢，從天然藥物中探尋抗氧劑成為目前研究熱點[5]。

蒙藥協日嘎四味湯是由姜黃、蒺藜、梔子、黃柏這四味中藥材組成的中藥方劑。蒙藥協日嘎四味湯在蒙醫臨床治療中常用于降血糖、利尿等的蒙藥煮散制劑[6]。蒙藥協日嘎四味湯又被稱為勇瓦四湯、沙日嘎四湯、姜黃四味湯等，其最早記載于蒙醫古籍《觀者之喜》[7]。本文通過鏈脲佐菌素誘導建立糖尿病大鼠模型，并探究蒙藥協日嘎四味湯對糖尿病大鼠的保護作用，為蒙藥防治糖尿病提供理論依據。

1、實驗材料

1.1 動物

清潔級健康Wister大鼠，雄性，體重200±10g，由遼寧長生生物中心提供，編碼SCXX（遼）2015-0001。

1.2 主要試劑與藥物

蒙藥協日嘎四味湯：由內蒙古民族大學附屬醫院蒙藥制劑室提供（編碼：20180704）。每次3～5 g，臨用時水煎煮提取后，并用蒸餾水調配至試驗所需濃度。依那普利（上海鑫雅藥物有限公司，編碼H20083534）;鏈脲佐菌素（上海原葉生物有限公司）;水合氯醛（浙江福田藥物有限公司）;其他試劑均為分析純。

1.3 主要儀器

微量移液器（德國Eppendorf AG）;血糖儀（羅氏公司）;酶標儀（美國Bio-Rad公司）;全自動生化分析儀（日本日立有限公司）。

2、實驗方法

2.1 模型制備及給藥分組

選取體重200±10g清潔級雄性健康Wister大鼠48只，適應性喂養一周，隨機分為6組，即正常組、DM模型組、協日嘎-4味湯低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照組（依那普利組）。除正常組外其余各組在空腹12h狀態下腹腔注射鏈脲佐菌素50mg/kg建立DM模型，測定模型組大鼠空腹血糖，血糖值在≥16.7 mmol/L范圍者視為造模成功[8]。

協日嘎四味湯低劑量組以0.34g/kg/d、中劑量組以0.68 g/kg/d和高劑量組以1.35g/kg/d灌胃給藥，正常組和模型組給予等量20g/kg/d蒸餾水灌胃，陽性對照組依那普利1.5mg/kg/d灌胃給藥，每周稱體重調整用藥劑量，連續用藥8周。在實驗過程中，平均第2、4、6、8周每周測一次空腹血糖和尿糖，若出現低血糖現象，適當增加飲食次數，避免對實驗結果造成不良影響。

2.2 取材

大鼠于末次給藥后，單籠收集大鼠24 h尿液，離心，4 ℃保存，用于尿蛋白（ALB）檢測;將大鼠禁食不禁水12 h，臨處死前稱重、測血糖，10 %水合氯醛腹腔注射麻醉后，腹主動脈采血，2000 rpm，低溫離心10 min，取血清，-20 ℃保存，用于Scr、BUN含量測定。

2.3腎組織病理變化

取大鼠腎組織，4%多聚甲醛溶液固定腎臟組織，經乙醇脫水，石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察腎臟形態學改變。

2.4 數據分析

所有數據均采用SPSS17.0統計軟件進行統計學分析，計量資料數據結果用均數±標準差（x±s）表示，P<0.05為差異具有統計學意義。

3、結果

3.1各組大鼠一般情況比較

研究過程中，正常對照組大鼠精神狀況良好，毛發有光澤，動作自如、反應靈敏;模型組大鼠精神萎靡，反應遲鈍，活動倦怠，毛發雜亂泛黃無光澤偶有脫毛，尿量明顯增多，大便稀;協日嘎-四味湯高劑量組大鼠反應較靈敏，毛色可，尿多、大便尚可;陽性對照組與協日嘎-四味湯低、中劑量組大鼠反應較為遲鈍，毛發尚可，尿量多，大便稀釋。874A93C3-A243-42D9-AB06-06265A1C55B2

3.2各組大鼠血糖、體重的比較

如表1所示，模型組大鼠的血糖在造模成功后一直處于高血糖狀態，且逐漸上升，與正常組比較差異顯著（P <0.01）;協日嘎-四味湯低、中、高劑量組中，在藥物干預后與模型組比較，血糖均有顯著性差異（P <0.05）;協日嘎-四味湯低、中劑量組間無明顯變化;協日嘎-四味湯高劑量組與模型組比較，血糖有顯著性差異（P <0.01）;陽性對照組與模型組比較無顯著性差異。正常組大鼠的體重持續增長;其他各組大鼠的體重均有所增長，實驗結束時，模型組大鼠體重與正常組比較已有顯著性差異（P <0.01），其中協日嘎-四味湯低、中、高劑量組與模型組比較均有顯著性差異（P<0.05）。

3.3各組大鼠生化指標的比較

如表2所示，與正常組大鼠比較，模型組的BUN、SCr 、ALB均明顯升高（P<0.01）;經藥物干預后，協日嘎-四味湯高劑量組大鼠BUN、SCr、ALB含量較模型組均明顯減少（P <0.05），陽性對照組和協日嘎-四味湯低劑量組中BUN、SCr的含量與模型組比較無顯著性差異;陽性對照組和協日嘎-四味湯低、中劑量組中ALB的含量與模型組比較無顯著性差異;協日嘎-四味湯中、高劑量組中BUN、SCr的含量相比于模型組均明顯減少（P <0.05），且陽性藥物對BUN、SCr、ALB未表現出明顯作用。

3.4各組大鼠腎臟病理切片的比較

如圖1所示，正常組大鼠腎組織形態正常，腎小球形態規則，腎小管排列緊密整齊。與正常組相比，模型組腎小球未見明顯病變，腎小管可見上皮細胞較多空化空泡變性壞死，腎小管管腔可見蛋白管型和細胞管型。陽性對照組部分腎小管可見上皮細胞空化空泡變性壞死。蒙藥高劑量組偶見腎小管可見上皮細胞空化空泡變性。蒙藥低劑量組部分腎小管可見上皮細胞空化空泡變性壞死，較陽性藥物組差。蒙藥中劑量組較多腎小管可見上皮細胞空化空泡變性，較低劑量組差。可得出結論，蒙藥協日嘎-四味湯干預DM大鼠腎臟病理損傷較模型組得到了明顯改善，尤其高劑量協日嘎-四味湯對于DM大鼠腎臟病理損傷有明顯改善作用。

4.討論

4.1 正常大鼠喂養普通飼料，注射一定劑量STZ可造成胰島β細胞某些功能的損傷，胰島素分泌量降低，從而建立II型糖尿病模型。

4.2諸多研究已證實蒙藥協日嘎四味湯單味藥都具有良好的降血糖及降血脂、抗炎、抗氧化等作用，在治療糖尿病及并發癥方面均有良好的運用前景[9]。且蒙藥協日嘎四味湯的處方成分價格低廉、不良反應少，具有給藥方便等優勢，蒙藥協日嘎四味湯具有很大的開發利用價值和潛力。本研究發現協日嘎四味湯對糖尿病大鼠腎臟病理損傷有明顯改善作用，但其降糖機制及有效成分仍未研究透徹，藥物之間的配伍應用也有待探索。

參考文獻：

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[9] 楊婷， 賈鑫， 董玉. 蒙藥復方協日嘎四味的研究進展[J]. 內蒙古醫科大學學報， 2010（s3）：13-16.

【作者簡介】

姓名：房私日吉 出生年月—：1993.06.02 性別：女 民族：蒙古族 籍貫：內蒙古自治區通遼市 職務/職稱：住院醫師 學歷：碩士研究生 ?研究方向：內科874A93C3-A243-42D9-AB06-06265A1C55B2