在日糧中添加抗菌肽對鯉魚免疫力的影響

摘要：試驗以鯉（Cyprinus carpio）為研究受試對象，在養殖生產中的基礎餌料中使用不同含量的抗菌肽（antimicrobial peptide），研究其對機體疫功能的影響。該試驗中，選取200尾體重差異不顯著、健康無病的鯉魚隨機分為4組（每組包含5個重復，每個重復10尾）。對照組鯉飼喂基礎日糧，試驗1組、2組、3組鯉飼喂分別在基礎日糧中添加50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg的抗菌肽，預試驗10d，正式試驗60d。試驗結束檢測鯉的免疫指標。結果表明：試驗2組鯉血清中的IL-1α含量顯著高于對照組和試驗1組（P<0.05）;試驗3組鯉血清中IL-1α含量有比對照組含量提高趨勢（P>0.05）。試驗2組中的鯉血清中IL-1β、IgM含量顯著高于對照組（P<0.05），試驗3組IL-1β、IgM含量有提高趨勢，但與對照組相比差異不顯著（P>0.05）。試驗2組鯉機體溶菌酶活性顯著高于對照組、試驗1組、試驗3組（P<0.05）。抗菌肽對鯉的MHC無顯著影響（P>0.05）。研究表明，在鯉日糧中添加一定含量的抗菌肽可以顯著提高鯉機體的免疫功能，且最適添加量為100mg/kg。

關鍵詞：抗菌肽（antimicrobial peptide）;免疫功能;鯉（Cyprinus carpio）

中圖分類號：S 963文獻標志碼：A

隨著漁業養殖的快速發展，高度、集約化的養殖成為當今養殖的主要模式。經濟效益的增張也帶來一系列問題，如水環境污染、魚體疾病等。在過去的養殖過程中，主要依賴抗生素來預防或治療疾病，但抗生素的濫用產生了耐藥菌株、污染環境、畜產品殘留等問題，進而威脅人類健康。隨著禁抗時代的到來，開發替抗飼料添加劑迫在眉睫。大量替抗產品的研發與應用均取得一定的效果。其中，抗菌肽在魚類養殖中也得到很好的應用。大量研究表明，在魚類養殖生產中，使用適量的抗菌肽對其生長、飼料利用率、腸道內的酶活性、肉質、免疫力及抗氧化功能均具有很好地改善作用[1-2]。但抗菌肽在鯉的實際養殖生產中的應用較少。故該試驗以鯉（Cyprinus carpio）為研究受試對象，研究抗菌肽（antimicrobial peptide）對其機體體液免疫和細胞免疫功能的影響，以期為抗菌肽安全、合理地應用于鯉的養殖生產中提供一定的參考及理論數據。

1? 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用抗菌肽采購于北京中農穎泰生物技術有限公司，抗菌肽是由37個氨基酸殘基組成的，分子量為3.8 KD，活性肽大于100萬U/g。試驗所用鯉魚購買于當地漁場。

1.2 試驗動物和試驗處理

該試驗養殖中，選取200尾體重無顯著差異、健康體況優良的鯉隨機分為4組（每組包含5個重復，每個重復10尾）。對照組中的試驗鯉被投喂了基礎日糧，而試驗1組、試驗2組、所用3組鯉被投喂了分別在基礎日糧中添加50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg的抗菌肽的基礎日糧。試驗期分為2個過程，其中鯉魚預試驗周期為10d，而正式試驗周期為60d。試驗鯉的基礎日糧如下表1所示。

1.3 試驗鯉的日常飼養管理

試驗鯉魚飼養于120 L的水族箱中，試驗開始前馴化10d，飼喂基礎日糧。每日換水量為1/3。試驗養殖中，水箱中水溫約為24-25 ℃，水中的溶氧濃度保證大于5.2 mg/L，而氨氮濃度要小于0.3 mg/L。試驗周期內，試驗鯉被投喂的餌料量約為魚體重的2.5%。每天8：00和16：00各投喂1次。

1.4 測定指標及方法

試驗結束當天，鯉禁食12hrs后，尾靜脈采血，經3500 r/min 離心8mins，用移液槍吸取上層血清于-20 ℃保存備用，用于測定免疫指標。主要測定溶菌酶、白細胞介素IL-1α、IL-1β、免疫球蛋白M（IgM）、主要組織相容復合體（MHC）等指標，試劑盒購買于南京建成生物工程研究所。嚴格按照試劑盒說明書進行檢測。

1.5 數據分析

養殖試驗后，采集鯉血液后檢測的免疫指標數據在經過Excel 2020簡單地整理后，使用統數據計學軟件SPSS 22.0分析數據的顯著性，數據見的兩兩比較使用了鄧肯法，P<0.05表示此指標具有顯著性，結果用免疫各指標數據的平均數呈現。

2 試驗結果

抗菌肽對試驗鯉魚機體免疫功能的影響如下表。從表2里的數據可知，試驗2組鯉血清中的IL-1α含量顯著高于對照組和試驗1組（P<0.05）;試驗3組試驗鯉血清的IL-1α含量有比對照組含量提高的趨勢（P>0.05）。試驗2組中的鯉血清中的IL-1β、IgM含量顯著高于對照組（P<0.05），試驗3組IL-1β、IgM含量有提高趨勢，但與對照組相比差異不顯著（P>0.05）。試驗2組鯉機體溶菌酶活性顯著高于對照組、試驗1組、試驗3組（P<0.05）。不同劑量的抗菌肽對試驗鯉MHC濃度未產生顯著性的影響（P>0.05）。

3 討論

動物機體內的細胞因子及免疫球蛋白含量在機體的免疫系統中起著重要的作用，是機體免疫系統的重要組成部分。細胞因子在機體炎癥反應和免疫應答中起著至關重要的作用;免疫球蛋白M是機體抵御外來細菌侵襲的第一道防線。該試驗的免疫數據結果發現，一定含量的抗菌肽對試驗鯉的血清的IL-1α、IL-1β、IgM含量及溶菌酶活性均具有很好地改善作用，表明抗菌肽可以顯著提高機體的免疫功能。在董曉慶的研究中，鯉日糧添加一定劑量的抗菌肽可以顯著提高血清中堿性磷酸酶、酸性磷酸酶活性和溶菌酶活性，IL-1α、IL-1β、IgM含量也顯著提高，隨著抗菌肽劑量的逐漸升高，其含量呈現先升高后降低的趨勢，與本研究鯉的免疫結果具有相似性[3]。鯉養殖中，使用抗菌肽提高其機體免疫功能的原因主要與其具有抗菌、抑菌功能有關，進而增強了試驗鯉的機體的抗病、抗應激的能力。

4 結論

在該試驗養殖條件下，發現抗菌肽對試驗鯉魚的IL-1α、IL-1β、IgM含量及溶菌酶活性具有顯著的積極改善作用，可以提高鯉機體的免疫功能，且在本試驗條件下，最適添加量為100 mg/kg。

參考文獻：

[1]林鑫，毛述宏，楊陽，等. 飼料中添加抗菌肽對錦鯉生長，非特異性免疫力和抗病力的影響[J]. 動物營養學報，2013，025（008）：1860-1865.

[2]黃滄海，李春輝，張冬冬. 抗菌肽與常用抗菌素對羅非魚生長性能影響的比較研究[J]. 中國畜牧雜志，2011，47（017）：52-55.

[3]董曉慶. 抗菌肽對建鯉生長性能及免疫功能影響的研究[D]. 吉林農業大學，2015.

Effects of adding antimicrobial peptides in diet on immunity of Cyprinus carpio

Abstract：In this study， Cyprinus carpiowas used as the research object to investigate the effects of different contents of antimicrobial peptide in the basic feed in the culture and production of Cyprinus carpio. In this experiment， 200 healthy and disease-free carp with no significant body weight difference were randomly divided into 4 groups （each group contained 5 replicates and each replicate contained 10 carp）. The control group was fed a basal diet， and the control group was fed a basal diet supplemented with 50mg/kg， 100mg/kg and 150mg/kg antimicrobial peptides in groups 1， 2 and 3， respectively. The pre-experiment lasted for 10 days and the formal experiment lasted for 60 days. At the end of the experiment， the immune indexes of Cyprinus carpio were detected. The results showed that the serum IL-1α content in experimental group 2 was significantly higher than that in control group and experimental group 1 （P<0.05）; The serum IL-1α content of experimental group 3 was higher than that of control group （P<0.05）. The contents of IL-1β and IgM in serum of experimental group 2 were significantly higher than those in control group （P<0.05）， the contents of IL-1β and IgM in test groups showed an increasing trend， but there was no significant difference compared with control group （P<0.05）. The lysozyme activity of experimental group 2 was significantly higher than that of control group， experimental group 1 and experimental group 3 （P<0.05）. Antimicrobial peptides had no significant effect on the MHC of Cyprinus carpio （P<0.05）. The results showed that adding a certain amount of antimicrobial peptides in the diet could significantly improve the immune function of Cyprinus carpio， and the optimal supplemental level was 100mg/kg.

Keywords：antimicrobial peptides; Immune function; Cyprinus carpio

文章編號：16742419（2022）03003203

作者簡介：尹文靜（1987.4- ），女，漢族，學士，山東省泰安市東平縣人。東平縣水產業發展中心助理工程師。研究方向：淡水苗種繁育技術。