“莧山黃”復方制劑穩定性試驗研究

劉夢倩，王良剛，黃春芳，李 丹，季 露，胡庭俊

（廣西大學動物科學技術學院，廣西南寧 530005）

中藥復方具有藥效好、副作用少等優點[1-2]，長期的臨床實踐和可靠的治療效果使之成為極好的天然生物活性化合物來源[3-4]。目前，傳統中藥復方質量控制標準的建立和其穩定性確立的標準并不完善，藥品的穩定性、貯藏條件等是藥品的重要屬性，在商品化的藥物標簽中必須明確標注，以此指導藥品的正確貯藏和使用[5-6]。

“莧山黃”復方制劑包括中藥部分和微生態部分，是1中實驗室前期研究的、在即配即用的原則下按照一定比例混合而成的新型中藥微生態復方制劑。中藥部分由馬齒莧、山藥和甘草等組成；微生態部分則是由市場購得的多種益生菌粉組成。初步研究表明，該復方制劑可顯著提高羅非魚的生長性能和免疫功能，并制定了該制劑的質量標準。本研究中，穩定性試驗的檢測指標即參照此標準和《中國獸藥典》2015版二部（附錄0101）中散劑穩定性的相關規定[7]。同時該復方制劑中由市場獲得的商品化微生態部分應嚴格按照商品說明書進行保存。在即配即用的原則下，本研究僅進行中藥部分穩定性的研究。中藥部分中馬齒莧[8]、山藥[9]等發揮生物活性的主要成分為多糖，甘草中的主要生物活性物質為甘草酸[10-11]。因此，在含量測定時主要對多糖和甘草酸進行檢測，以期為該中藥復方的存儲條件提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

“莧山黃”復方制劑是廣西大學動物科學技術學院獸醫藥理實驗室自主研制的新型中藥復方制劑，主要由馬齒莧、山藥和甘草組成的中藥部分和多種益生菌組成的微生態部分按一定比例混合制得，現配現用。

微生態部分為市場購得的多種益生菌粉，按照市售包裝要求進行保存，僅在使用前與中藥部分按照一定比例混合。

中藥部分藥材均購自南寧市懷中原生中草藥經營部，由廣西大學動物科學技術學院藥理實驗室打粉混合；益生菌購自山東中科嘉億生物工程有限公司，按照市售包裝要求進行保存。

1.2 主要儀器

SHH-100GD藥品強光照射試驗箱、SHH-250SD藥品穩定性試驗箱（重慶永生實驗儀器廠）；Waters e2695高效液相色譜儀、Waters 2998光電二極管陣列檢測器（Waters公司）；UV1750紫外可見分光光度計（島津公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 強光照射試驗

將藥品強光照射試驗箱的光照條件設置為（4 500±500）Lx，取3批“莧山黃”復方制劑的中藥部分作為供試品，置于培養皿中攤成≤5 mm薄層進行試驗。

于試驗的第0、5、10 d分別將供試品取出，進行檢測觀察。檢測指標為性狀、鑒別、甘草酸含量、總多糖含量、外觀均勻度、水分和粉末細度，通過將每月上述各指標與第0 d對比，確定待試藥品的穩定條件，以下各穩定性試驗檢測指標與此相同。

1.3.2 高溫試驗

將3批“莧山黃”復方制劑的中藥部分在培養皿中攤成≤5 mm薄層，60℃保存，分別于第0、5和10 d取樣，通過與第0 d對比，考察供試品在高溫環境下的變化情況。

1.3.3 高濕試驗

將3批“莧山黃”復方制劑的中藥部分在培養皿中攤成≤5 mm薄層，置于溫度為25℃、相對濕度（75±5）%的條件下，在第0、5和10 d分別取樣，按穩定性所需考察項目進行檢測，考察供試品暴露于高濕條件下的變化情況。

1.3.4 加速試驗

設置溫度（40±2）℃，相對濕度（75±5）%，將3批市售包裝的中藥部分放入穩定性試驗箱。分別于第0、1、2、3、6個月取樣檢測，按上述檢測指標進行測定，通過將每月各指標與第0月對比確定待試藥品的穩定性。

1.3.5 長期試驗

取3批市售包裝的“莧山黃”復方制劑中藥部分在溫度（25±2）℃，相對濕度為（60±10）%的環境下存放12個月，分別于第0、3、6、9、12個月取樣考察。

2 結果與分析

2.1 強光照射試驗結果（見表1）

由表1可知，樣本放置在強光條件下10 d，其性狀未發生肉眼可見的改變；試驗期間，多糖和甘草酸含量均呈下降趨勢，下降幅度較小且在質量標準內；外觀均勻度、水分含量和粉末細度均符合要求。

表1 強光照射試驗結果Tab.1 Result of strong light irradiation test

2.2 高溫試驗結果（見表2）

由表2可知，60℃條件下放置10 d，3批“莧山黃”復方制劑的中藥部分基本性狀和有效成分種類未發生改變，且均符合質量標準規定；多糖和甘草酸含量均顯著降低，雖仍在規定范圍內但變化幅度較大；外觀均勻度、水分含量和粉末細度無明顯改變且均符合規定。

表2 高溫試驗結果Tab.2 Result of high temperature test

2.3 高濕試驗結果（見表3）

由表3可知，0～5 d，3批供試品的各項檢測指標均符合質量標準要求，但在高濕條件下放置10 d后，3批供試品的水分含量均偏高且高于質量標準規定范圍。

表3 高濕試驗結果Tab.3 Result of high humidity test

2.4 加速試驗結果（見表4）

由表4可知，3批“莧山黃”復方制劑中藥部分的性狀未發生改變，為棕黃色粉末；薄層色譜法（TLC）和多糖鑒別試驗結果說明，3批供試品均含有多糖和甘草成分，符合規定；多糖和甘草酸含量整體呈下降趨勢，但均符合質量標準規定，其余各項檢測指標也均符合規定。

表4 加速試驗結果Tab.4 Result of accelerated test

2.5 長期試驗結果（見表5）

由表5可知，試驗期間3批“莧山黃”復方制劑的各項指標皆符合要求，其中多糖和甘草酸含量指標呈下降趨勢，但含量符合質量標準規定。

表5 長期試驗結果Tab.5 Result of long term test

3 討論

“莧山黃”復方制劑是一種中藥部分由馬齒莧、山藥和甘草等按一定比例混合而成的中藥復方制劑。傳統的中草藥復方組成成分復雜，其主要有效成分或臨床效用成分在實際生產應用中常隨著環境因素的改變而發生改變[12-13]。因此，確定其穩定條件、影響因素，進行規范化生產和貯藏是新藥研發階段中不可或缺的一步。

藥物穩定性試驗的主要目的是考察藥物制劑在溫度、濕度、光線的影響下，其各項重點待測指標隨時間變化的規律；以此確定的藥物穩定性規律可用于科學指導藥品的生產、包裝、貯存、運輸等，保證臨床用藥物的安全性。

穩定性試驗主要包括影響因素試驗、加速試驗和長期試驗。其中，影響因素試驗是在比加速試驗更激烈的條件下探討藥物制劑的固有穩定性，分別從溫度、濕度和光照條件等方面了解藥物穩定性影響因素的試驗。

本研究進行了影響因素試驗，檢測了10 d內3批“莧山黃”復方制劑中藥部分在強光、高溫和高濕情況下理化性質、有效成分含量等指標的變化情況。結果發現，分別處于高溫和強光條件下的供試品，其多糖和甘草酸含量呈下降趨勢；強光條件的下降幅度小于高溫條件，雖仍處于規定范圍內，但與0 d相比含量明顯降低，表明溫度和光照條件均可影響該復方制劑中藥部分中有效成分的穩定性。

高濕試驗結果顯示，濕度基本不會影響該復方制劑的有效成分含量，但長期暴露于高濕環境會使其含水量增加超過規定范圍，可能會導致藥物受潮發霉，縮短使用時限。劉香南等[14]在中藥飲片的貯存條件研究中指出，影響中藥質量變異的主要原因是溫度、光線和濕度。結合本研究中的影響因素試驗結果說明，溫度、濕度和光照條件均為影響“莧山黃”復方制劑中藥部分穩定性的重要因素，在貯藏和運輸時均需嚴格控制溫度、濕度條件，并盡量避免陽光直接照射。

藥物加速穩定性試驗中，在溫度為（40±2）℃、相對濕度為（75±5）%的超常條件下進行，通過加速藥物的化學或物理變化觀察出影響藥物各項檢測指標的因素，同時評估不同批次藥物的質量，為藥物審評、包裝、運輸及貯存提供必要資料。本研究中，“莧山黃”復方制劑中藥部分按照市售包裝放置在加速試驗設定的環境下6個月，各項穩定性檢測檢測指標均符合規定，說明3批供試品滿足了該復方制劑的質量標準；其中有效成分甘草酸和多糖含量呈下降趨勢，說明加速試驗中設置的條件導致了供試品中有效成分含量的變化；中藥部分嚴格按市售包裝標準密封保存并且結合含水量情況，說明不存在因濕度條件引起的受潮問題。上述結果均表明，影響藥物有效成分降低的主要因素為溫度條件。

長期試驗是在接近藥品實際貯存條件下為探究藥品穩定性的試驗[15]。在溫度設置為（25±2）℃、相對濕度為（60±10）%的條件下，按市售包裝密封保存的“莧山黃”復方制劑中藥部分，12個月內的各項檢測指標均符合規定。在此期間，甘草酸和多糖含量雖呈下降趨勢，但仍在質量標準規定范圍內，具體原因需要進一步試驗考察。結果表明，該復方制劑中藥部分處于長期試驗設定條件下12個月內的穩定性保持良好，并且能夠滿足質量標準的基本要求。

4 結論

“莧山黃”復方制劑的中藥部分穩定性的影響因素主要為光照強度、溫度和濕度條件。因此，“莧山黃”復方制劑應密封、置陰涼處保存。