三種不同免疫檢驗方式在HIV 檢測中的可靠性觀察

羅純生，劉 靜

（佳木斯市中心血站檢驗科，黑龍江 佳木斯 154002）

艾滋病（AIDS）是一種臨床常見的傳染性疾病，是由人類免疫缺陷病毒（HIV）引起的慢性疾病，其主要傳染途徑為血液傳播、性傳播以及母嬰傳播[1，2]。該病患者機體免疫功能會遭到破壞，且機體感染疾病或出現其他并發癥的發生率較高，同時具有較高的致死率[3]。目前尚無治療艾滋病的特效藥物和手段，臨床治療難度較大[4]。據相關數據統計[5]，近年來艾滋病發生率不斷上升，嚴重危害人類健康安全。因此，早診斷、早治療是降低該病病死率，改善預后的關鍵。艾滋病具有較長的潛伏期，早期癥狀容易被忽視，早期篩查和診斷至關重要[6]。隨著對艾滋病發病機制的不斷深入研究，臨床可通過多種檢測方法對HIV 進行檢測，但是不同檢測方法的結果存在差異[7]。本研究結合2016 年1 月-2021 年4 月我站HIV陽性血清資料，比較ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢驗方式在HIV 檢測中的可靠性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016 年1 月-2021 年4 月佳木斯市中心血站采集血液中篩查出的50 份血清為觀察組，并選取同期未感染HIV 無償獻血者血清30份為對照組。觀察組男30 例，女20 例；年齡21～55歲，平均年齡（36.58±1.20）歲；對照組男18 例，女12例；年齡22～56 歲，平均年齡（36.80±1.33）歲，兩組性別、年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），研究可行，研究對象知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標準 納入標準：①觀察組所有患者均符合臨床艾滋病毒攜帶診斷標準[8]；②患者均經疾病預防控制中心使用免疫印跡法（WB）檢測確診[9]。排除標準：①合并結核等其他傳染性疾病者；②合并惡性器質性病變者；③隨訪資料不完善者。

1.3 方法 分別采用雙抗原夾心酶聯免疫吸附實驗（ELISA）法、乳膠顆粒標記免疫層析試驗、雙抗原夾心和雙抗體夾心酶聯免疫吸附實驗（ELISA）法對兩組血清樣本進行抗HIV 檢測。觀察組50 份血樣標準，將其中10 份血清設為參照組，其余40 份血清分別予以ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法進行檢測，且所有的檢測均由同一檢測小組人員完成。同時所有檢測人員嚴格做好相關防護，整個檢測過程必須嚴格執行艾滋病操作規范[10]。

1.3.1 ELISA 雙抗原夾心法 采用澳斯邦哈米爾頓費米自動化酶免分析儀檢測系統，應用HIV 抗體診斷試劑盒（英科新創＜廈門＞科技股份有限公司），所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.2 乳膠顆粒標記免疫層析試驗 試紙由艾博生物醫藥（杭州）有限公司提供，將25 μl 血清加入試紙，隨后加入1 滴緩沖液（約40 μl），結果在15～20 min內判讀，肉眼觀察變化情況，如果試紙出現兩條紅線則判定為陽性，若試紙為一條紅線判定為陰性。

1.3.3 ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法 采用澳斯邦哈米爾頓費米自動化酶免分析儀檢測系統，應用HIV 抗體診斷試劑盒（北京萬泰生物藥業股份有限公司），所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4 實驗樣本 室間質量評價血清為國家臨床檢驗中心2021 年第一批次下發免疫項目樣本，2 NCU/ml、4 NCU/ml 質控品為北京康徹斯坦生物技術有限公司生產。

1.5 觀察指標 觀察各種檢測方法血清陽性檢測率、HIV 檢測的靈敏度、特異度及準確率。靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數＋假陰性例數）×100%；特異性=真陰性例數/（真陰性例數＋假陽性例數）×100%[11]。

1.6 統計學方法 采用統計軟件包SPSS 21.0 對本研究的數據進行統計學處理，計量資料采用（）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；P＜0.05 說明差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組不同檢測方法陽性檢出率比較 ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測2 NCU/ml、室間質量血清、4 NCU/ml 的陽性檢出率均高于對照組，且ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法陽性檢出率高于乳膠顆粒標記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心法（P＜0.05），見表1。

表1 各組不同檢測方法陽性檢出率比較[n（%）]

2.2 不同檢測方法檢測HIV 的靈敏度、特異度、準確率比較 ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測HIV 靈敏度、準確率均高于乳膠顆粒標記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心法（P＜0.05），見表2。

表2 不同檢測方法檢測HIV 的靈敏度、特異度、準確率比較（%）

3 討論

艾滋病目前已經發展成為社會公共衛生問題，由于尚無有效治療方法，病死率較高[12]。艾滋病患者病理性改變較為復雜，且機體的所有系統、器官均會遭受病毒的侵害[13]。人體一但感染HIV，病毒會破壞體內T 淋巴細胞，溶解CD-T 淋巴細胞。隨著病情的不斷發展，機體內正常細胞不斷死亡，嚴重影響機體的正常功能和健康[14，15]。同時隨著淋巴細胞的損傷、溶解，人體免疫系統嚴重受損，感染風險升高。研究顯示[16]，導致艾滋病發生率持續增加的 主要影響因素是不安全輸血行為、不安全性行為等。為了預防艾滋病的發生，降低其對人類健康安全的威脅，應重視艾滋病的篩查、診斷。因此，提高艾滋病診斷準確性是重要條件。目前，臨床通過HIV 抗原抗體檢測，可對人體是否攜帶HIV 病毒進行判斷[17]。但是臨床檢測方法較多，不同檢測手段具有各自的優缺點，且不同檢測方法會受到檢測環境、操作技術等因素的影響，導致不同檢測方法的可靠性存在差異，且目前對已有檢測方法的優略勢更是無統一標準[18，19]。

本研究結果顯示，ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法2 NCU/ml、室間質評血清、4 NCU/ml 的陽性檢出率（100.00%、100.00%、100.00%）、乳膠顆粒標記免疫層析試驗（92.50%、90.00%、90.00%）、ELISA雙抗原夾心法（85.00%、80.00%、80.00%）均高于對照組（0、3.33%、6.67%），且ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法陽性檢出率高于乳膠顆粒標記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心法（P＜0.05），提示ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測HIV 均具有較高的陽性檢出率，但是相對而言ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢出陽性率最高。自愿無償獻血者采用ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測可實現HIV血清陽性率為0，而其他兩種檢測方式不能達到這樣的效果，該結論與梁少聰[20]的研究結果一致。因此，ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法可作為檢測HIV 的有效方法，具有相對更優的檢測價值。分析認為可能是由于ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法操作簡單，試劑相對穩定，檢測限制少，從而一定程度提高了檢測準確性[21]。同時本研究顯示，ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測HIV 靈敏度為100.00%、特異度為95.00%、準確率為92.50%，高于乳膠顆粒標記免疫層析試驗的90.00%、87.50%、85.00%、ELISA 雙抗原夾心法的88.10%、76.85%、85.70%（P＜0.05），表明ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測HIV 診斷準率最高，具有較高的診斷敏感度和特異度，可為HIV 診斷提供可靠的參考依據。分析原因認為ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測時間較短，在抗體與酶發生結合時，不會造成抗體免疫性反應的特異性變化，也不會影響酶的活性，從而會發生相應的水解呈色反應，可有效避免正常受檢者陽性檢出，具有相對更優的整體效果。

綜上所述，在HIV 的檢測中，ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標記免疫層析試驗與ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法這3 種檢測方法均具有一定的價值，但從HIV 陽性檢出率、準確率、靈敏度以及特異度方面比較，ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法具有更好的準確度，值得臨床加以重視。