血清特異性IgG 和IgE 聯(lián)合檢測(cè)在小兒過敏性疾病診斷中的應(yīng)用

王美茹

小兒濕疹、食物過敏、過敏性鼻炎、哮喘等均是常見的小兒過敏性疾病。臨床資料顯示,濕疹及食物過敏易發(fā)于低齡兒童,呼吸系統(tǒng)過敏疾病易發(fā)于年齡相對(duì)偏高的兒童［1］。一般而言,導(dǎo)致兒童過敏的主要因素包含免疫功能低下、遺傳因素、與食入性或吸入性過敏原接觸等。在臨床中,常見的診斷小兒過敏性疾病的方式為皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)及激發(fā)試驗(yàn)［2］。相對(duì)來說,上述診斷方式的準(zhǔn)確性稍顯不足,有可能出現(xiàn)誤診或漏診,致使患兒無法及時(shí)接受治療［3］。近年來,有文獻(xiàn)對(duì)特異性免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)和特異性免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)用于診斷過敏性疾病的臨床應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行了總結(jié),但有關(guān)結(jié)論存在一定差異。本研究旨在分析血清特異性IgG 和IgE聯(lián)合檢測(cè)應(yīng)用于小兒過敏性疾病診斷中的價(jià)值,現(xiàn)梳理研究過程,作如下報(bào)告。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年6月～2020年6月本院兒科門診、兒保科收治的40 例食物過敏患兒作為第一觀察組,40 例吸入性過敏患兒作為第二觀察組,40 例健康體檢兒童作為對(duì)照組。第一觀察組中,男21 例、女19 例,年齡4 個(gè)月～7 歲,平均年齡(3.13±1.79)歲；第二觀察組中,男22 例、女18 例,年齡5 個(gè)月～7 歲,平均年齡(3.25±1.83)歲；對(duì)照組中,男21 例、女19 例,年齡3 個(gè)月～8 歲,平均年齡(3.29±1.85)歲。三組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡未滿14 周歲的患兒；②已經(jīng)出現(xiàn)發(fā)作性皮膚瘙癢、紅腫等癥狀,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查確診為過敏性疾病的患兒；③患兒家長(zhǎng)知悉本研究并自愿參與,簽署知情同意書；④患兒及家長(zhǎng)依從性良好,全程有效控制自身情緒,聽從醫(yī)護(hù)人員指引。排除標(biāo)準(zhǔn)：①因其他原因?qū)е赂文I功能嚴(yán)重受損的患兒；②合并白血病等血液腫瘤疾病、嚴(yán)重心血管疾病的患兒；③人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者或因其他原因?qū)е聶C(jī)體免疫功能嚴(yán)重缺失的患兒；④前來本院就診前7 d 內(nèi)服用過馬來酸氯苯那敏、左西替利嗪、氯雷他定、爾可安等抗過敏藥物的患兒；⑤依從性較差,頻繁出現(xiàn)大喊大叫、哭鬧等現(xiàn)象,擾亂醫(yī)院正常秩序,干擾研究正常進(jìn)行的患兒；⑥本人及家長(zhǎng)對(duì)本研究持有抵觸情緒,不愿參與的患兒。

1.2 方法 血液標(biāo)本采集過程：①叮囑受檢兒童家長(zhǎng),檢測(cè)前一日晚10:00 之后禁食,可適量飲水(盡量控制在200～300 ml)；次日清晨7:30～8:30 空腹采集靜脈血；還未斷奶的患兒應(yīng)在空腹2～3 h 后立刻采集靜脈血(3～5 ml)。②靜置后以3000 r/min分離血清,離心10 min。完成離心處理后,進(jìn)行IgG 和IgE 的檢測(cè)過程。

1.2.1 IgE 檢測(cè) 采用半定量免疫印跡法,過程如下：①特異性過敏原被吸附于硝酸纖維素膜表面,置于反應(yīng)槽中。②用移液器加入患兒血清,室溫下孵育。③標(biāo)本中過敏原特異性IgE(sIgE)抗體與過敏原發(fā)生反應(yīng),并連接在硝酸纖維素膜之上。將多余的抗體沖洗除去。④再加入標(biāo)記了生物素的抗人IgE 抗體,室溫下孵育,沖洗除去未結(jié)合上的抗體。然后加入結(jié)合有堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉親和素,室溫下孵育,鏈霉親和素和生物素結(jié)合。將未結(jié)合上的酶標(biāo)鏈霉親和素沖洗干凈。⑤再次添加BCIP/NBT 酶作用底物并孵育后,堿性磷酸酶發(fā)生特定的酶顯色反應(yīng),試劑條上出現(xiàn)沉淀,顏色深淺與血清中sIgE 含量呈正比［4,5］。

1.2.2 IgG 檢測(cè) 使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) IgG 和IgE 兩項(xiàng)指標(biāo)中,有任何一項(xiàng)提示陽(yáng)性即可確診為患有過敏性疾病。①對(duì)比三組受檢兒童的血清IgG 和IgE 水平；②基于約登指數(shù)最大點(diǎn)篩選血清IgG 和IgE 的臨界值；③對(duì)比血清IgG 和IgE 單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)下,對(duì)小兒過敏性疾病(包含第一觀察組、第二觀察組所有患兒以及對(duì)照組所有健康兒童)診斷的特異度和靈敏度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗(yàn),正態(tài)計(jì)量資料采用t檢驗(yàn),非正態(tài)計(jì)量資料采用F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。篩選各指標(biāo)臨界值并計(jì)算特異度和靈敏度,最后基于Kappa 對(duì)診斷結(jié)果的一致性進(jìn)行分析。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組IgG、IgE 水平對(duì)比 三組IgG、IgE 水平對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。第一觀察組、第二觀察組IgG、IgE 均高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；第一觀察組IgG、IgE 低于第二觀察組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 三組IgG、IgE 水平對(duì)比(,U/ml)

表1 三組IgG、IgE 水平對(duì)比(,U/ml)

注：與對(duì)照組對(duì)比,aP＜0.05；與第一觀察組對(duì)比,bP＜0.05

2.2 基于約登指數(shù)最大點(diǎn)的IgG、IgE 臨界值對(duì)比 血清IgG 的最佳截?cái)嘀禐?8.341 U/ml,IgE 的最佳截?cái)嘀禐?.324 U/ml；且IgG、IgE、聯(lián)合檢測(cè)的AUC 兩兩對(duì)比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 基于約登指數(shù)最大點(diǎn)計(jì)算出的IgG、IgE 臨界值對(duì)比

2.3 IgG、IgE 單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)的特異度和靈敏度對(duì)比 IgG 單獨(dú)檢測(cè)的靈敏度和特異度分別為86.25%和80.00%；IgE 單獨(dú)檢測(cè)的靈敏度和特異度分別為88.75%和82.50%；聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度和特異度分別為97.50%和97.50%。聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度和特異度高于IgG 單獨(dú)檢測(cè)、IgE 單獨(dú)檢測(cè),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。聯(lián)合檢測(cè)的Kappa 為0.869,一致性好。見表3。

表3 IgG、IgE 單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)的特異度和靈敏度對(duì)比

3 討論

臨床資料顯示,過敏一般被分為兩種形式：①速發(fā)型過敏,主要經(jīng)過IgE 介導(dǎo)；②遲發(fā)型過敏,主要經(jīng)過IgG 介導(dǎo)［6］。IgG 是血清免疫球蛋白中的主要成分,約占血清中免疫球蛋白總量的3/4 以上［7］。作為人類機(jī)體中抗感染免疫最重要的抗體之一,當(dāng)人體受到過敏原、感染原等抗原的刺激時(shí),會(huì)產(chǎn)生抗菌、抗病毒抗體,其中的絕大多數(shù)都屬于IgG［8］。基于此,在臨床檢測(cè)中,根據(jù)IgG 的含量,可評(píng)估患兒感染程度,常用于免疫功能缺損及傳染類疾病的防治。IgE介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)［9］,通常而言,過敏患兒的血清中存在一定數(shù)量的、具有變應(yīng)原特異性的IgE——特異性IgE［10］。比如對(duì)花粉過敏的患兒,其血清中必定存在與該花粉相關(guān)的IgE,對(duì)棉絮過敏的患兒,其血清中存在與該棉絮相關(guān)的IgE。當(dāng)患兒與可導(dǎo)致自身出現(xiàn)過敏反應(yīng)的過敏原接觸后,過敏原一旦通過吸入、食入的方式進(jìn)入患兒機(jī)體,便會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的特異性IgE,進(jìn)而結(jié)合肥大細(xì)胞的嗜堿性粒細(xì)胞,導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)對(duì)該過敏原的特異性致敏狀態(tài),即發(fā)生過敏反應(yīng)［11,12］。本研究結(jié)果顯示,無論是食物過敏還是吸入性過敏的患兒,其血清特異性IgE 和IgG 含量均超過健康患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。IgE 和IgG 單一檢測(cè)的靈敏度和特異度均低于聯(lián)合檢測(cè),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

綜上所述,血清特異性IgE 和IgG 聯(lián)合檢測(cè)應(yīng)用于小兒過敏性疾病診斷時(shí),檢測(cè)準(zhǔn)確性較高。