急性髓系白血病患者血漿IL-10水平的變化與意義研究＊

文/王玉芳，齊福，王朝喆，孫瑞婧, 王靜，王希娣

白細胞介素 10 (IL-10) 是一種多效性細胞因子，主要由2型輔助細胞 (Th2)，單核細胞和巨噬細胞，以及正常和惡性B淋巴細胞產生。 IL-10可以通過抑制 Th1型細胞因子而發揮免疫抑制作用，包括干擾素-γ和白細胞介素-2。因此，作為免疫紊亂的急性髓系白血病，與免疫功能密切相關的IL-10表達水平可能發生病理性改變。我們針對文獻關于白血病與IL-10水平關系報道的異質性，選擇了部分急性髓系白血病患者進行了治療前后的血漿水平檢測，以便進一步明確IL-10的變化特點。

1 材料方法

1.1 研究對象

按照國際上統一的FAB診斷標準，選擇門診或住院急性髓系白血病患者35例，并作為檢測和研究的對象。35例類AML患者，男18例，女17例，年齡21-61歲。25例健康查體者為正常對照組，男14例，女11例，年齡27-58歲。根據臨床診斷和療效標準，判斷治療效果。標本收集均按照兩個醫院的醫學倫理規定進行。

1.2 樣本處理

抽取患者或正常健康查體人群的外周血5-6ml，室溫放置15分鐘，自凝后，2000rp離心20分鐘，分離血清后，-20℃冰箱保存。標準曲線：IL-10的標準曲線濃度分別為320 pg/ml, 160 pg/ml, 80 pg/ml，40 pg/ml，20 pg/ml，10 pg/ml，0 pg/ml。

1.3 ELISA檢測

按照試劑盒說明書，在96孔酶標板上加入樣品稀釋液稀釋5倍的樣品50 μl。輕輕搖動，充分混勻。同時設置空白對照孔。待用封板膜封板后，放在保濕盒中，放置37℃恒溫箱中，進行30分鐘的溫育。依次經過洗滌3次后，拍手。每個實驗孔中加入酶標試劑50 μl。按照上述溫育方法進行30分鐘溫育。溫育后，同法進行3次洗滌。結果顯色：每孔依次加入入顯色劑A 50 μl，再加入顯色劑B 50 μl，在 37℃條件下，避光顯色，定時右眼觀察，約15分鐘時，加入終止液50 μl。最后用空白空調零，450 nm波長下測量各孔吸光度。其中，濃度檢測高于標準上限時，繼續稀釋后再做檢測。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 白血病患者血漿IL-10水平的變化

檢測結果表明，正常對照組的血清 IL-10水平為(26.99±17.17) pg/ml, 初發急性髓系白血病的血清 IL-10水平為(77.20±63.27) pg/ml，經過統計學差異分析，初發白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于正常健康人對照組的血清 IL-10水平，t=2.996,P=0.0096, 差異具有統計學意義（圖1）。

圖1 正常對照組和初發急性髓系白血病的血清 lL-10水

2.2 白血病患者治療前后血漿IL-10水平的變化

選擇一組化療后完全緩解組的白血病患者，對緩解前后的血清 IL-10水平進行了對比性檢測，結果表明治療前白血病患者的血清IL-10水平為(73.73±29.67) pg/ml, 完全緩解時病的血清 IL-10水平為(50.76±11.38) pg/ml，經過統計學差異分析，治療前白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于完全緩解組的血清 IL-10水平，t=2.489,P=0.0271, 差異具有統計學意義（圖2）。骨髓移植治療前和取得完全緩解后的白血病患者血清IL-10水平分別為(88.45±76.06) pg/ml和(60.92±23.73) pg/ml，經過統計學差異分析，移植前白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于移植后完全緩解組的血清 IL-10水平，t=2.099,P=0.0438, 差異具有統計學意義（圖3）。

圖2 治療前與完全緩解組急性髓系白血病的血清 lL-10水平變化（pg/ml）（*，P＜0.05）

圖3 骨髓移植前后急性髓系白血病的血清 lL-10水平變化（pg/ml）（*，P＜0.05）

3 討論

白細胞介素 10 (IL-10) 是一種多效性細胞因子，主要由2型輔助細胞 (Th2)，單核細胞和巨噬細胞，以及正常和惡性B淋巴細胞產生。IL-10是細胞因子家族的創始成員，還包括 IL-19、IL-20、IL-22、IL-24、IL-26、IL-28A、IL-28B 和 IL-29。無論是在動物模型和人體研究，發現IL-10參與許多疾病的發生與發展過程。然而，盡管 IL-10 生物學取得了相當大的進展，許多懸而未決的問題仍然存在。主要的原因之一是IL-10 產生的細胞比較廣泛，對IL-10 反應的細胞種類較多，其介導的免疫反應往往取決于不同疾病、不同組織環境。在該領域的研究方面，需要更深入的了解IL-10 生物學的地位，特別是控制 IL-10 產生和作用的分子機制，以及這種細胞因子在不同情況下可能發揮的具體作用。

IL-10可以通過抑制 Th1型細胞因子而發揮免疫抑制作用，包括干擾素-γ和白細胞介素-2。IL-10對細胞具有比較廣泛的活性。IL-10 可顯著抑制人單核細胞誘導產生的 IL-1α等細胞因子，由于其對上述細胞因子合成的抑制作用，IL-10 可能是一種具有免疫功能的負調控因子。但是，其在血液系統惡性腫瘤中的變化和意義仍然在不斷地明確過程中。因此，作為免疫紊亂的急性髓系白血病患者，與免疫功能密切相關的IL-10表達水平變化值得進一步研究。我們針對文獻關于白血病與IL-10水平關系報道的異質性，選擇了部分急性髓系白血病患者進行了治療前后的血漿水平檢測，以便進一步明確IL-10的變化特點。結果表明，初發白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于正常健康人對照組的血清 IL-10水平, 差異具有統計學意義。同時發現治療前白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于完全緩解組的血清 IL-10水平。移植前白血病患者組的血清 IL-10水平明顯高于移植后完全緩解組的血清 IL-10水平。結果表明白血病患者血清IL-10水平降低與白血病的發生和病期有關，其血清水平的恢復可以作為病情檢測的生物學指標。