柴胡疏肝散對乙酰氨基酚（APAP）致小鼠急性肝損傷的治療研究

劉詩語 李振坤 張慧敏 李朝一 李麗娟

摘要：為探究柴胡疏肝散對APAP引起的急性肝損傷是否有治疔作用，試驗將36只ICR小鼠隨機分為6組，每組6只。分別為空白組、APAP（300 mg/kg）模型組、柴胡疏肝散（40 mg/kg）對照組、APAP+柴胡疏肝散10 mg/kg組、APAP+柴胡疏肝散20 mg/kg組、APAP+柴胡疏肝散40 mg/kg組。試驗結束后采血檢查指標。結果：40 mg/kg柴胡疏肝散對于治疔APAP引起的急性肝損傷有明顯效果，使得升高的ALT、AST活性明顯降低。結論：40 mg/kg柴胡疏肝散對APAP引起的小鼠急性肝損傷有良好的抗炎、抗氧化作用。

關鍵詞：柴胡疏肝散;APAP急性肝損傷;小鼠;抗炎作用

中圖分類號：R285文獻標識碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2022.02.009

Study on the Treatment of Acute Liver Injury Induced by APAP in Mice by ChaihuShugan Powder

LIU Shiyu，LI Zhenkun，ZHANG Huimin，LI Zhaoyi，LI Lijuan

（Jinzhong College of Information，Taigu Shanxi，030800）

Abstract：To investigate whether chaihu hepatic dispersion has a therapeutic effect on acute liver injury caused by APAP. Methods：36 ICR mice were randomly divided into 6 groups of 6 mice in each group. They were the blank group，apap（300 mg/kg）model group，the control group of saihuhu hepatic dispersion （40 mg/kg），the APAP + chaihu hepatic dispersion 10mg/kg group，the APAP + chaihuhu liver dispersion 20mg/kg group，and the APAP + chaihuhu liver dispersion 40mg/kg group. Blood collection after the test is completed to check the indicators. Results：40mg/kg of chaihu hepatic dispersion had obvious effects in the treatment of acute liver injury caused by APAP，resulting in a significant decrease in the activity of elevated ALT and AST. Conclusion：40mg/kg chaihu hepatic dispersion has good anti-inflammatory and antioxidant effects on acute liver injury caused by

APAP.

Keywords：ChaihuShugan SAN，APAP acute liver injury，Mice，anti-inflammatory effects

0引言

藥物性肝損害（DILI）是一種較為常見的肝病，近年來發病率呈逐年遞增趨勢，僅次于病毒性肝炎和脂肪性肝病。藥物性肝損傷是由藥物本身或其代謝物在一定劑量后引起的不同程度的肝臟損傷。其中最常見的是急性肝損傷，也可導致慢性肝損傷，嚴重時可導致肝衰竭甚至死亡。

1文獻綜述

1.1柴胡疏肝散概述

柴胡疏肝散由陳皮、柴胡、川芎、香附、枳殼、芍藥、甘草7味藥組成。柴胡疏肝散疏能夠疏肝理氣，行氣止痛，是一種很好的治療方法。

柴胡疏肝散的主要有效成分有皂甘類、黃酮類、酚酸類及萜類成分，而皂甘類、黃酮類、酚酸類成分具有明顯的抗氧化活性。柴胡疏肝散已被證明有促進肝臟血液循環、增加肝動脈血流、保肝利膽、抗肝纖維化的藥理作用[1-2]。

1.2急性肝損傷與獸醫臨床

RDJones的報告列出了240只貓和狗使用非甾體抗炎藥的中毒記錄，以及嘔吐、腹瀉，中樞神經系統和循環系統疾病的常見臨床表現，當寵物過量服用對乙酰氨基酚（APAP）會引起急性中毒，主要損傷的是肝臟和紅細胞。貓對APAP的毒性似乎更敏感，10mg的APAP會對貓紅細胞造成損傷，但是高劑量時就會出現肝損傷，對犬來說，APAP的毒性一般大于100 mg/kg時才會中毒。

1.3研究目的及意義

初步探討了柴胡疏肝散在解熱、消炎、增強免疫力、抗肝損害等方面的作用，旨在通過建立APAP所致的小鼠急性肝損傷動物模型，探討其在動物實驗中的保護和治療效果。

2材料與方法

2.1材料與設備

對乙酰氨基酚，純度≥99.0%;二甲苯;10%福爾馬林;70%～90%乙醇;生理鹽水;石蠟等。電子分析天平;全自動生化分析儀;臺式離心機;電子顯微鏡等。

2.2試驗方法

將36只體重為20±2gICR小鼠，隨機分為6組，每組6只。分別為空白組、APAP（300 mg/kg）模型組、柴胡疏肝散（40 mg/kg）對照組、APAP+柴胡疏肝散10 mg/kg組、APAP+柴胡疏肝散20 mg/kg組、APAP+柴胡疏肝散40 mg/kg組。模型組于染毒4 h后迅速眼球取血用于測定血清生化指標。空白組給予與模型組等量的生理鹽水。造模成功后，各組每天灌胃1次，觀察并記錄小鼠的毛發、精神狀態及體重、體溫的變化。連續治療7 d后，脫頸處死全部小鼠。

2.3柴胡疏肝散對急性肝損傷影響的指標檢測

2.3.1血清ALT、AST檢測

將從采集的血液在4 ℃下靜置4 h，放在臺式離心機中以3 000 r/min的速度離心10 min，分離的血清用生化分析儀來測定ALT和AST的水平。

2.3.2小鼠肝臟病理切片制作及HE染色

小鼠處死后取出肝臟，用生理鹽水漂洗，修剪肝組織。將處理過的肝臟組織放在固定液中。固定后放入由低到高濃度酒精中梯度脫水。脫水后在二甲苯中浸泡透明。用石蠟包埋透明組織塊，凝固后固定在切片機上切片。將切片放入二甲苯中脫去石蠟。將切片HE染色后，用低到高的酒精脫水，干燥、密封并觀察。

2.3.3小鼠肝組織織中GSH水平的測定

將用于組織勻漿的小鼠肝臟樣品從--80 ℃冰箱中取出，實驗步驟完全按照GSH試劑盒說明書進行操作。

3結果

3.1柴胡疏肝散對小鼠血清中ALT、AST水平的影響

與空白組相比，模型組APAP小鼠的血清ALT和AST水平明顯升高（P<0.05），表明小鼠接觸APAP后可能會引起肝臟損傷;與模型組相比，柴胡疏肝散各劑量組均能降低小鼠血清中ALT和AST的表達水平（P<0.05），3個劑量組中柴胡疏肝散40 mg/kg劑量組的降幅最為明顯，見表1。

3.2柴胡疏肝散對小鼠肝組織中GSH水平的影響

APAP模型組的GSH水平顯著低于空白組（P<0.05）;與APAP模型組比較，10 mg/kg柴胡疏肝散組GSH含量差異無統計學意義（P>0.05），而20 mg/kg和40 mg/kg柴胡疏肝散組GSH含量有明顯差異則有統計學意義（P<0.05）。該結果表明柴胡疏肝散在20 mg/kg或40 mg/kg的劑量下，可對APAP引起的肝損傷造成的GSH 消耗產生抑制作用，見表2。

3.3柴胡疏肝散對小鼠肝臟病理切片的影響

不同劑量組對小鼠肝臟病理變化的影響見圖1。空白組的肝臟組織結構良好，肝小葉結構完整，肝臟細胞呈放射狀排列，核形清晰。模型組肝臟出現了較多的炎癥細胞浸潤，肝細胞索結構紊亂，肝細胞出現大量壞死。在柴胡疏肝散20 mg/kg和40 mg/kg的劑量作用下，小鼠肝臟的組織結構變得更加清楚，排列變整齊，炎癥細胞浸潤和壞死的數目也顯著降低。

4結論

40 mg/kg的柴胡疏肝散能顯著降低肝功能損傷小鼠血清ALT和AST水平，并能增強肝損傷小鼠肝組織中抗氧化劑GSH活力。表明柴胡疏肝散在APAP所致小鼠急性肝損傷中發揮了良好的抗氧化作用，并能明顯改善肝臟損傷。

參考文獻

[1]匡子禹.中醫藥治療藥物性肝損傷的系統評價及用藥規律分析[D].北京：北京中醫藥大學，2021.

[2]任鵬，王林林，許飛虹，等.柴胡疏肝散醇提物的抗氧化活性[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20（10）：161-164.

[3]鄭惠星.對乙酰氨基酚誘導小鼠急性肝損傷模型機理研究[D]. 延邊：延邊大學，2020.