氣相色譜-質譜聯用測定蘋果中五氯硝基苯殘留量

史真真 郭凱銳 汪小芳

摘 要：目的：本研究旨在建立氣相色譜-質譜聯用法（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GC-MS）測定蘋果中五氯硝基苯的檢測方法。方法：樣品經乙腈提取，固相萃取儀凈化，濃縮定容后用GC-MS在SCAN和SIM模式下進行測定，通過保留時間、特征離子及其相對豐度定性，內標法定量。結果：在0.125～4.000 μg/mL，五氯硝基苯的峰面積與線性關系良好，相關系數R2為0.999 9，方法的檢出限（LOD）為0.007 8 mg/kg，定量限（LOQ）為0.025 0 mg/kg。在LOQ～10 LOQ添加水平，五氯硝基苯的平均回收率在83.5%～94.9%，相對標準偏差為0.71%～2.34%（n=6）。結論：該方法具有準確、高效、靈敏度高、重現性好等優勢，可以滿足蘋果中五氯硝基苯的分析要求。

關鍵詞：蘋果;五氯硝基苯;氣相色譜-質譜聯用;內標法定量

Determination of Quintozene Residue in Apple by Gas Chromatography-Mass Spectrometry

SHI Zhenzhen1， GUO Kairui2， WANG Xiaofang2

（1.Zhongping Testing Co.， Ltd.， Xuchang 461100， China; 2.Henan Senbang Environmental Testing Technology Co.， Ltd.， Xuchang 461100， China）

Abstract： Objective：In this paper， a analytical method was developed for determination of quintozene in apple by Gas Chromatography-mass Spectrometry. Method： Samples were extracted by acetonitrile and purified by solid phase extraction， after concentration and constant volume， it was determined by GC-MS in SCAN and SIM modes， Qualitative analysis by retention time， characteristic ions and their relative abundance， Internal standard method. Result： The mass concentration of quintozene ranges from 0.125～4.000 μg/mL， The linear relationship is good， The correlation coefficients R2 were 0.999 9， the LOD of quintozene was 0.007 8 mg/kg，the LOQ of quintozene was

0.025 0 mg/kg. The recovery of quintozene ranged from 83.5% to 94.9% at spiked level of LOQ～10 LOQ，the relative standard deviation was varied from 0.71% to 2.34% （n=6）. Conclusion： The method has the advantages of accuracy， high efficiency， high sensitivity and good reproducibility. It is effective to determinate quintozene residue in apple.

Keywords： apple; quintozene; Gas Chromatography-Mass Spectrometer; internal standard quantitative method

五氯硝基苯是一種典型的有機氯類殺菌劑，至今在農業生產中仍起著重要作用。但隨著科學技術的發展，以及人們對五氯硝基苯弊端認識的加深與替代產品的出現，其使用安全性問題已經在世界各國引起了廣泛關注。歐盟和美國均已出臺了禁用或限制使用范圍的措施，我國則主要針對五氯硝基苯在不同樣品中檢出的分析方法進行研究[1]。我國是蘋果種植和消費大國，蘋果產業是農村經濟的支柱產業，然而，隨著蘋果種植面積的增加和種植方式的改變，為應對逐漸加重的病蟲害，超劑量施用高毒、高殘留農藥屢見報道，過度施用農藥會導致藥害的發生，造成蘋果葉片、果實的藥斑病害，嚴重影響蘋果品質，果皮表面農藥殘留過高，食用后對人們的健康產生較大的危害[2-4]。因此，為保障農產品質量安全，加強對五氯硝基苯及其代謝產物的檢測，建立準確、高效、低成本的檢測方法十分必要。

常見的五氯硝基苯農藥殘留的分析方法有液相色譜（Liquid Chromatograph，LC）[5]、氣相色譜（Gas Chromatography，GC）[6]、氣相色譜-質譜聯用（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）[7-9]、液相色譜-質譜聯用（Liquid Chromatograph-Mass Spectrometer，LC-MS）等[10]，一般情況下，單一色譜類雖然定量準確，但是易出現假陽性，在定性方面難以實現準確篩查，而儀器聯用技術則應運而生，即將具有高分離性能的色譜技術和高靈敏度的質譜的聯用技術相結合起來，建立氣相色譜-質譜聯用法測定蘋果中五氯硝基苯的方法，并進行評定分析，得到了滿意的結果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

GCMS-QP2020氣相色譜質譜聯用儀，日本島津;固相萃取儀、水浴氮吹儀、旋轉蒸發儀，上海力辰;渦旋混勻器，其林貝爾;AUW220D十萬分之一電子天平，日本島津;可調高速勻漿機，常州國華;高速冷凍離心機，上海力申。

乙腈：色譜純;氯化鈉：優級純;無水硫酸鈉：分析純，用前在650 ℃下灼燒4 h，貯于干燥器中，冷卻后備用;甲苯：優級純;正己烷：色譜純;丙酮：色譜純;ProElut C18 SPE柱（12 mL，2.0 g）、ProElut CARB/NH2 雙層柱（6 mL，0.5 g/0.5 g），迪馬科技;100 μg/mL五氯硝基苯標準溶液（證書編號BW900748-100-A）;100 μg/mL環氧七氯標準溶液（證書編號BW900786-100-A），壇墨質檢標準物質中心。

1.2 實驗方法

1.2.1 氣相色譜-質譜條件

色譜柱：SH-Rxi-5Sli MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;色譜柱升溫程序：40 ℃（1 min）→130 ℃（30 ℃/min）→250 ℃（5 ℃/min）→300 ℃（10 ℃/min，保持5 min）;載氣：氦氣，純度≥99.999%;流速：1.00 mL/min;進樣口溫度：220 ℃;進樣量：1 μL;進樣方式：不分流進樣;電子轟擊源（EI）：70 eV;離子源溫度：230 ℃;GC-MS接口溫度：230 ℃;柱前壓：49.7 kPa;掃描模式：選擇離子檢測方式（SIM）;定量方法：峰面積內標法定量，質譜特征離子（m/z）：五氯硝基苯--定量295，定性237、249;環氧七氯--定量353，定性355、351。

1.2.2 標準溶液的配制

準確移取100 μg/mL環氧七氯標準溶液0.7 mL，用丙酮定容至2.0 mL，配制成環氧七氯內標溶液;準確移取100 μg/mL的五氯硝基苯標準溶液0.5 mL，用丙酮定容至5 mL，配制成10 μg/mL五氯硝基苯標準儲備液。用樣品空白基質提取液配制成濃度為0.125 μg/mL、0.250 μg/mL、0.500 μg/mL、1.000 μg/mL、2.000 μg/mL和4.000 μg/mL的標準工作系列溶液，分別加入40 μL環氧七氯內標溶液，混勻，現用現配。

1.2.3 樣品前處理

取蘋果全果（去柄）約1 kg，切碎、用勻漿機勻漿后分成兩份，一份檢測，另一份留樣備用。稱取20 g試樣（精確至0.01 g）于80 mL離心管中，加入40 mL乙腈，用均質器在15 000 r/min勻漿提取1 min，加入5 g氯化鈉，再勻漿提取1 min，將離心管放入離心機，在3 000 r/min離心5 min，取上清液20 mL，將ProElut C18 SPE小柱放入固定架上，加樣前先用10 mL乙腈預洗柱，下接雞心瓶;移入上述20 mL提取液，并用15 mL乙腈洗滌柱，將收集的提取液和洗滌液在40 ℃水浴中旋轉濃縮至約1 mL，備用，過ProElut CARB/NH2雙層柱。活化：加入2 g無水硫酸鈉，用4 mL乙腈-甲苯溶液（3+1）預洗小柱。上樣：迅速移入上述濃縮液，用雞心瓶收集;再用6 mL乙腈-甲苯（3+1）分3次洗滌樣液瓶，確保上樣完全。洗脫：安裝60 mL貯液器和適配器，加25 mL乙腈-甲苯（3+1），收集洗脫液。定容：40 ℃水浴中減壓蒸餾至近干，用正己烷定容至1 mL，加入40 μL環氧七氯內標，混勻后待上機進行定性測定和定量測定。對于試劑空白，除不加試樣外，按照上述步驟平行操作。

2 結果與分析

2.1 線性關系

本次試驗標準系列濃度為0.125 μg/mL、0.250 μg/mL、0.500 μg/mL、1.000 μg/mL、2.000 μg/mL及4.000 μg/mL，以濃度為橫坐標，以目標物與內標物響應值（峰面積）的比值為縱坐標繪制標準曲線，曲線方程為

Y=0.344 488 4X-0.006 877 486，相關系數為R2=0.999 9，

滿足線性要求，標準曲線見圖1。

2.2 檢出限和定量限

根據信噪比S/N=3和S/N=10確定目標物的檢出限和定量限，當取樣量為20.0 g時，五氯硝基苯的檢出限為0.007 8 mg/kg，定量限為0.025 0 mg/kg。

2.3 回收率與精密度試驗

以陰性蘋果樣品進行添加回收和精密度試驗，本次添加水平為LOQ、2LOQ、10LOQ，充分混勻處理后按此方法進行測定，每個水平測定10次，進行GC-MS測定，測得五氯硝基苯在添加水平0.025 0～0.250 0 mg/kg，其平均回收率在83.5%～94.9%，相對標準偏差在0.71%～2.34%。回收率與精密度試驗具體結果見表1。

3 結論

本實驗建立了氣相色譜-質譜聯用法測定蘋果中五氯硝基苯的檢測方法，標準曲線線性關系良好，方法的定量限、回收率、精密度符合相關標準的要求，該方法具有準確、高效、靈敏度高、重現性好等優勢，可以滿足蘋果中五氯硝基苯的分析要求。

參考文獻

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