β-地中海貧血不同基因分型紅細胞參數變化及其臨床意義

劉小琳，楊浩，任天鳳

信宜市婦幼保健院檢驗科，廣東 茂名 525300

β-地中海貧血是由于基因β-珠蛋白被抑制而引發的血紅蛋白疾病，它屬于小細胞低色素溶血性貧血，危害性較大，我國南方地區尤為常見，且有較高的遺傳性[1]。目前診斷地中海貧血的金標準是基因檢測，主要是依據聚合酶鏈反應(PCR)與分子生物學相結合的技術進行。然而這種方式操作步驟復雜、費用比較高且有較高的設備要求，廣泛于臨床上開展并不現實[2-3]。我國在篩查β-地中海貧血中，廣泛推薦紅細胞脆性試驗(RCOF)和平均紅細胞體積(MCV)兩種方式，然而多項文獻顯示，這兩種方式結合對β-地中海貧血檢測漏診率較高[4]。使用紅細胞參數診斷和篩查β-地中海貧血在國內外屬于比較簡便且常見的檢測方式，然而針對相關參數的使用價值缺少整體性評估。紅細胞參數篩查和診斷的臨界值實用性、臨床值范圍等都需更進一步研究分析，通過分析研究可以使各項參數于臨床中發揮它們的篩查價值[5]。本研究選擇本院近年來收治的β-地中海貧血患者為研究對象，探討不同基因型β-地中海貧血患者紅細胞參數的差別，希望發現一種方便快捷、簡單易行的篩查手段，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2020年6月至2021年1月信宜市婦幼保健院收治的100例β-地中海貧血患者納入研究。貧血診斷標準：MCV小于80 fl，紅細胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)小于320 g/L，MCH小于27 pg，6個月～5歲血紅蛋白濃度(Hb)小于110 g/L，5～12歲Hb＜115 g/L，12～14歲Hb＜120 g/L。β-地中海貧血診斷標準：①與貧血診斷標準相符，臨床特征有地中海貧血面容、肝脾腫大等；②通過實驗室檢查血紅蛋白A2正?；虼笥?.5%，增加HbF等；③診斷基因出現β基因缺陷。100例患者中男性54例，女性46例；年齡13～47歲，平均(32.64±2.74)歲。本研究經醫院醫學倫理委員會審核通過，所有患者及其家屬均對本研究知情并簽署同意書。

1.2 觀察指標與評價(檢測)方法(1)檢測所有患者β-地中海貧血不同基因型分布。地中海貧血基因檢測方法：選擇全血基因提取試劑盒對基因組DNA(外周血)進行提取，選擇中國珠海亞能公司基因診斷試劑盒，采用PCR-反向點雜交法對β-地中海貧血的點突變(17種)進行診斷，主要有檢測分析、PCR擴增、雜交。(2)比較β-地中海貧血βE/βN、β+/βN、β0/βN三種基因型紅細胞參數。紅細胞參數檢測方法：所有患者抽取2 mL肘靜脈血，抗凝使用乙二胺四乙酸二鉀，選擇全自動血細胞分析儀Sysmex XE-5000及其配套試劑(日本東亞公司)對血紅蛋白濃度(HGB)、紅細胞計數(RBC)、平均紅細胞血紅蛋白量(MCH)、平均紅細胞體積(MCV)、紅細胞分布寬度(RDW)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)進行檢測。所有樣本均于2 h之內完成檢測。

1.3 統計學方法應用SPSS19.0統計軟件分析數據。計量資料符合正態分布，以均數±標準差(±s)表示，多組比較采用F檢驗，兩兩比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 所有β-地中海貧血患者的不同基因型分布100例β-地中海貧血患者中，有2例βE/βN基因型，均為CD26/N，占2.00%；有40例β+/βN基因型，其中IVS-II-654/N最多，占30%；有58例β0/βN基因型，其中CD41-42/N、CD17/N較多，分別占34.00%、14.00%，見表1。

表1 所有β-地中海貧血患者的不同基因型分布

2.2 β-地中海貧血βE/βN、β+/βN、β0/βN三種基因型紅細胞參數比較β+/βN與β0/βN基因型的HGB、MCH、MCV、MCHC明顯低于βE/βN基因型，RBC、RDW明顯高于βE/βN基因型，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 β-地中海貧血βE/βN、β+/βN、β0/βN三種基因型紅細胞參數比較(±s)

表2 β-地中海貧血βE/βN、β+/βN、β0/βN三種基因型紅細胞參數比較(±s)

注：與βE/βN比較，a P＜0.05；與β+/βN比較，b P＜0.05。

組別βE/βN β+/βN β0/βN F值P值例數2 40 58 HGB(g/L)137.83±8.12 129.38±12.04a 128.36±15.42ab 1.042 0.327 RBC(×1012/L)5.42±0.44 6.43±0.66a 6.49±0.90a 3.428 0.040 MCH(pg)25.06±0.95 20.01±1.53a 19.21±1.27ab 25.053 0.001 MCV(fl)76.57±3.28 64.98±4.76a 63.86±4.32ab 14.837 0.001 RDW(%)13.44±0.51 15.48±1.18a 17.20±1.22ab 21.816 0.001 MCHC(g/L)327.92±9.11 310.05±8.73a 308.63±9.14ab 8.792 0.001

3 討論

β-地中海貧血是由基因β珠蛋白點突變引發，較少部分為缺乏β珠蛋白基因導致，鏈合成β珠蛋白降低就是β+地中海貧血，完全不能合成β珠蛋白就是β0地中海貧血，此病病情較輕時無臨床特征，較嚴重時會出現溶血性貧血，并為進行性，有較高的殘疾率與死亡率[6]。1995年，世界衛生組織公布的數據顯示世界上有1.6%的人口攜帶β-地中海基因，且每年約有3萬人患有β-地中海貧血，高發區之一就是中國，其中四川省患有此病的幾率為2.18%，廣東、廣西發生β-地中海貧血的幾率分別為2.54%與6.43%，發病率均較高[7]。

基因β-珠蛋白突變對基因β-珠蛋白作用的影響主要是經由顯性突變、RNA加工突變、RNA翻譯突變及轉錄突變等，雜合子β-地中海貧血，像β+/βN、β0/βN，這往往會引發輕型β-地中海貧血[8-9]。我國大部分相關學者認為通過檢測紅細胞參數能夠對β-地中海貧血進行篩查，然而都無對應參數篩查、診斷的臨界值，還需要對適用范圍進行更進一步的研究探討，因此應用各參數還比較困難，目前還不能充分發揮紅細胞參數的篩查作用[10-11]。

目前，MCH、MCV已經廣泛被用于篩查地中海貧血中，通過這兩種指標進行篩查有較高的特異性和靈敏度[12-14]。本文對100例β-地中海貧血病患的紅細胞參數進行檢測，MCH、MCV水平出現明顯降低，RDW表現出明顯的不正常，MCHC、RBC表現出輕微的不正常。100例病患中，基因β0/βN型占58.00%，基因β+/βN型占40.00%，基因βE/βN型占2.00%，以-28/N(8.00%)、CD17/N(14.00%)、IVS-II-654/N(30.00%)、CD41-42/N(34.00%)為主，同深圳地區[15]較為多見的突變類型基本相符。對比β+/βN同β0/βN基因型的紅細胞參數發現，HGB、MCH、MCV、MCHC、RDW差異均有統計學意義。同β+/βN病患比較，β0/βN病患MCH、MCV水平降低，MCH在20 pg徘徊，MCV在64 fl徘徊。這表明在實際操作過程中能通過對紅細胞參數進行綜合分析，特別是MCH、MCV水平降低的幅度，來對β0/βN同β+/βN病患進行辨別。對于βE/βN來說，它的HGB、MCH、MCV、MCHC、RBC、RDW水平同β+/βN、β0/βN均有顯著的差異，容易進行區分。

綜上所述，不同基因型β-地中海貧血患者的紅細胞參數水平各不相同，對臨床區分β-地中海貧血的不同基因分型有參考價值。