血清細胞骨架相關(guān)蛋白4與慢性腎臟病患者血管鈣化的關(guān)系

盧 浩 章 磊 張小燕 徐永偉 周飛雪 劉小菊▲

1.浙江省麗水市中醫(yī)院腎內(nèi)科，浙江麗水 323000；2.浙江省麗水市中醫(yī)院血透室，浙江麗水 323000；3.浙江省麗水市中醫(yī)院心內(nèi)科，浙江麗水 323000；4.浙江省麗水市中醫(yī)院檢驗科，浙江麗水 323000

慢性腎臟病（chronic kidney disease，CKD）是各種原因?qū)е碌穆阅I臟結(jié)構(gòu)和功能障礙，已成為全球公共衛(wèi)生問題[1]。與普通人群比較，CKD 患者患心血管疾病的風(fēng)險顯著增加，也是其死亡的主要原因[2]。研究表明，除家族史、高動脈壓、高血脂、炎癥等心血管疾病危險因素外，因嚴重高磷血癥和微炎癥狀態(tài)等變化導(dǎo)致的血管鈣化也是CKD 患者患心血管疾病的重要原因[3-4]。研究表明，分泌型蛋白Dickkopf-1 可拮抗Wnt/β-catenin 信號通路抑制血管鈣化發(fā)生[5]。細胞骨架相關(guān)蛋白4（cytoskeleton-associated protein 4，CKAP4）是一種Ⅱ型跨膜蛋白，具有調(diào)節(jié)細胞增殖的作用，同時作為Dickkopf 家族蛋白受體，CKAP4 還能結(jié)合Dickkopf-1 增強細胞增殖[6]。作為Dickkopf-1 的受體，CKAP4 是否也參與CKD 血管鈣化鮮見研究報道。本研究旨在分析CKD 患者血清CKAP4 水平變化，探討其與血管鈣化發(fā)生的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取浙江省麗水市中醫(yī)院2019 年1 月至2021 年4 月收治的153 例CKD 患者，均符合《慢性腎臟病篩查診斷及防治指南》[7]診斷，其中男101 例，女52 例；年齡42～78 歲，平均（66.32±5.64）歲；體重指數(shù)（body mass index，BMI）18～27 kg/m2，平均（24.66±2.01）kg/m2；病程4～15 年，平均（9.79±2.12）年；估算的腎小球濾過率（estimated glomerular filtration rate，eGFR）13～87 ml/（1.73m2·min），平均（45.42±5.46）ml/（1.73m2·min）；CKD 分 期[7]：G1期53 例，G2期24 例，G3期32 例，G4期26 例，G5期18 例；原發(fā)疾病：高血壓31 例，糖尿病46 例，慢性腎小球腎炎52 例，其他24 例。納入標準：①年齡≥18 歲；②臨床資料完整；③患者及家屬均知情研究。排除標準：①近6 個月免疫抑制劑、激素使用史；②近6 個月骨折史；③近3 個月急性感染或急性心、腦血管疾病；④合并甲狀腺及甲狀旁腺疾病；⑤合并免疫、血液系統(tǒng)疾病；⑥惡性腫瘤。根據(jù)CT 血管成像檢查是否血管鈣化將其分為鈣化組（52 例）和無鈣化組（101 例）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 基線資料收集 收集所有研究對象性別、年齡、BMI、病程、eGFR、CDK 分期數(shù)據(jù)。

1.2.2 生化指標測定 采集所有研究對象入院2 h 內(nèi)靜脈血，全自動生化分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，型號：BS-280）測定血鈣、血磷、甲狀旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）水平，酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清基質(zhì)金屬蛋白酶-2（matrix metallo proteinase-2，MMP-2）水平，試劑盒由上海梵態(tài)生物科技有限公司提供，貨號：FT-P31744R。

1.2.3 血清CKAP4 水平測定 采集所有研究對象入院2 h 內(nèi)靜脈血，3000 r/min 離心20 min，半徑8 cm，取上清，酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清CKAP4 水平，試劑盒由上海梵態(tài)生物科技有限公司提供，貨號：FTP35636R。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 26.0 對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，正態(tài)分布的計量資料采用均數(shù)±標準差（）表示，比較采用t 檢驗；偏態(tài)分布計量資料的描述以中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25，P75）]表示，比較采用秩和檢驗。計數(shù)資料采用例數(shù)表示，比較采用χ2檢驗。采用logistic 回歸模型分析影響因素。采用受試者操作特征曲線分析診斷價值。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較

鈣化組病程長于無鈣化組，CKD 分期高于無鈣化組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組基線資料比較

2.2 兩組生化指標比較

鈣化組血清CKAP4 水平低于無鈣化組，血鈣、血磷、PTH、MMP-2 水平高于無鈣化組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）。見表2。

表2 兩組生化指標比較

2.3 CKD 患者血管鈣化發(fā)生的影響因素分析

以CKD 患者是否發(fā)生血管鈣化為因變量（發(fā)生=1，未發(fā)生=0），單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的指標為自變量（CKD 分期：G1期=0，G2期=1，G3期=2，G4期=3，G5期=4）進行多因素分析，結(jié)果顯示CDK分期、血鈣、血磷、PTH、MMP-2、CKAP4 均為CKD 患者血管鈣化發(fā)生的獨立影響因素（P ＜0.05）。見表3。

表3 CKD 患者血管鈣化發(fā)生的影響因素分析

2.4 血清CKAP4 水平對CKD 患者血管鈣化的預(yù)測價值

血清CKAP4 水平預(yù)測CKD 患者血管鈣化發(fā)生的受試者操作特征曲線下面積為0.823（95%CI：0.753～0.880，P ＜0.05），靈敏度為84.62%，特異度為72.28%，約登指數(shù)為0.569，截斷值為173.50 pg/ml。見圖1。

3 討論

血管鈣化可導(dǎo)致血管壁僵硬度和脆性逐漸增加，增加血管壁破裂和血栓形成概率，因此易發(fā)心血管疾病，同時血管鈣化還會影響透析CKD 患者動靜脈內(nèi)瘺功能，降低透析效果[4]。目前主要依靠血管成像、血管彩超診斷血管鈣化，動態(tài)評估功能受限，亟須探索相關(guān)機制。既往研究認為血管鈣化是一個被動的、不可避免的現(xiàn)象，近年研究表明其是一個與骨礦化相似的細胞介導(dǎo)的主動調(diào)節(jié)過程，在氧化應(yīng)激、炎癥、高糖、高鈣、高磷等刺激作用下，骨髓源性細胞、血管周邊細胞、血管平滑肌細胞向軟骨或成骨樣細胞轉(zhuǎn)分化為血管鈣化中心環(huán)節(jié)[8-9]。

Wnt/β-catenin 信號通路激活能通過調(diào)節(jié)骨形成促進血管鈣化發(fā)生[10-11]。Dickkopf-1 作為Wnt 信號通路的抑制劑，能結(jié)合低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5/6抑制Wnt 信號中β-catenin 依賴性途徑，拮抗Wnt/βcatenin 信號通路作用[12]。肌節(jié)同源盒2 能激活Wnt 信號通路促進血管鈣化發(fā)生，Dickkopf-1 在肌節(jié)同源盒2 基因敲除小鼠鈣化動脈中表達受抑制[13]。同時臨床研究表明，血清Dickkopf-1 水平降低與CKD 患者血管鈣化相關(guān)[14]，說明Dickkopf-1 與血管鈣化發(fā)生密切相關(guān)。CKAP4 主要定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，在血管平滑肌細胞的細胞膜上廣泛表達，作為Dickkopf 家族受體，已成為眾多癌癥診斷和治療的新型分子靶標[15-16]。本研究結(jié)果顯示，鈣化組血清CKAP4 水平低于無鈣化組，提示CKAP4 可能參與血管鈣化發(fā)生，但是否與CKAP4為Dickkopf-1 結(jié)合受體有關(guān)有待進一步證實。

CKD 患者隨著病情進展，可出現(xiàn)鈣磷代謝紊亂，最終引起繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥，引起軟組織和心血管鈣化[17-19]，與本研究結(jié)果一致。MMP-2 是重要的細胞外基質(zhì)降解蛋白，在CKD 氧化應(yīng)激條件下，血管平滑肌會大量分泌MMP-2，降解血管彈性纖維，誘導(dǎo)鈣沉積，與血管鈣化密切相關(guān)[20]。本研究結(jié)果也顯示，鈣化組血清MMP-2 高于無鈣化組，是血管鈣化的影響因素。血管鈣化是與骨發(fā)育相似的生物學(xué)過程，yes 相關(guān)蛋白能通過β-catenin 促進骨生成[21-22]。近期Xu 等[23]研究也證實，下調(diào)yes 相關(guān)蛋白表達能抑制CKD 高磷酸鹽引起的血管鈣化。腎細胞癌研究中，CKAP4 能通過細胞周期素B1/細胞周期蛋白依賴性激酶1 促進yes 相關(guān)蛋白向細胞核轉(zhuǎn)移[24]。尼古丁導(dǎo)致的動脈僵硬研究中，抑制yes 相關(guān)蛋白能下調(diào)MMP-2 表達[25]。本研究結(jié)果顯示，CKAP4 對血管鈣化發(fā)生具有一定預(yù)測價值，因此CKAP4 可能成為CKD血管鈣化一個新的標志物。

綜上所述，CKD 患者血清CKAP4 水平降低，為血管鈣化發(fā)生獨立影響因素，可作為CKD 血管鈣化預(yù)測指標，但其血管鈣化機制尚不明確，還需進一步深入完善相關(guān)研究。