稻蝦共養(yǎng)病蝦腸道細(xì)菌群落變化與病原細(xì)菌分離及藥物敏感性

石曉媛 王麒 方明棵 王瑩 楊亞珍 朱建強(qiáng)

摘要：病害是影響稻蝦共養(yǎng)農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收入的重要因素。為明確稻蝦共養(yǎng)發(fā)病塘口中致病菌的種類及其防治方法，以健康蝦和病蝦為研究材料，運(yùn)用Illumina MiSeq全基因組測(cè)序技術(shù)，對(duì)健康蝦和病蝦腸道內(nèi)細(xì)菌的群落組成進(jìn)行測(cè)定和分析，預(yù)估出病原菌的種類。在此基礎(chǔ)上，使用選擇性培養(yǎng)基對(duì)病蝦腸道內(nèi)疑似病原菌進(jìn)行分離。將分離所獲疑似病原菌注射至健康蝦體腸道內(nèi)，并觀察蝦體死亡情況，最終確定所選病原菌菌株。通過(guò)顯微觀察、16S rDNA序列分析，最終確定該病原菌的分類地位。最后利用藥敏性試驗(yàn)，篩選出對(duì)該病原菌有抑制效果的抗生素和中草藥種類。試驗(yàn)結(jié)果表明，健康蝦與病原蝦腸道內(nèi)的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)具有顯著性差異。在門水平上，健康蝦腸道內(nèi)細(xì)菌主要是柔壁菌門，其相對(duì)豐度為74.23%;而病蝦腸道內(nèi)細(xì)菌主要是變形菌門，其相對(duì)豐度為67.39%;在屬水平上，健康蝦腸道內(nèi)主要是柔膜菌屬，其相對(duì)豐度為48.30%;病蝦腸道內(nèi)主要是非保密氣單胞菌屬，其相對(duì)豐度為13.50%。分離結(jié)果顯示，所獲8株細(xì)菌均為革蘭氏陰性菌，在選擇性培養(yǎng)基上均呈黃色。病原菌回接感染結(jié)果表明，1.5×108 CFU/mL注射后1 d內(nèi)，致死率高達(dá)100%。分子學(xué)鑒定結(jié)果表明，該病原菌為哈夫尼菌屬蜂房哈夫尼菌。該菌對(duì)所選的卡那霉素、諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、氯霉素這5種抗生素比較敏感;對(duì)黃芩、苦參、艾葉等3種中草藥水提物比較敏感。本研究可為稻蝦共養(yǎng)流行病的診斷及防治，以及小龍蝦的健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：克氏原螯蝦;病原微生物;分離鑒定;防治;藥物敏感性;蜂房哈夫尼菌

中圖分類號(hào)： S182;S945.1? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2022）08-0169-07

克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）俗稱小龍蝦，原產(chǎn)于北美洲，1929年傳入我國(guó)，目前是我國(guó)主要經(jīng)濟(jì)蝦類之一，在淡水甲殼動(dòng)物養(yǎng)殖中位居第一[1]。由于長(zhǎng)期的高密度養(yǎng)殖，以及養(yǎng)殖過(guò)程中使用大量的肥料和人工飼料，導(dǎo)致克氏原螯蝦養(yǎng)殖環(huán)境日漸惡化，病害頻繁發(fā)生，嚴(yán)重影響了小龍蝦產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展和農(nóng)戶的經(jīng)濟(jì)收入[2]。

克氏原螯蝦常見的病害有黑鰓病、爛尾病、纖毛蟲病、出血病等[3]。目前報(bào)道的病原菌主要有嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）[4]、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）[5] 、擬態(tài)弧菌（V. mimicus）[6]、螺原體（Spiroplasma）[7]、白斑綜合癥病毒（white spot syndrome virus）[8]、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）[2]、原螯蝦摩氏摩根菌（Morganella morganii）等[9]。雖然前人對(duì)克氏原螯蝦病原菌做過(guò)較多的研究，但不同養(yǎng)殖地區(qū)的氣候條件、養(yǎng)殖方式存在著差異，因而病原微生物種類應(yīng)有典型性。

克氏原螯蝦等甲殼類動(dòng)物的腸道是儲(chǔ)存食物、消化和吸收營(yíng)養(yǎng)的重要器官。腸道內(nèi)寄生著種類復(fù)雜、數(shù)量龐大的微生物類群。這些微生物對(duì)宿主的免疫、消化、吸收等多種生理活動(dòng)起到了促進(jìn)作用[10-11]。在健康條件下，腸道微生物類群之間處于平衡狀態(tài)，但在病害發(fā)生時(shí)，腸道內(nèi)微生物類群之間的平衡會(huì)被打破。因此，研究病害發(fā)生時(shí)，小龍蝦腸道微生物的群落組成變化對(duì)小龍蝦疾病的診斷和預(yù)防均具有重要意義。

本研究主要針對(duì)2020年湖北省荊州地區(qū)稻蝦共養(yǎng)塘口中存在的病害現(xiàn)象進(jìn)行研究，以期明確病害發(fā)生的原因，找到致病根源微生物，并尋找防治該病原菌的有效措施。該研究可為稻蝦共養(yǎng)生產(chǎn)中病原菌的診斷及防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

病害和健康克氏原螯蝦體均采自湖北省公安縣沙場(chǎng)村稻蝦塘口。連翹、大蒜、黃柏、黃芩、陳皮、甘草、苦參、野菊花、當(dāng)歸、紫蘇、蒲公英、丁香、秦皮、夏枯草、魚腥草、艾葉、石榴皮、虎杖等18味中草藥購(gòu)自荊州市弘衛(wèi)大藥房。抗生素藥敏紙片購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司。細(xì)菌基因組提取試劑盒、PCR Master Mix購(gòu)自生工生物工程（上海）有限公司。氣單胞菌培養(yǎng)基配方：蛋白胨5.00 g/L，酵母粉3.00 g/L，L-賴氨酸鹽酸鹽3.50 g/L，L-精氨酸鹽酸鹽2.00 g/L，山梨醇3.00 g/L，肌醇2.50 g/L，乳糖1.50 g/L，木糖3.75 g/L，膽鹽3.00 g/L，硫代硫酸鈉10.67 g/L，氯化鈉5.00 g/L，檸檬酸鐵銨0.80 g/L，溴麝香草酚藍(lán)0.04 g/L，麝香草酚藍(lán) 0.04 g/L，瓊脂12.50 g/L，氣單胞菌培養(yǎng)基添加劑5.00 mL/L。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 蝦體腸道DNA的提取與16S rDNA擴(kuò)增

2020年5月16日，從湖北省公安縣沙場(chǎng)村健康稻蝦塘口和發(fā)病塘口中分別采集健康和發(fā)病克氏原螯蝦（以下簡(jiǎn)稱為健康蝦、病蝦）各30尾，用75%乙醇擦拭蝦體表面，再用無(wú)菌生理鹽水沖洗2～3次，取其腸道物。使用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）方法提取克氏原螯蝦后腸總DNA，通過(guò)Nanodrop 2000和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其濃度和純度。用無(wú)菌水將DNA稀釋至1 ng/μL用于 16S rDNA的擴(kuò)增。使用16S V3～V4區(qū)引物341F（5′-CCTAYGGGRBGCASCAG-3′）和806R（5′-GGACTACNNGGGTATCTAAT-3′）進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)程序：94 ℃ 預(yù)變性5 min;94 ℃變性5 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，27個(gè)循環(huán)。

1.2.2 高通量測(cè)序與數(shù)據(jù)分析

PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后制備文庫(kù)，測(cè)序使用IonS5TMXL測(cè)序平臺(tái)，利用單端測(cè)序（single-end）的方法，構(gòu)建小片段文庫(kù)進(jìn)行單端測(cè)序。通過(guò)對(duì)reads剪切過(guò)濾，將一致性（identity）大于97%的測(cè)序序列歸為1個(gè)操作分類單元（operational taxonomic unit，OTU）進(jìn)行聚類和物種分析。利用豐富度指數(shù)（Chao1指數(shù)、ACE指數(shù)）以及多樣性指數(shù)（Simpson指數(shù)、Shannon指數(shù)）分析病蝦和健康蝦腸道內(nèi)微生物群落的豐度和多樣性。同時(shí)在門、綱、目、科、屬5個(gè)分類水平上統(tǒng)計(jì)每個(gè)樣品的物種群落結(jié)構(gòu)和豐度，根據(jù)分析結(jié)果，預(yù)判疑似病原菌的種類。

1.2.3 疑似病原菌的分離與純化

用無(wú)菌接種環(huán)挑取病蝦腸道物1環(huán)，接種到疑似病原菌（氣單胞菌）的選擇性培養(yǎng)基上，于培養(yǎng)箱中36 ℃培養(yǎng)24 h后，從培養(yǎng)基上挑取單菌落，純化2～3次后放入 4 ℃ 冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 回接感染試驗(yàn)確定病原菌株

將所有分離菌株分別接種1環(huán)至150 mL氣單胞菌液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3 d后，用無(wú)菌水將每1菌體的菌體濃度分別調(diào)至1.5×108、1.5×107、1.5×106、1.5×105、1.5×104 CFU/mL等5個(gè)濃度梯度。選取室內(nèi)養(yǎng)殖活力較好、無(wú)明顯外傷的健康克氏原螯蝦150尾（每尾質(zhì)量大約為12 g），隨機(jī)平均分為5組，在每尾克氏原螯蝦第2腹節(jié)處注射各濃度菌懸液100 μL，并以注射無(wú)菌生理鹽水100 μL作為對(duì)照組，對(duì)照同樣重復(fù)30尾。感染病原菌后的蝦體繼續(xù)飼養(yǎng)，記錄感染之后 7 d 內(nèi)各處理組蝦體的臨床癥狀和死亡率。

克氏原螯蝦室內(nèi)養(yǎng)殖條件：試驗(yàn)于2020年6—9月在長(zhǎng)江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)樓內(nèi)進(jìn)行。小龍蝦采用白色塑料盆養(yǎng)殖，盆內(nèi)徑長(zhǎng) 125 cm、寬 75 cm、高37 cm。試驗(yàn)用水為當(dāng)?shù)氐疚r共養(yǎng)塘口水，每箱水深10 cm。每天投喂飼料2次（08：00、19：00），投餌量為蝦體質(zhì)量的3.5%。5 d為1個(gè)周期進(jìn)行換水，溶解氧控制在5.5～5.7 mg/mL范圍內(nèi)，室溫保持在23～25 ℃，箱內(nèi)放置水草及覆蓋物。

1.2.5 病原菌菌株的革蘭氏染色及分子鑒定

將致死率高的濃度梯度菌種接種于氣單胞菌培養(yǎng)基上，于培養(yǎng)箱中36 ℃培養(yǎng)24 h，挑取單菌落的一小部分進(jìn)行革蘭氏染色。

按照細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒說(shuō)明方法提取革蘭氏染色菌株的總DNA，以27F（5′-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3′）和1492R（5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′）為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，采用DNA純化回收試劑盒純化回收16S rDNA產(chǎn)物，然后交由生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序，將所得16S rDNA序列在NCBI的GenBank和Blast中進(jìn)行同源性比對(duì)分析，通過(guò)MEGA 7等軟件，采用鄰接法（neighbor-joining method）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹[2]。

1.2.6 病原菌對(duì)抗生素藥物的敏感性試驗(yàn)

采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。每種藥敏片直徑為6 mm，將1環(huán)病原菌接種至100 mL液體培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱中36 ℃培養(yǎng)24 h后，用移液槍吸取 100 μL 菌懸液至固體培養(yǎng)基上，并用無(wú)菌玻璃棒涂布均勻，然后將藥敏紙片均勻放置于平板上，每個(gè)處理放置3個(gè)重復(fù)，于培養(yǎng)箱中36 ℃培養(yǎng)18 h后，用游標(biāo)卡尺測(cè)定抑菌圈直徑，參照杭州微生物試劑有限公司提供的判定標(biāo)準(zhǔn)判定該菌對(duì)不同種類抗生素藥物的敏感性。

1.2.7 病原菌對(duì)中草藥水提物的敏感性試驗(yàn)

分別稱取每種中草藥50 g，放入燒杯中，加入蒸餾水 1 000 mL，浸泡30 min，加熱至沸騰以后保持微沸狀態(tài)20 min，然后將其過(guò)濾至容器內(nèi)，濾液濃度調(diào)至 1 g/mL。 藥敏試驗(yàn)采用瓊脂擴(kuò)散法，將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌懸液稀釋至濃度為1×107 CFU/mL，用移液槍吸取100 μL菌懸液至固體培養(yǎng)基上，再用無(wú)菌刮鏟將菌液涂抹均勻，然后用打孔器（直徑為6 mm）在平板上均勻打3個(gè)孔，挑出孔內(nèi)瓊脂并用空白瓊脂封底，做好標(biāo)記。在每孔內(nèi)加入100 μL藥液，放入36 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，然后用游標(biāo)卡尺測(cè)定抑菌圈直徑。依據(jù)《中藥藥理學(xué)》中敏感性的判斷標(biāo)準(zhǔn)，抑菌圈直徑≥20 mm屬于極敏，抑菌圈直徑在15～19 mm之間為高敏，抑菌圈直徑在10～14 mm 之間為中敏，抑菌圈直徑<10 mm為低敏，沒有抑菌圈為不敏，判定病原菌對(duì)各種中草藥水提物的敏感性[12]。

2 結(jié)果與分析

2.1 健康蝦與病蝦腸道內(nèi)細(xì)菌多樣性差異

Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)反映了微生物的多樣性，而Chaol指數(shù)和ACE指數(shù)反映了微生物的豐富度。從表1可知，健康蝦與病蝦相比，Simpson和Shannon指數(shù)差異并不顯著，但健康蝦的Chaol和ACE指數(shù)顯著高于病蝦。

2.2 健康蝦與病蝦腸道內(nèi)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)差異

在門水平上，健康蝦主要以柔壁菌門（Tenericutes）為主，相對(duì)豐度為74.23%;而病蝦主要以變形菌門（Proteobacteria）為主，相對(duì)豐度為67.39%（圖1）。在屬水平上，如圖2所示，柔膜菌綱的柔膜細(xì)菌（Unclassified Mollicutes）（48.3%）和RsaHF231（18.5%）為健康蝦腸道內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌群，二者相對(duì)豐度共占細(xì)菌類群的66.8%;而病蝦腸道內(nèi)這2種菌體含量?jī)H占細(xì)菌總量的12.7%。但病蝦中氣單胞菌目的氣單胞菌（Unclassified Aeromonadaceae）相對(duì)豐度較高，為13.5%，而在健康蝦中，這種菌幾乎沒有，因此初步推斷該菌為主要致病菌，并做進(jìn)一步的分離。

2.3 疑似病原菌的分離

將病蝦腸道物接種于氣單胞菌選擇培養(yǎng)基上，于培養(yǎng)箱中36 ℃培養(yǎng)24 h后，共獲得8株菌體（編號(hào)為N1～N8）。如表2所示，這8株菌體菌落均呈現(xiàn)黃色、圓形、表面光滑、邊緣平整、菌落突起的特征，革蘭氏染色為陰性，因此推斷這8株菌可能為同一菌種。

2.4 疑似病原菌的回接感染驗(yàn)證

由于所分離的8株疑似病原菌，菌落形態(tài)和革蘭氏染色結(jié)果相同，因此選擇N1菌株作為回接感染的出發(fā)菌株，以注射方式感染健康蝦，注射后蝦體出現(xiàn)不同程度的死亡，死亡率隨菌液濃度的增大而增加。高濃度試驗(yàn)組（1.5×108 CFU/mL）在注射后1 d內(nèi)，小龍蝦發(fā)生急性死亡現(xiàn)象，死亡率高達(dá)100%。1.5×107 CFU/mL注射組在3 d內(nèi)死亡率達(dá)到90%，隨后的4 d未見蝦體死亡。1.5×106 CFU/mL 注射組感染5 d后，死亡率達(dá)56.67%，而1.5×105 CFU/mL和1.5×104 CFU/mL注射組死亡率較低。各處理組的小龍蝦發(fā)病癥狀均類似于分離前病蝦癥狀，表現(xiàn)為蝦體活力下降、攝食量降低、尾彈反應(yīng)減弱、應(yīng)激能力變差等。感染試驗(yàn)中注射生理鹽水的對(duì)照組未出現(xiàn)發(fā)病和死亡情況（表3），表明分離的菌株N1為導(dǎo)致本次蝦體發(fā)病和死亡的致病菌之一。

2.5 病原菌N1菌株的分類地位確定

利用Blast工具將N1菌株所得16S rDNA序列與 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中已知微生物的 16S rDNA 序列進(jìn)行同源性比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，該菌株16S rDNA序列與Gen Bank中的部分序列有較高的相似性（100%）。系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示菌株N1（以S00664X1表示）的16S rDNA基因與JX267126.1聚為同一分支，同源性為100%，根據(jù)江楓的研究可知，細(xì)菌的16S rDNA序列相似度大于98%，可將它們菌體認(rèn)定為是相同的種[13]，因此該菌株被認(rèn)定為蜂房哈夫尼菌（圖3）。

2.6 病原菌N1菌株對(duì)抗生素藥物的敏感性試驗(yàn)結(jié)果

病原菌對(duì)所選11種抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株N1對(duì)卡那霉素、諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星等4種抗生素較為敏感，對(duì)氯霉素中介，對(duì)慶大霉素、新霉素、青霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、紅霉素等6種藥物耐藥（表4）。

2.7 病原菌N1菌株對(duì)中藥水提物的敏感性試驗(yàn)結(jié)果

瓊脂擴(kuò)散法試驗(yàn)結(jié)果表明，病原菌N1菌株對(duì)黃芩極度敏感，對(duì)苦參、艾葉高度敏感，對(duì)甘草中度敏感，對(duì)當(dāng)歸低敏，對(duì)其他13種中藥水提液不敏感（表5）。

3 討論與結(jié)論

克氏原螯蝦因其營(yíng)養(yǎng)豐富，商業(yè)價(jià)值高被廣泛養(yǎng)殖。隨著養(yǎng)殖面積和密度的增加導(dǎo)致克氏原螯蝦疾病感染日益嚴(yán)重[14-15]。有關(guān)小龍蝦致病菌的報(bào)道也越來(lái)越多，如副溶血弧菌、嗜水氣單胞菌、擬態(tài)弧菌、弗氏檸檬酸桿菌、維氏氣單胞菌[16]。本試驗(yàn)從病蝦腸道中分離出的主要病原菌為蜂房哈夫尼菌。蜂房哈夫尼菌是一種常見的革蘭氏陰性菌，該菌存在于蔬菜、植物以及哺乳動(dòng)物的胃腸道環(huán)境中，可以直接引發(fā)感染或者在一些慢性病癥的條件下引起疾病發(fā)生[17]。王霞研究發(fā)現(xiàn)，蜂房哈夫尼菌可以引起人的化膿性腦膜炎[18]。趙淑芳等報(bào)道，蜂房哈夫尼菌能感染棘胸蛙致其產(chǎn)生嚴(yán)重的腹瀉和腹脹等腸道類疾病[19]。閆艷新等報(bào)道，蜂房哈夫尼菌能夠引起人類泌尿系統(tǒng)和呼吸道的感染，甚至?xí)饠⊙Y的發(fā)生[20]。蜂房哈夫尼菌還能引起錦鯽體表出現(xiàn)血點(diǎn)、腸道腫脹潰爛的癥狀，也會(huì)引起小白鼠身體抽搐、眼睛分泌黃色黏稠物，以及胃部脹氣、腸部腫脹等一系列的癥狀[21]。本研究發(fā)現(xiàn)蜂房哈夫尼菌能夠感染克氏原螯蝦，引起其活力下降、攝食量降低、尾彈反應(yīng)減弱、應(yīng)激能力變差，進(jìn)而發(fā)生死亡。

測(cè)序結(jié)果表明，健康蝦與病蝦相比 Simpson指數(shù)和Shannon指數(shù)差異并不顯著;但健康蝦的Chaol指數(shù)和ACE指數(shù)顯著高于病蝦。表明病蝦和健康蝦腸道內(nèi)微生物類群相似度不高，差異明顯。健康蝦腸道細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)類群是柔壁菌門，相對(duì)豐度為74.23%;病蝦腸道細(xì)菌類群主要為變形菌門，相對(duì)豐度為67.39%，其中γ-變形菌綱氣單胞菌和β-變形菌綱伯克霍爾德氏菌科非保密伯克霍爾德氏菌屬為優(yōu)勢(shì)菌群，該研究結(jié)果與郁維娜等的研究結(jié)果[22]不盡相同。本研究發(fā)現(xiàn)，病蝦和健康蝦腸道內(nèi)微生物多樣性差異不明顯，這與郁維娜等的研究結(jié)果[22]一致。但本研究發(fā)現(xiàn)病蝦腸道內(nèi)細(xì)菌類群主要為γ-變形菌綱和β-變形菌綱，而郁維娜等的研究認(rèn)為，病蝦中主要是γ-變形菌綱。分析原因認(rèn)為，本研究材料為淡水小龍蝦，而郁維娜等的研究對(duì)象為淡水凡納濱對(duì)蝦，凡納濱對(duì)蝦樣品采自寧波市瞻岐椿霖對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)（29.53°N，121.5°E），另外養(yǎng)殖地區(qū)和養(yǎng)殖習(xí)慣與本研究中的也不盡相同。

施用抗菌藥物是水產(chǎn)養(yǎng)殖中治療細(xì)菌性疾病使用最多亦是最有效的方法，由于養(yǎng)殖戶缺乏流行病的診斷和防治技術(shù)，導(dǎo)致抗菌藥物種類使用不當(dāng)，抗菌物質(zhì)濫用等現(xiàn)象較為普遍，造成了水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中病原菌產(chǎn)生多重耐藥性，無(wú)法做到有針對(duì)性的科學(xué)用藥。另外，藥物會(huì)在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)發(fā)生殘留影響人類的健康，破壞生態(tài)的平衡以及影響小龍蝦的健康養(yǎng)殖[23]。而許多中草藥中含有豐富的生物堿、皂莢、多糖、蒽醌類等免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)，可以強(qiáng)化機(jī)體能力抵御病原體[24]。它們不僅具有天然、無(wú)毒副、無(wú)殘留等特點(diǎn)，還能補(bǔ)充機(jī)體營(yíng)養(yǎng)，提高機(jī)體免疫力[25-26]，起到抗菌、抗病的作用，達(dá)到藥物性和營(yíng)養(yǎng)性的兼并效果[27]，因此用中草藥來(lái)治療細(xì)菌性疾病逐漸受到人們的重視，同時(shí)也鼓勵(lì)采用抗生素中草藥聯(lián)合來(lái)抑制病原細(xì)菌的發(fā)生[28-29]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，該菌對(duì)黃芩、苦參、艾葉等中草藥比較敏感。另外，該菌對(duì)不同種類的抗菌藥物耐受性不同，該菌對(duì)喹諾酮類抗生素中的諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星高度敏感，對(duì)氨基糖苷類抗生素的卡那霉素比較敏感，對(duì)氯霉素類抗生素中的氯霉素有一定程度的抑制作用。

本試驗(yàn)雖找到了病害發(fā)生的主要微生物根源，篩選出了幾種能有效防治該病原菌的抗生素和中草藥種類，可為病原菌的診斷及其防治提供一定幫助。但針對(duì)所選抗生素和中草藥聯(lián)合防治還未開展研究。另外，關(guān)于蜂房哈夫尼菌對(duì)克氏原螯蝦致病性相關(guān)的報(bào)道甚少，因此對(duì)于該病原菌的致病機(jī)制以及有效防治手段還需進(jìn)一步研究闡明。

參考文獻(xiàn)：

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