UGT1A1基因多態(tài)性對寶安地區(qū)女性妊娠期甲狀腺功能減退的臨床價(jià)值

尹偉明 盧小娟 張旭明

深圳市寶安區(qū)石巖人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，深圳 518108

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1（uridine 5′?diphospho?glucuronosyltransferase 1?1，UGT1A1）在體內(nèi)參與進(jìn)行Ⅱ相生物轉(zhuǎn)化，屬于蛋白酶類，在體內(nèi)分布范圍很廣，在肝臟可催化大量外源性藥物的葡萄糖醛酸化。甲狀腺素（T4）可在肝臟內(nèi)通過脫碘酶及UGT代謝滅活，最終轉(zhuǎn)化為甲狀腺素葡萄糖苷隨膽汁排出，參與該過程的酶主要為UGT1A1及UGT1A3［1］。國內(nèi)關(guān)于UGT1A1與甲狀腺功能減退的研究報(bào)道較少，有報(bào)道表明UGT1A1的基因變異有可能通過影響甲狀腺素的代謝對妊娠期甲狀腺功能造成影響［2］。本研究以寶安地區(qū)妊娠期女性為研究對象，探究UGT1A1多態(tài)性對甲狀腺功能減退的影響，為妊娠期甲狀腺功能減退的臨床治療提供依據(jù)。

資料與方法

1、一般資料

以2021年1月至2022年2月就診于深圳市寶安區(qū)石巖人民醫(yī)院妊娠期甲狀腺功能減退的女性100例為觀察組，同時(shí)選取同期產(chǎn)檢甲狀腺功能正常的健康女性100例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴甲狀腺功能減退患者符合相關(guān)臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］；⑵所有研究對象的臨床資料完整；⑶所有研究對象均為單胎妊娠女性；⑷所有研究對象對研究方案知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴系統(tǒng)性紅斑狼瘡等全身免疫系統(tǒng)疾病患者；⑵有甲狀腺手術(shù)史、放化療史等明顯損害甲狀腺因素的患者；⑶心腎等重要器官功能障礙；⑷其他原因不能配合完成研究。

2、方法

2.1、獲取血液樣本 收集觀察組和對照組外周靜脈血3.00～5.00 ml，加入抗凝劑后存放到4℃冰箱保存。觀察組患者使用左甲狀腺素片治療4周后再次留取外周血標(biāo)本2.00 ml。

2.2、UGT1A1基因檢測 取200μl血液置于1.50 ml離心管中，加入40.0μl蛋白酶K和200.0μl裂解液混勻。加入10.0μl NaAc（pH 4.8）、1.25 ml緩沖液，12 000 g離心15 min后轉(zhuǎn)移上清，重復(fù)離心和洗脫操作，吹干后復(fù)溶得總RNA溶液。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增的每個(gè)反應(yīng)體系總體積為10.0μl（20 ng/μl DNA模 板1.0μl，2×Taqman Universal Master Mix 5.0μl，20×Taqman?MGB探針0.5μl，去離子水3.5μl）。反應(yīng)條件為：95℃10 min，92℃15 s，60℃1 min共20個(gè)循環(huán)，89℃15 s，60℃90 s共30個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后使用ABI7500型熒光定量PCR儀和配套分析軟件確定基因分型結(jié)果。樣本測序工作由天一輝遠(yuǎn)公司完成，測序結(jié)果由Chromas軟件和NCBI基因庫完成對比分析。

引物序列設(shè)計(jì)如下：UGT1A1*6正向引物5’?ACGCCTCGTTGTACATCAGAG?3’，反向引物5’?TCCTTGTTGTGCAGTAAGTGG?3’；UGT1A1*28正向引物5’?AGCCAGTTCAACTGTTGTTGC?3’，反 向 引 物5’?TTTGCTCCTGCCAGAGGTTC?3’。

2.3、促甲狀腺激素（TSH）和甲狀腺過氧化物酶抗體（thyroid peroxidase antibody，TPOAb）測定 血液離心得血清，采用電化學(xué)發(fā)光法測定血清中TSH和TPOAb水平，所用儀器和試劑為瑞士羅氏e602電化學(xué)發(fā)光儀和配套試劑，操作嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行。

3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，采用配對t檢驗(yàn)或F檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1、兩組研究對象UGT1A1基因多態(tài)性比較

觀察組中UGT1A1*6野生型73例，雜合突變（G/A）型23例，純合突變（A/A）型4例，UGT1A1*28野生型70例，G/A型27例，A/A型3例；對照組中UGT1A1*6野生型69例，G/A型26例，A/A型5例，UGT1A1*28野生型72例，G/A型26例，A/A型2例；UGT1A1*6和UGT1A1*28基因多態(tài)性在觀察組和對照組中差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。見表1。

2、妊娠期甲狀腺功能減退患者TSH和TPOAb水平

治療前，不同UGT1A1*6和UGT1A1*28基因型患者TSH和TPOAb水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；治療后，UGT1A1*6和UGT1A1*28野生型患者TSH和TPOAb水平最高，UGT1A1*6 G/A型患者次之，UGT1A1*6 A/A型患者TSH水平最低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2、3。

討 論

妊娠期甲狀腺功能減退與妊娠期糖尿病、高血壓疾病及流產(chǎn)、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局相關(guān)，可能導(dǎo)致新生兒缺陷并影響子代智力發(fā)育，在妊娠期嚴(yán)重甲狀腺功能減退女性的子代中，不但影響智力發(fā)育，而且顯著升高精神類疾病如自閉癥和多動(dòng)癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并可向子代遺傳［4］。妊娠期甲狀腺功能異常顯著影響胎兒的發(fā)育，尤其在妊娠前半個(gè)周期的甲狀腺激素水平不足，可直接影響大腦發(fā)育［5］。左甲狀腺素是當(dāng)前臨床治療甲狀腺功能減退的主要藥物。研究顯示妊娠期甲狀腺功能減退女性左甲狀腺素片替代治療可顯著改善母嬰結(jié)局［6］。

表1 兩組研究對象的UGT1A1基因多態(tài)性比較（例）

表2 觀察組妊娠期甲狀腺功能減退患者治療前后TSH水平比較（mU/L，±s）

表2 觀察組妊娠期甲狀腺功能減退患者治療前后TSH水平比較（mU/L，±s）

注：給予妊娠期甲狀腺功能減退患者左甲狀腺素片常規(guī)治療4周；TSH為促甲狀腺激素，UGT1A1為尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1

時(shí)間治療前治療后t值P值例數(shù)100 100 UGT1A1*6基因型野生型（73例）5.56±1.55 3.94±1.04 8.679＜0.001 G/A型（23例）5.96±1.73 3.24±0.98 13.680＜0.001 A/A型（4例）5.87±1.24 2.86±0.87 19.870＜0.001 F值0.593 5.635 P值0.555 0.005 UGT1A1*28基因型野生型（70例）5.62±1.96 3.87±0.72 8.381＜0.001雜合突變型（27例）5.85±1.41 3.15±0.64 17.440＜0.001純和突變型（3例）6.24±1.79 2.87±0.46 18.230＜0.001 F值0.039 12.380 P值0.962 0.004

表3 觀察組妊娠期甲狀腺功能減退患者治療前后TPOAb水平比較（IU/ml，±s）

表3 觀察組妊娠期甲狀腺功能減退患者治療前后TPOAb水平比較（IU/ml，±s）

注：給予妊娠期甲狀腺功能減退患者左甲狀腺素片常規(guī)治療4周；TPOAb為甲狀腺過氧化物酶抗體，UGT1A1為尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1

時(shí)間治療前治療后t值P值例數(shù)100 100 UGT1A1*6基因型野生型（73例）76.48±11.54 63.74±8.32 8.955＜0.001 G/A型（23例）78.31±10.37 60.47±7.24 14.110＜0.001 A/A型（4例）75.82±12.44 55.26±5.17 15.260＜0.001 F值0.247 3.233 P值0.782 0.044 UGT1A1*28基因型野生型（70例）77.62±10.95 62.14±8.62 11.110＜0.001雜合突變型（27例）75.98±12.46 58.51±7.36 12.070＜0.001純和突變型（3例）76.54±12.89 52.10±6.25 17.060＜0.001 F值0.205 3.623 P值0.815 0.030

葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UGTs）是催化藥物、脂肪酸、甲狀腺激素、膽紅素等于葡萄糖醛酸結(jié)合的重要酶類，人類甲狀腺激素葡萄糖醛酸結(jié)合反應(yīng)主要由UGT1A1和UGT1A3完成，其中UGT1A1基因以單核苷酸多態(tài)性、缺失、插入等在個(gè)體間顯示出較大差異，當(dāng)前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的UGT1A1基因突變位點(diǎn)多達(dá)30個(gè)，TA盒突變是最為常見的突變方式之一，UGT1A1*6多態(tài)性表現(xiàn)為G/G、A/G和A/A 3種基因型，不同人群中突變發(fā)生率有所不同，亞洲人群發(fā)生率可達(dá)13%～23%。國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道：UGT1A1*28多態(tài)性G/G占比70%～85%，A/G占比15%～25%，A/A占比低于5%［7?8］。本研究中妊娠期甲狀腺功能減退女性中UGT1A1*6 G/G占比73%，G/A 23%，A/A 4%，UGT1A1*28 G/G占比70%，G/A 27%，A/A 3%；對照組中UGT1A1*6 G/G占比69%，G/A 26%，A/A 5%，UGT1A1*28 G/G 72例，G/A型26例，A/A型2%；這與上述報(bào)道基本一致。

TSH和TPOAb可用于臨床甲狀腺功能診療。研究顯示，妊娠期甲狀腺功能減退時(shí)補(bǔ)充左甲狀腺素劑量因TSH升高程度而異，受TPOAb影響［9］。本研究中對甲狀腺功能減退的孕婦進(jìn)行左甲狀腺素替代治療，治療前不同UGT1A1*6和UGT1A1*28基因多態(tài)性患者的TSH和TPOAb水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；治療4周后，UGT1A1*6和UGT1A1*28野生型患者TSH和TPOAb水平最高，UGT1A1*6 G/A型患者次之，UGT1A1*6 A/A型患者TSH水平最低；這可能與UGT1A1基因突變后UGT1A1酶活性降低導(dǎo)致甲狀腺激素體內(nèi)代謝能力減弱，進(jìn)而可負(fù)反饋抑制TSH的合成和分泌，改善機(jī)體免疫過程，減低TPOAb水平有關(guān)［10］。因此，臨床上UGT1A1基因突變患者可考慮適當(dāng)調(diào)整左甲狀腺素的劑量，以達(dá)到更好的治療效果，指導(dǎo)臨床合理用藥。

綜上所述，妊娠期甲狀腺功能減退女性的UGT1A1基因多態(tài)性與健康妊娠女性類似，UGT1A1*6和UGT1A1*28純合突變型妊娠期甲減患者臨床治療后TSH和TPOAb水平顯著降低，臨床上應(yīng)考慮結(jié)合UGT1A1基因型給予適合劑量的藥物治療。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突