定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析SDF2L1過(guò)表達(dá)后鼻咽癌細(xì)胞中的差異蛋白*

羅承長(zhǎng)，蘇琪盛，黎小紅，楊 崢，莫武寧

（廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，南寧 530021）

鼻咽癌（NPC）是最常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤之一[1]。在全球范圍內(nèi)，每年確診的NPC患者約有8.7萬(wàn)例[2]。中國(guó)是NPC發(fā)病率和病死率較高的國(guó)家之一[3]。由于NPC發(fā)病部位隱匿，早期癥狀不明顯，超過(guò)50%的患者就診時(shí)已處于中晚期，預(yù)后較差[4]。因此，尋找有效基因靶點(diǎn)對(duì)NPC的臨床診斷及治療具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子2樣1（SDF2L1）在胰腺癌、乳腺癌和卵巢癌中發(fā)揮重要作用[5-7]。本課題組前期研究顯示，SDF2L1在NPC細(xì)胞中呈低表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移密切相關(guān)[8]。然而，SDF2L1在NPC中的具體調(diào)控機(jī)制尚不清楚。本研究采用非標(biāo)記蛋白質(zhì)定量（LFQ）分析技術(shù)結(jié)合生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)受SDF2L1調(diào)控的下游關(guān)鍵基因，探究SDF2L1在影響NPC細(xì)胞生物學(xué)功能的潛在機(jī)制，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)NPC的發(fā)生發(fā)展機(jī)制、研發(fā)新治療靶點(diǎn)提供新思路。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞和主要試劑 本課題組前期已經(jīng)在5-8F細(xì)胞系的基礎(chǔ)上成功構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SDF2L1的NPC細(xì)胞系（5-8Fg）和空載細(xì)胞系（5-8F1）[8]。胎牛血清（FBS）、DMEM培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco）；磷酸鹽緩沖液（PBS）和青—鏈霉素混合液（大連美侖生物）；尿素、二硫蘇糖醇（DTT）、羧基氨基甲烷（Tris）、碘乙酰胺（IAA）、甲酸（美國(guó)Sigma）；SDS和RNA引物（上海生工）；胰蛋白酶（北京華利世）；質(zhì)譜級(jí)乙腈、熒光抗體（美國(guó)Thermo）；BCA蛋白檢測(cè)試劑盒、蛋白酶抑制劑（南京碧云天）；Trizol試劑（日本TaKa-Ra）；All-In-One 5X RT Master Mix和EvaGreen 2X qPCR Master Mix試劑盒（美國(guó)Applied Biological Materials）；核糖體蛋白L14（RPL14）抗體、GAPDH抗體（英國(guó)Abcam）。

1.2細(xì)胞培養(yǎng) 用含10%FBS和1%青—鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)5-8Fg和5-8F1細(xì)胞，置于37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每24 h更換1次培養(yǎng)液，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。……