基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及體外實驗探討蛭巖消積方治療肝癌的作用機制*

仇雯霞，謝小慧，陳欣欣，王宗玉，陳闖△

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧 530021；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，南寧 530200；3.廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，南寧 530021）

原發(fā)性肝癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率目前仍位居高位[1]。臨床研究表明，中醫(yī)藥對肝癌防治有獨特的優(yōu)勢[2-4]，但大多數(shù)方藥作用機制不明確，阻礙了中醫(yī)藥的推廣應(yīng)用。蛭巖消積方是廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院的院內(nèi)制劑（備案號：桂藥制備字M20220001000），組方包括巖黃連、水蛭、白花蛇舌草、黨參、柴胡、莪術(shù)、絞股藍(lán)、薏苡仁。研究表明，蛭巖消積方能減輕肝癌患者的臨床癥狀，提高患者的生活質(zhì)量，但蛭巖消積方的抗肝癌機制尚未明確。本研究擬通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測蛭巖消積方治療肝癌的作用靶點及通路，并進行體外實驗對相關(guān)的分子機制進行初步驗證，為蛭巖消積方的抗肝癌機制研究提供前期基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞 人肝癌細(xì)胞HepG2由廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院中心實驗室提供，用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培養(yǎng)基（含青—鏈霉素100 U/mL），置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2主要試劑FBS、DMEM、胰蛋白酶購自美國Gibco公司；青—鏈霉素混合液、姬姆薩、4%多聚甲醛、二甲基亞砜（DMSO）、PBS購自北京索萊寶公司；Matrigel基底膜基質(zhì)購自美國Corning公司；CCK8檢測試劑盒購自日本東仁公司；細(xì)胞周期試劑盒購自杭州聯(lián)科生物；兔抗PI3K、AKT、mTOR、磷酸化（p-）PI3K、p-AKT、p-mTOR、CDK2、CyclinA、p-CHK1、Cdc25A購自博奧森；二抗購自碧云天。

1.3蛭巖消積方水提物的制備 蛭巖消積方從廣西醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院藥房采購。蛭巖消積方加15倍水，煎煮1 h后，用400目濾布過濾，濃縮成膏，凍干機干燥成粉，臨用時用培養(yǎng)基溶解，0.22μm微孔濾器過濾除菌。……