EGF基因多態(tài)性與HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌對化療藥物順鉑敏感性的關(guān)系

邊 靜 張鵬輝 李佳佳

肝癌(hepatocelluer carcinoma，HCC)作為常見的惡性腫瘤，又稱原發(fā)性肝癌[1]。發(fā)病率和死亡率均高，嚴(yán)重危害著人類的生命健康[2]。HBV是誘發(fā)HCC的主要危險因素，感染HBV后改變肝細胞基因，導(dǎo)致肝臟發(fā)生病變，最后引起HCC的發(fā)生[3-4]。HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌在所有肝癌類型中占大部分，發(fā)病機制特殊，相應(yīng)治療策略也有所不同[5]。肝癌的主要治療方式采取順鉑化療，但目前化療藥物耐藥問題易對肝癌的治療效果造成不良影響[6]。EGF(epidermal growth factor)主要在上皮組織細胞中增殖，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用[7]。但是關(guān)于EGF與肝癌相關(guān)機制的研究較少，具體機制尚不清楚。本研究通過對EGF基因多態(tài)性與HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌對化療藥物順鉑的敏感性的關(guān)系的探究，為未來進一步研究HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌病情提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2018年8月至2020年8月于本院接受的112例HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌患者作為研究對象，其中男性74例，女性38例，年齡42～73歲，平均年齡(54.34±9.24)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《病毒性肝炎防治方案》[8]診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)確診為慢性乙型肝炎；②符合《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》[9]，經(jīng)病理診斷確診為肝癌；③患者身體狀況良好；④患者或家屬已簽署研究知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤患者，②無重要臟器的嚴(yán)重損傷；③臨床資料不全患者。

1.2 化療方案及化療敏感性評價

患者接受順鉑(廠家：山東省德州制藥廠，國藥準(zhǔn)字：H37020525)方案化療，按患者體表面積一次20 mg/m2，一天1次，連用5天，為1個化療周期，同時對患者進行水化利尿。化療2個周期后根據(jù)實體瘤療效評定標(biāo)準(zhǔn)[10]將其分為4組，分別為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)和進展(PD)。其中CR和PR合并為化療敏感組，SD和PD合并為化療耐藥組。

1.3 DNA提取以及EGF基因分型

抽取研究對象靜脈血3 ml，收集于乙二胺四乙酸鈉抗凝管中保存。采用全血DNA提取試劑盒(上海生工生物有限公司)提取總DNA，選取2個EGF的SNP位點，分別為rs3756261、rs11568835，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測反應(yīng)方法檢測，并送上海生工生物有限公司檢測。

1.4 統(tǒng)計分析

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS21.0軟件分析，計數(shù)資料以例或率表示，采用χ2檢驗進行兩組比較。經(jīng)性別、年齡、腫瘤大小、分化程度等校正，采用Logistic回歸模型計算OR及95%CI。采用Cox比例風(fēng)險回歸模型評估預(yù)后獨立因素，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同化療敏感性患者臨床資料比較

比較耐藥組和敏感組患者的性別、年齡、腫瘤大小以及分化程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具體見表1。

表1 不同化療敏感性HCC患者臨床資料比較/例

2.2 EGF基因多態(tài)性與肝癌對順鉑耐藥的相關(guān)性分析

根據(jù)基因型分型結(jié)果可知，rs3756261 TT基因型(n=21)占18.75%、TC基因型(n=61)占54.46%和CC基因型(n=30)占26.79%；rs11568835 GG基因型(n=26)占23.21%、AG基因型(n=53)占47.32%和AA基因型(n=33)占29.46%，且基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。對于rs11568835，GG、AG、AA基因型患者化療耐藥率為76.92%、64.15%和51.52%，其中GG基因型化療耐藥性是AA的1.20倍(95%CI：1.172-6.272，P<0.05)。對于rs3756261，TT、TC、CC基因型患者化療耐藥率為61.90%、60.66%和36.67%。各基因型之間化療耐藥率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。具體見表2。

表2 EGF基因多態(tài)性與肝癌對順鉑耐藥的相關(guān)性分析(例，%)

2.3 HCC預(yù)后的多因素分析

根據(jù)Cox比例風(fēng)險回歸模型，對患者性別、年齡、腫瘤大小、分化程度以及各基因多態(tài)性進行多因素分析，結(jié)果得出rs3756261 C/T多態(tài)性是影響患者預(yù)后的獨立因素(P<0.05)，具體見表3。

表3 HCC預(yù)后的多因素分析

3 討論

肝癌是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，2018年全球肝癌發(fā)病患者約84萬例，死亡78萬例[11]。肝癌在中國的發(fā)病率及死亡率均高，其中中國新發(fā)病例占全球的46.7%，死亡病例占47.2%[12]。肝癌的主要致病因素為肝炎病毒感染，中國肝癌的高發(fā)病率與HBV感染率有關(guān)，HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌占所有肝癌病例的60%，主要是由于患者感染慢性HBV引發(fā)的炎癥引起的[13-14]。目前針對肝癌的化療方案主要采取順鉑藥物聯(lián)合化療，其主要通過與DNA結(jié)合形成合物，從而使DNA鏈內(nèi)或鏈間交聯(lián)，造成DNA損傷甚至細胞死亡[15-16]。腫瘤細胞對DNA相關(guān)細胞毒性藥物敏感性不同，主要是由于機體DNA修復(fù)能力的差異。

NF-κB信號通路可通過控制炎癥細胞因子以及趨化因子的表達在炎癥反應(yīng)過程中起關(guān)鍵性作用，包括TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8等，以上均與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[17-18]。持續(xù)激活NF-κB信號通路可促進腫瘤發(fā)展，提高腫瘤復(fù)發(fā)率以及化療耐藥性[19]。EGF可通過活化NF-κB信號通路來參與肝癌的發(fā)生發(fā)展過程[20]。有研究報道稱EGF的表達與順鉑介導(dǎo)的細胞毒性[21]。本研究發(fā)現(xiàn)對于rs11568835，GG、AG、AA基因型患者化療耐藥率為76.92%、64.15%和51.52%，其中GG基因型化療耐藥性是AA的1.20倍(95%CI：1.172-6.272，P<0.05)。結(jié)合EGF多態(tài)性研究結(jié)果[22]，本研究猜測A等位基因啟動子活性比G等位基因強，調(diào)控EGF的表達下調(diào)，提高T淋巴細胞增殖力，促進腫瘤細胞凋亡，從而提高化療敏感性。對于rs3756261，TT、TC、CC基因型患者化療耐藥率為61.90%、60.66%和36.67%，化療耐藥率隨著T含量的減少而降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與樣本量不足有關(guān)。Cox多因素分析結(jié)果得出rs3756261 C/T多態(tài)性是影響患者預(yù)后的獨立因素(OR=1.423，95%CI:1.321-2.121，P<0.05)，這說明了rs3756261 C/T多態(tài)性可能與患者預(yù)后有關(guān)，但是還沒有具體研究證實，需要進一步深入研究EGF基因多態(tài)性與HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌預(yù)后的關(guān)系。

綜上所述，本研究探究了EGF基因多態(tài)性與HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌的化療敏感性的關(guān)系，為未來臨床開發(fā)化療方案時提供了一定的新思路。但本研究樣本量較少，且樣本分布單一，結(jié)果可能存在一定的偏移，需要在今后的研究中進一步加以完善。