血清miR-21、miR-155與炎癥因子水平在肺癌患者圍手術期感染中的變化及其臨床意義

馬銀龍 張玉良 杜容宇 陳占軍

肺癌是目前常見的惡性腫瘤之一，在我國發(fā)病率和死亡率均居高不下[1]。手術治療是目前肺癌患者的首選，但是由于手術復雜、時間長、切口較長等原因，肺部、傷口容易產(chǎn)生感染等并發(fā)癥，加重患者的病情，是患者術后死亡的主要原因之一[2-3]。炎癥因子在患者術后感染后出現(xiàn)顯著上升等情況，常用于臨床感染檢測的指標包括C-反應蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)和白細胞介素-6(IL-6)等[4-5]。miR-21和miR-155屬于微小RNA(miRNAs)，是潛在的致癌miRNA，在肺癌患者中出現(xiàn)表達上調(diào)，與預后相關[6]。本文探討圍手術期感染的肺癌患者血清miR-21、miR-155與炎癥因子水平變化及其臨床價值，旨在為今后臨床控制和預防術后感染提供思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年9月至2020年9月本院收治的肺癌患者94例，年齡18～69歲，平均(57.32 ±7.64)歲。納入標準：①符合《NCCN腫瘤學臨床實踐指南》[7]中關于肺癌的診斷標準，患者經(jīng)病理檢查確診為肺癌；② 住院行手術治療患者；③ 臨床及隨訪資料完整者；④患者簽署自愿受試同意書，患者及其家屬需簽署知情同意書。排除標準：① 已接受放療、化療及手術治療者；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并其他器官嚴重性病變患者。以《醫(yī)院感染診斷標準》[8]為依據(jù)，將患者分為感染組(n=28)和非感染組(n=66)。

1.2 血清IL-6、CRP、PCT水平檢測

抽取研究對象術前與術后的靜脈血5 mL，離心取上清待檢。血清IL-6水平通過酶聯(lián)免疫法檢測，ELISA試劑盒購自上海酶聯(lián)生物技術有限公司；血清CPR水平通過免疫熒光層析法檢測，試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司；血清CRP水平通過膠乳增強免疫比濁法檢測，相關試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司。以上操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 血清miR-21和miR-155水平檢測

取上述血清樣本，使用TRIzol RNA試劑盒(購自賽默飛世爾科技有限公司)提取總RNA，紫外分光光度計(上海美譜達公司)檢測總RNA 濃度及純度。取2 μg 總 RNA 使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(賽默飛世爾科技有限公司)進行反轉(zhuǎn)錄反應。取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行PCR擴增，擴增條件為95℃ 30 s，60℃ 20 s，72℃ 20 s，循環(huán)40 次。用2-ΔΔCt法計算各組基因的相對表達量。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 2組臨床病理特征比較

感染組與非感染組患者年齡、性別、腫瘤組織分型、腫瘤大小差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。TNM Ⅲ期患者術后感染的概率明顯高于TNM Ⅰ、Ⅱ期患者(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者術后感染概率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，見表 1。

表1 感染組與非感染組臨床病理特征比較/例

2.2 2組患者手術前后血清miR-21、miR-155以及炎癥因子水平變化

手術前2組患者血清miR-21、miR-155以及炎癥因子水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，手術后感染組血清miR-21、miR-155以及炎癥因子明顯高于未感染組患者(P<0.05)，見表2。

表2 2組患者手術前后血清miR-21、miR-155以及炎癥因子水平變化

2.3 影響肺癌患者圍手術期感染的多因素logistic分析

多因素logistic 回歸分析顯示，血清PCT、IL-6、CRP、miR-22、miR-155水平上升為影響肺癌患者圍手術期感染的獨立危險因素(P<0.05)，見表3。

表3 肺癌患者圍手術期感染的多因素logistic分析

2.4 相關性分析

根據(jù)Spearman相關性分析法得出，血清miR-22、miR-155與IL-6、CRP、PCT水平存在相關性，呈正相關，見表4。

表4 Spearman相關性分析

3 討論

肺癌近年來發(fā)病率和病死率均呈上升趨勢，主要與經(jīng)濟發(fā)展加快導致空氣污染加重以及人口老齡化有關[9]。肺葉切除術是臨床上用于治療肺癌的方法，可以有效降低肺癌的死亡率，但是由于肺葉切除術的手術時間長，術后容易出現(xiàn)感染[10-11]。肺癌圍手術期感染是肺癌患者術后死亡的主要因素，病死率超過了30%[12]。

臨床上主要用于診斷患者感染的臨床指標如PCT、CRP、IL-6等炎性分子，PCT可作為檢測細菌感染的臨床指標[13]；IL-6與機體免疫應答有關[14]；CRP可作為檢測機體炎癥反應指標[15]。當患者出現(xiàn)感染時，患者發(fā)生炎癥反應后炎性分子水平上升[16]。本研究發(fā)現(xiàn)手術后感染組血清炎癥因子水平明顯高于未感染組患者，患者發(fā)生術后感染后炎癥因子水平上升，說明機體發(fā)生了炎癥反應。此外，血清PCT、IL-6、CRP水平上升可作為影響肺癌患者圍手術期感染的獨立危險因素，這與目前的研究一致，但由于血清PCT、IL-6、CRP水平檢測敏感性低，需要尋找更為合適的臨床指標。

miRNA作為非編碼的微小RNA，可穩(wěn)定存在于外周血中，不易受外界影響[17]。miR-21以及miR-155與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，在多種腫瘤類型患者中出現(xiàn)異常表達[18]。miR-21以及miR-155表達水平還與肺癌患者的預后相關，miR-21以及miR-155表達水平越高，患者的生存時間越短，而患者的預后與術后感染密切相關[19-20]。本研究發(fā)現(xiàn)手術后感染組血清miR-21、miR-155水平明顯高于未感染組患者，說明血清miR-21、miR-155水平與肺癌患者發(fā)生術后感染有關，這與預測的結(jié)果一致。且多因素logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，血清miR-21、miR-155水平上升為影響肺癌患者圍手術期感染的獨立危險因素，說明血清miR-21、miR-155水平有成為預測肺癌患者發(fā)生圍手術期感染指標的潛力。

綜上所述，本研究通過RT-PCR法證實了外周血miR-21和miR-155水平在肺癌圍手術期感染患者出現(xiàn)表達上調(diào)，對今后進一步研究肺癌圍手術期感染與miR-21和miR-155水平的關系提供了一定的數(shù)據(jù)支持。但是本研究由于單一中心、病例少等缺點，研究結(jié)果可能出現(xiàn)了一定的偏差，這需要在未來的研究中加以完善。