不同種類小肽對枯草芽孢桿菌生長的影響

李桂霞，韓玉樂，談春季

（石家莊飛龍飼料有限公司技術中心，河北 石家莊 050000）

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基，又稱為普通培養(yǎng)基。牛肉膏、 蛋白胨為微生物的生長、 擴繁提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等。 盡管蛋白胨種類很多，有動物源蛋白胨，植物源蛋白胨，酵母蛋白胨等，因其價格較高，常用于醫(yī)藥級的微生物培養(yǎng)。

本試驗，在飼料級的微生物培養(yǎng)時，選擇小肽類原料，替代價格高昂的蛋白胨、牛肉膏，從而降低微生態(tài)發(fā)酵的原料成本。

1 試驗設計

在保持培養(yǎng)條件pH、溫度和培養(yǎng)時間不變情況下，通過用植物蛋白肽（大豆酶解肽）和動物蛋白肽（魚溶漿蛋白肽和羊毛肽）代替牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中蛋白胨和牛肉膏， 觀測對枯草芽孢桿菌生長數(shù)量的影響，以探索不同碳源、氮源對枯草芽孢桿菌生長的影響， 以便優(yōu)化工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基。

本試驗以枯草芽孢桿菌（編號:FLB-Y01，石家莊飛龍飼料提供）為試驗菌株，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為對照組，分別以大豆酶解肽、魚溶漿蛋白肽和羊毛肽等量代替牛肉膏蛋白胨為試驗組一、試驗組二、試驗組三和試驗組四，保持初始pH、溫度和培養(yǎng)時間一致，通過對枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)，測定有效活菌數(shù)，判斷和比較枯草芽孢桿菌對不同原料利用的情況。

2 儀器設備及試劑

培養(yǎng)皿： 直徑90 毫米； 錐形瓶：150 毫升、500 毫升；pH 計。

高壓蒸汽滅菌器：121℃；電子天平：精確至0.01 克； 恒溫培養(yǎng)搖床：37℃±2℃、155 轉/分鐘；恒溫培養(yǎng)箱：37℃±2℃； 渦旋振蕩器； 生物顯微鏡。

蛋白胨；牛肉膏：生化試劑；氯化鈉：分析純。

3 材料與方法

3.1 試驗培養(yǎng)基

按照不同試驗組配方稱量各組分于燒杯中，加入所需水量，溫熱溶解。 用0.1 摩爾/升的氫氧化鈉或鹽酸調(diào)整液體培養(yǎng)基，校正pH 值為7.2～7.3。 將制備好的液體培養(yǎng)基，分裝于500 毫升三角瓶中，121℃滅菌20 分鐘。

3.2 操作步驟

3.2.1 初始菌液

為保證接種量的一致性， 首先用滅菌的營養(yǎng)瓊脂液體培養(yǎng)基（對照組培養(yǎng)基）進行初步接種培養(yǎng)，在37℃，155 轉/分鐘，恒溫培養(yǎng)24 小時后，作為原始菌種，并對原始菌種進行有效活菌數(shù)的測定（活菌數(shù)915 萬），計數(shù)及鏡檢。 放置4℃冰箱備用。

3.2.2 接種培養(yǎng)

將原始的枯草芽孢桿菌菌種，按照1%接種量， 分別接種于無菌的五組液體培養(yǎng)基中，在37℃，155 轉/分鐘的條件下， 于恒溫培養(yǎng)搖床上培養(yǎng)36±2 小時。 取出，備檢。

3.2.3 計數(shù)培養(yǎng)

將上述五組培養(yǎng)好的液體菌種， 用梯度稀釋法，選取三個合適的連續(xù)稀釋度，在營養(yǎng)瓊脂平板上進行涂布培養(yǎng)，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)36±2 小時，取出，計數(shù)，鏡檢。 記錄檢測結果。

4 試驗結果

4.1 原料理化分析(見表2）

表2 理化分析值（%）

4.2 活菌數(shù)計數(shù)（見表3）

表3 不同試驗組活菌數(shù)和pH 變化

5 結果與討論

對培養(yǎng)液中有效活菌數(shù)的測定結果顯示，與對照組相比，試驗一組有效活菌數(shù)最多，說明大豆酶解蛋白對菌體的生長和繁殖有促進作用；而魚溶槳蛋白肽和羊毛肽對于菌體的生長和繁殖沒有促進作用。

分析原因： 大豆酶解肽中含有充足的氮源和碳源，來滿足菌體的生長繁殖；而魚溶槳蛋白肽和羊毛肽中碳源不足，培養(yǎng)基中也沒有補充碳源，由此造成的活菌生長繁殖受限。 這有待于進一步的試驗來驗證。

本試驗結果顯示， 在工業(yè)化生產(chǎn)枯草芽孢菌液時，可以選擇價格更低的大豆酶解蛋白來替代價格高昂的牛肉膏和蛋白胨。 不僅可以降低成本，還可以提高活菌數(shù)75%以上。