不對稱二甲基精氨酸、膜聯蛋白Ⅴ、生存蛋白在子癇前期患者血清及胎盤組織中的水平及意義

張亞偉, 邢 宇, 劉麗恒, 王 欣

(首都醫科大學附屬北京婦產醫院/北京婦幼保健院 產科, 北京, 100026)

子癇前期是妊娠期特有的一種產科疾病，指平素血壓正常的婦女妊娠20周以后出現血壓突然升高、尿蛋白、水腫，伴有頭痛、惡心、眼花、腹部不適等臨床表現，該病可損害患者腎臟、肝臟、中樞神經系統及血液系統等多器官，嚴重者可出現抽搐、昏迷甚至死亡，對母嬰健康有很大危害。臨床上將子癇前期根據發生時間分為早發型和晚發型子癇前期，根據臨床癥狀表現程度分為輕度和重度子癇前期，早發型患者多為重度子癇前期患者[1]。不對稱二甲基精氨酸(ADMA)是一種內源性一氧化氮合酶的競爭性抑制劑，能夠抑制一氧化氮的合成，使一氧化氮/一氧化氮合酶通路發生障礙，一氧化氮合成減少，導致血管內皮功能障礙[2]。磷脂結合蛋白膜聯蛋白V(AnnexinⅤ)通過細胞外翻的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合形成二聚體，參與抗凝、抗炎、抗免疫和促使細胞凋亡等[3]。生存蛋白(Survivin)是一種凋亡抑制蛋白家族的新成員，常表達于腫瘤和胚胎組織中，與腫瘤細胞的分化增殖及浸潤轉移關系密切[4]。本研究觀察ADMA、AnnexinⅤ、Survivin在子癇前期患者血清及胎盤組織中的水平，進而定量分析其對子癇前期的影響和作用，為該病的臨床診治提供新參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月—2019年2月產科住院的子癇前期患者60例為子癇前期組，平均年齡(31.3±1.3)歲，平均孕周(36.3±2.4)周，早發型24例、晚發型36例，輕度34例、重度26例。另外選取同期于產科住院的健康產婦60例為健康產婦組，平均年齡(30.9±1.3)歲，平均孕周(36.7±2.6)周。2組平均年齡、平均孕周等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05), 具有可比性。所有產婦及家屬均對本研究知情，并簽署知情通知書，本研究獲得醫院倫理委員會批準。

納入標準: 子癇前期患者符合《妊娠期高血壓疾病診治指南(2020)》[5]中對子癇前期的診斷標準及分類標準，其中子癇前期發生時間早于34孕周為早發型，發生時間≥34孕周為晚發型；患者收縮壓、舒張壓≥140、90 mmHg, 尿蛋白≥0.3 g/24 h或隨機尿蛋白(+)診斷為輕度子癇前期; 患者收縮壓、舒張壓≥160、110 mmHg, 尿蛋白≥2.0 g/24 h或隨機尿蛋白≥()或有其他臟器損害指標異常診斷為重度子癇前期; 所有孕婦均為單胎妊娠，分娩方式為剖宮產。

排除標準: 有其他妊娠合并癥及并發癥者; 慢性高血壓產婦; 心臟病產婦; 嗜好煙酒產婦; 糖尿病產婦; 肝、腎功能不全產婦; 存在精神、語言障礙的產婦。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集: 抽取所有產婦清晨空腹靜脈血5 mL, 以離心半徑為10 cm、3 000轉/min離心處理15 min, 分離上層血清, -80 ℃保存待用; 胎盤組織于剖宮產術胎盤分娩出后5 min之內采集，在胎盤母體面近臍帶處避開鈣化、梗死及血管密集區域，取1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm大小的胎盤組織，經生理鹽水沖洗滅菌后用紗布吸干，之后在低溫環境下置于有柄研磨器中均勻研磨，轉移至2.5 mL離心管中。在4 ℃低速冷凍離心機以3 000轉/min離心處理20 min, 收集上清液, -70 ℃保存待用。

1.2.2 血清及胎盤組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達水平檢測: 采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定血清及胎盤組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達水平。將含有ADMA、AnnexinⅤ、Survivin的血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗滌1次; 與辣根過氧化物酶標記的羊抗人抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，然后將多余抗體洗除，加入底物四甲基聯苯胺顯色; 四甲基聯苯胺在辣根過氧化物酶催化下轉化成藍色，并在酸的作用下最終轉化成黃色。顏色的深淺與血清及胎盤組織中的ADMA、AnnexinⅤ、Survivin水平呈正相關。450 nm波長下用酶標儀測定光密度值，通過標準曲線計算血清及胎盤組織中ADMA、AnnexinⅤ、Survivin濃度。

1.3 統計學處理

采用SPSS 20.0統計軟件進行分析處理。計量資料采用均數±標準差描述, 2組比較采用獨立樣本t檢驗，相關性分析采用Pearson相關性分析,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 2組產婦血清及胎盤組織中的ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達水平比較

子癇前期組產婦血清及胎盤組織中的ADMA表達水平高于健康產婦組，AnnexinⅤ、Survivin表達水平低于健康產婦組，差異有統計學意義(P<0.05), 見表1。

表1 2組產婦血清及胎盤組織中的ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達水平比較

2.2 早發型與晚發型子癇前期患者血清及胎盤組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達水平比較

早發型子癇前期患者血清及胎盤組織ADMA表達水平高于晚發型子癇前期患者, AnnexinⅤ、Survivin表達水平低于晚發型子癇前期患者，差異有統計學意義(P<0.05), 見表2。

表2 早發型與晚發型子癇前期患者血清及胎盤組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達水平比較

2.3 輕度與重度子癇前期患者血清及胎盤組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達水平比較

輕度子癇前期患者血清及胎盤組織ADMA表達水平低于重度子癇前期患者，AnnexinⅤ、Survivin表達水平高于重度子癇前期患者，差異有統計學意義(P<0.05), 見表3。

表3 輕度與重度子癇前期患者血清及胎盤組織ADMA、AnnexinⅤ、Survivin表達水平比較

2.4 ADMA、AnnexinⅤ、Survivin之間相關性分析

ADMA、AnnexinⅤ、Survivin之間進行Pearson相關性分析, ADMA與AnnexinⅤ、Survivin呈負相關(r=-0.481、-0.683,P=0.001、0.001), AnnexinⅤ與Survivin呈正相關(r=0.495,P=0.001), 見圖1。

3 討 論

子癇前期是妊娠期的一種嚴重并發癥，是導致妊娠期婦女與圍產兒發病和死亡的重要原因之一，且近年來發病率有明顯上升趨勢[6]。子癇前期可在不同程度上影響母嬰健康及妊娠結局。產科及圍產醫學領域一直將子癇前期的病因和發病機制作為熱點研究[7-8], 結果表明，該疾病可能起源于胎盤血管結構異常、血管內皮細胞受損及炎癥免疫過度激活，但目前尚未完全定論。

ADMA是甲基化蛋白質精氨酸在蛋白質精氨酸甲基轉移酶作用下產生的一種蛋白代謝產物，是一種內源性一氧化氮合酶抑制劑，對一氧化氮合酶的活性具有抑制作用，主要通過影響一氧化氮的合成起到調節血壓的作用。ADMA的含量高低主要受降解酶二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)的調控[9]。已有研究[10]證實, ADMA氧化應激反應這一病理生理改變可引起DDHA的表達減少和(或)活性減弱，導致ADMA濃度增加，從而促進內皮功能失調，增加血管阻力，最終導致高血壓的出現，并參與子癇前期的發生。研究[11-12]顯示，子癇前期患者在早期妊娠時血清ADMA水平正常，子癇前期發生期其水平升高，分娩后再次下降。DDAH降低引起全身性血管內皮細胞功能障礙，部分胎盤血管內皮細胞氧化導致胎盤血管內皮損傷。血管形態發生改變，收縮增強，影響胎盤血流灌注量，嚴重威脅胎兒的正常發育。本研究對子癇前期患者血清及胎盤組織中ADMA水平進行評價，結果顯示, ADMA在子癇前期患者血清及胎盤組織中高表達，且隨著病情加重其表達水平增高，與相關研究[13-14]顯示的ADMA參與子癇前期的發生結果相符。

AnnexinⅤ是膜聯蛋白家族成員之一，廣泛分布于人體內，在細胞及膜表面參與運轉鈣依賴調節蛋白質的活動。AnnexinⅤ在細胞外有鈣離子的情況下與磷酯酰絲氨酸結合，進而起到抗凝、抗血栓形成、抗炎、抗免疫的作用。AnnexinⅤ在妊娠期間高表達于合體細胞滋養層，主要由胎盤滋養細胞分泌[15]。研究[16-17]表明，由于AnnexinⅤ抗凝的活性參與子癇前期的病理機制，子癇前期患者凝血和纖溶系統失衡導致胎盤絨毛間高凝狀態，形成胎盤微血管血栓，繼而導致胎盤組織缺血、缺氧，限制胎兒生長，參與子癇前期的發生。本研究對子癇前期患者血清及胎盤組織中AnnexinⅤ水平進行評價，結果顯示, AnnexinⅤ在子癇前期患者血清及胎盤組織者中低表達，且隨著病情加重其水平降低。

Survivin是一種凋亡抑制因子。研究[18]認為，Survivin可促進胎盤滋養細胞的存活和增殖，使滋養細胞適度侵襲，對胚胎著床和胎盤發育至關重要，并維持正常妊娠。研究[19]發現，Survivin的表達水平在未使用降壓藥的子癇前期患者中顯著降低，這種改變誘導的細胞過度凋亡可使胎盤發育受限，引起妊娠并發癥，因此Survivin參與子癇前期的發生，影響妊娠結局。本研究對子癇前期患者血清及胎盤組織中Survivin水平進行評價，結果顯示, Survivin在子癇前期患者血清及胎盤組織者中呈低表達，且隨著病情加重而降低，與曾玲娟等[20]研究認為的Survivin參與子癇前期的發生結果相符。

另外本研究還對ADMA、AnnexinⅤ、Survivin之間的相關性進行分析，結果顯示, ADMA與AnnexinⅤ、Survivin均呈負相關, AnnexinⅤ與Survivin呈正相關，此結果說明ADMA、AnnexinⅤ、Survivin存在一定相關性，且共同參與子癇前期的發生、發展。

綜上所述, ADMA、AnnexinⅤ、Survivin在子癇前期患者血清及胎盤組織中呈特異性表達，且與病情輕重關系密切，為臨床上子癇前期的診治提供了新的理論參考。