老年T2DM病人外周血CD8+CD25+調節性T細胞比率變化及其與胰島素抵抗的關系研究

張小蘭 陳銳

糖尿病是一種常見的以慢性血糖升高為主要表現的代謝性疾病，發病率較高且后期并發癥較多，已嚴重威脅人類生命健康。調節性T細胞(regulatory T cells，Treg)是調節外周免疫耐受的重要介質，具有免疫抑制效應，包括CD4+CD25+Treg、CD8+CD25+Treg等。已有較多研究證實[1-2]，T2DM病人外周血CD4+CD25+Treg比率下降，但CD8+CD25+Treg比率變化在T2DM病人中的研究較少，且T2DM病人外周血CD8+CD25+Treg比率變化與胰島素抵抗的關系目前尚不明確。鑒于此，本研究旨在探討老年T2DM病人外周血CD8+CD25+Treg比率變化與胰島素抵抗的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2019年4月至2020年9月本院收治的42例老年T2DM病人及40例在本院進行體檢的健康者，分別納入研究組和對照組。本研究經本院醫學倫理委員會批準(批號：KY20190130)。納入標準：研究組均符合《中國2型糖尿病防治指南(2017年版)》[3]中T2DM的診斷標準；對照組均為體檢健康者；年齡>60歲；參與者對本研究知情同意。排除標準：嚴重糖代謝紊亂、心腦血管疾??；惡性腫瘤；心、肝、腎、免疫系統或血液系統等嚴重疾??；風濕系統疾病、1型糖尿病等影響免疫功能的疾??；T2DM急性并發癥。

1.2 檢測方法 生化指標檢測：采集所有研究對象空腹肘靜脈血5 mL,主要檢測TC、TG、HDL-C、LDL-C、FPG、空腹胰島素(FINS)、餐后2 h血糖(2hPG)、HbA1c，并計算胰島素抵抗指數(HOMA-IR)，均于納入研究后次日進行檢測，其中FPG、2hPG均采用葡萄糖氧化酶法測定；FINS采用放射性同位素免疫標記法測定；HbA1c采用親和層析法測定；HOMA-IR=FPG×FINS/22.5。CD8+CD25+Treg比率檢測：分別采集2組研究對象空腹外周靜脈血5 mL，2500 r/min離心10 min并分離血清，采用流式細胞儀(型號：FACS Calibure，美國Beckman公司)檢測CD8+CD25+Treg比率。

1.3 觀察指標 (1)對比2組臨床資料及生化指標；(2)對比2組血糖水平指標及HOMA-IR；(3)對比2組免疫學指標；(4)分析老年T2DM病人CD8+CD25+Treg比率變化與胰島素抵抗的關系。

2 結果

2.1 臨床資料及生化指標的比較 2組性別、年齡、TG、HDL-C比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，研究組BMI、TC、LDL-C、FPG、2hPG、HbA1c及FINS水平均高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 2組研究對象臨床資料及生化指標對比

2.2 CD8+CD25+Treg比率及HOMA-IR的比較 研究組HOMA-IR高于對照組(P<0.01)，CD8+CD25+Treg比率低于對照組(P<0.01)，見表2。

表2 2組CD8+CD25+Treg比率及HOMA-IR比較

2.3 老年T2DM病人CD8+CD25+Treg比率與各指標的關系 CD8+CD25+Treg比率與HOMA-IR、FINS均呈負相關(r=-0.506、-0.382，P<0.05)，與HbA1c、2hPG、FPG、LDL-C及TC無相關性(r=-0.205、0.284、0.325、-0.218、0.214，P>0.05)。

3 討論

T2DM是一種以胰島素抵抗和胰島素分泌受損為主要特征的慢性代謝性疾病，慢性高血糖、循環細胞因子水平升高等代謝性炎性反應致使免疫發生紊亂，嚴重影響病人的生命健康[4]。相關研究表明，胰島素抵抗的發生涉及胰島素與受體結合發揮作用的多個環節，其中Treg在其過程中具有重要意義[5]。探討老年T2DM病人CD8+CD25+Treg比率變化與胰島素抵抗的關系具有十分重要的臨床意義。

本研究結果顯示，老年T2DM病人BMI、TC、LDL-C、FPG、2hPG、HbA1c及FINS水平均高于健康者，與Palumbo等[6]研究結果相近。Treg細胞是一類具有較強免疫抑制活性的調節性細胞，可通過產生炎性因子發揮抗炎作用，是機體免疫和代謝反應的重要因素，可通過細胞-細胞間接觸依賴性方式或通過分泌細胞因子發揮特異性免疫抑制功能。本研究結果表明，老年T2DM病人HOMA-IR異常偏高，CD8+CD25+Treg比率異常偏低。朱靜和等[7]的研究也表明，新診斷的T2DM病人外周血CD8+CD25+FoxP3+Treg比率降低，推測其可能與T2DM的發病密切相關。CD8+CD25+Treg比率降低可使對單核細胞或巨噬細胞免疫抑制作用減弱，可引發炎性反應狀態，致使糖尿病的發生、發展。動物實驗研究也發現，胰島B細胞功能缺陷、Treg比率降低可促進糖尿病進展。Treg及其分泌的細胞因子可調節脂肪細胞表面轉運載體-4的表達及對葡萄糖的代謝，通過細胞-細胞間接觸依賴性方式或通過分泌細胞因子，發揮非特異性免疫抑制的功能，導致胰島素抵抗的發生[8]。既往多認為T2DM胰島素抵抗與先天性免疫功能有關，即巨噬細胞通過分泌促炎細胞因子誘導胰島素抵抗的發生[9-10]，但何凌等[11]的研究表明，適應性免疫功能在T2DM的發生、發展中也具有重要作用，T2DM主要與脂肪組織中胰島素抵抗和低度炎癥狀態有關。本研究發現， CD8+CD25+Treg比率與HOMA-IR、FINS存在一定的相關性。T2DM除胰島素抵抗外還與胰島素分泌缺陷有關，在T2DM病人的胰島細胞中存在炎癥因子表達、免疫細胞浸潤，浸潤胰島的免疫細胞所產生的炎性因子會破壞胰島細胞[12]。

綜上所述，相比健康者，老年T2DM病人CD8+CD25+Treg比率異常偏低，其可能與老年T2DM病人胰島素抵抗有關，但具體機制還有待進一步研究。