慢性冷暴露對小鼠肝臟抗氧化功能的影響

劉媛媛 薛念宇 張博熙 李士澤 呂紅明

(黑龍江八一農墾大學動物科技學院，大慶163319)

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗設計

體內慢性冷暴露模型建立：將12只3周齡C57BL/6雄性小鼠(購自中國人民解放軍軍事醫學科學院試驗動物中心)，體重(22±1) g，隨機分為2組(對照組和冷暴露組)，每組6只。先將小鼠置于人工智能氣候室中進行為期7 d的適應性飼養，環境溫度設定為(28.0±0.5) ℃，相對濕度為(40±5)%，自由采食、飲水。日光燈照明，明暗周期比為1∶1(開燈08：00，關燈20：00)。然后將冷暴露組小鼠每日隨機置于4 ℃環境中3 h，連續4周，冷暴露結束后將小鼠同時安樂死，并收集其血液和肝臟。將血液樣本靜置在4 ℃冰箱中12 h，然后3 500 r/min離心20 min，取上清液至1.5 mL離心管中保存。將肝臟放進1.5 mL離心管中，做好標記保存在-80 ℃冰箱。試驗涉及的試驗動物操作符合黑龍江八一農墾大學動物倫理委員會標準(20180328002)。

體外冷暴露模型建立：將小鼠肝細胞系AML12細胞(購自美國ATCC公司)隨機分為4組(對照組、冷暴露1 h組、冷暴露3 h組、冷暴露6 h組)，先在37 ℃培養箱中培養24 h，然后將冷暴露組細胞置于32 ℃培養箱中分別亞低溫冷刺激0、12、24、36 h，冷刺激結束后將細胞刮取下來進行后續試驗。

1.1.2 主要試劑

Trx-1(1∶1 000，A0053)抗體購自ABclonal公司(中國)；TXNIP(1∶1 000，A0053)抗體購自ABclonal公司(中國)；辣根過氧化物酶(HRP)山羊抗鼠免疫球蛋白G(IgG)(1∶10 000，#SA00001-1，Proteintech，美國)；HRP山羊抗兔IgG(1∶10 000，#SA00001-2，Proteintech，美國)。DMEM培養基、胰蛋白酶由賽默飛世爾生物化學制品(美國)有限公司生產；Solarbio血清由北京Solarbio & Technology公司生產；磷酸鹽緩沖液(PBS)由北京中杉金橋生物技術有限公司生產。酶聯免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒由南京建成生物工程研究所生產。……