大棗葉中減肥活性成分的提取工藝探究

劉夢珂，劉世軍，梁玉杰，易前名，歐升源，高毅權，孫歡歡

(陜西中醫藥大學 陜西省中藥資源產業化協同創新中心 秦藥特色資源研究開發國家重點實驗室(培育)陜西省創新藥物研究中心，陜西 咸陽 712083)

棗葉為鼠李科植物棗(ZiziphusjujubaMill.)的干燥葉。大棗全國各地廣為栽培，且栽培品種甚多[1]。原產于我國，現亞洲、歐洲和美洲也常有栽培。具有清熱解毒的功效。臨床常用于小兒發熱，瘡癤，熱痱，爛腳，燙火傷[2]。《名醫別錄》載：“棗葉，散服使人瘦，久即嘔吐，揩熱痱瘡良”。據文獻報道，大棗含有三萜類、皂苷類、生物堿類、黃酮類、糖苷類、核苷類、糖類、蛋白質、氨基酸類、維生素類、酰胺類、有機酸類、甾體類等成分[3]。現代藥理研究表明，棗葉具有保肝[4]、抑制肥胖[5,6]、降脂[7]、抗氧化[8]等作用。特別是有人發現大棗葉70%乙醇提取物具有減肥作用[5, 6]，這與《名醫別錄》中的“棗葉，散服使人瘦”相一致。本實驗對棗葉的減肥活性成分的提取工藝進行研究，為其后續研究提供基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

干燥大棗葉(陜西省合陽縣)；無水乙醇(安徽安特食品股份有限公司)；蒸餾水。

1.2 儀器與設備

旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠)；電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)；電熱鼓風干燥箱(上海科恒實業發展有限公司)；循環水式多用真空泵(河南省予華儀器有限公司)；精密天平(深圳市賽德力檢測設備有限公司)；圓底燒瓶、冷凝管、量筒、燒杯、布氏漏斗、循環式真空泵、濾紙。

1.3 試驗方法

1.3.1 單因素實驗 分別以提取時間、提取次數及料液比進行單因素實驗，以棗葉浸膏得率作為評價指標。

1.3.1.1 提取時間的確定

取粉碎棗葉50.0 g平均分為五份，用70%的乙醇提取1次，料液比為1:6，分別提取0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h，合并濾液，進行抽濾定容，按1∶10的比例取濾液于干燥至恒重并稱定質量的蒸發皿中，水浴蒸發至干，105℃條件下干燥3 h，置于干燥器中冷卻30min，迅速稱重，以其浸膏得率作為判斷標準。、；浸膏得率(%)=[(m2-m0)n/m1100%

式中：m0蒸發皿重量(g)；m1供試品重量(g)；m2干燥后蒸發皿+樣品重量(g)；n=10(定容后濾液提取比例)

1.3.1.2 提取次數的確定

取粉碎棗葉50.0 g平均分為五份，用70%的乙醇提取0.5 h，料液比為1:6，分別提取1次、2次、3次、4次、5次，合并濾液，按照1.3.1.1項下合并濾液后步驟處理。

1.3.1.3 料液比的確定

取粉碎棗葉50.0 g平均分為五份，用70%的乙醇提取0.5 h，提取1次，料液比分別為1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14，合并濾液，按照1.3.1.1項下合并濾液后步驟處理。

1.3.2 正交試驗設計 根據單因素實驗結果設計正交試驗。分別取干燥粉碎棗葉10.0 g(9份)，進行正交試驗設計[9]，以提取時間(A)、提取次數(B)、料液比(C)影響因素進行考察，實驗因素水平見表1，按正交試驗表進行實驗。

表1 因素水平

1.3.3 提取路線

干棗葉→揉碎→醇提→抽濾→定容→濃縮→烘干。

1.3.4 浸膏的提取方法 選取干棗葉，去除雜質，揉碎。稱取10.0 g后，置于圓底燒瓶中，根據正交設計方法加70%乙醇回流提取，合并濾液，按照1.3.1.1項下合并濾液后步驟處理。

2 結果與討論

2.1 單因素實驗

2.1.1 提取時間對浸膏得率的影響 由圖1可知，浸膏得率隨著提取時間的增加，出現上升趨勢。即棗葉提取時間從0.5 h增加到1.5 h時，浸膏得率從11.13%上升到17.44%；提取時間增加到2 h時，浸膏得率無明顯升高；當提取時間增加到2.5 h時，圖像逐漸趨于平緩，浸膏得率不再明顯增加。從圖1中數據可知，棗葉提取時間為2.5 h時，浸膏得率最大，與提取時間為2h的浸膏得率無明顯差異。因此，棗葉最佳的提取時間為2 h。

圖1 提取時間對浸膏得率的影響

2.1.2 提取次數對浸膏得率的影響 由圖2可知，浸膏得率隨著提取次數的增加，出現上升趨勢。即當棗葉提取次數從1次增加到4次時，浸膏得率從12.46%上升到 28.37%；提取次數上升到5次時，圖像逐漸趨于平緩，浸膏得率無明顯升高。從圖中數據可知，提取次數為5次時，浸膏得率最大，與提取次數為4次的浸膏得率無明顯差異。因此，棗葉最佳提取次數為4次。

圖2 提取次數對浸膏得率的影響

2.1.3 料液比對浸膏得率的影響 由圖3可知，浸膏得率隨著料液比的增加，出現上升趨勢。即當料液比從1∶6增加到1∶10時，浸膏得率從14.85%上升到 21.61%；料液比上升到1∶14時，圖像逐漸趨于平緩，浸膏得率無明顯升高。從圖中數據可知，料液比為1∶14時，浸膏得率最大，與料液比為1∶10的浸膏得率無明顯差異。因此，棗葉最佳的料液比為1∶10。

圖3 料液比對浸膏得率的影響

2.2 正交試驗結果

由表2和表3數據分析可以看出，對浸膏得率指標影響最大為因素B。以浸膏得率為考察依據來看，可以看出各因素影響得率的主次順序為B>A>C。因素B的極差最大，是影響浸膏得率的主要因素。

表2 正交試驗結果分析

表3 方差分析結果

經方差分析，因素A、B對實驗結果有顯著影響，因素C影響不顯著。結合表2的直觀分析，優選工藝為A3B3C3，但考慮到生產中實際情況，節約成本，確定其優選工藝為A3B3C1，即用1:8的料液比先后提取4次，每次2 h。按此提取條件做三批驗證實驗，結果如表4所示，與正交試驗結果基本一致，說明此提取工藝穩定可行。

表4 驗證實驗結果

3 討論

3.1 實驗結果分析

本實驗通過正交試驗優選提取時間為2 h，回流次數為4次，料液比為1:8作為大棗葉的最佳提取方法，這為大棗葉減肥活性成分提取工藝的參數確定提供了實驗依據，為棗葉相關產品的開發奠定了一定的基礎。

3.2 實驗意義

本項目研究優選大棗葉中減肥活性成分的提取工藝，使大棗葉資源得到最大化利用，減緩資源浪費和環境污染。另外，選用乙醇提取棗葉中減肥成分，保證了減肥產品的無害性，為綠色健康減肥產品的研發提供依據。

4 結論

本文探究了大棗葉中減肥活性成分的最佳提取工藝，在單因素實驗的基礎上利用正交試驗進行分析。分析結果表明提取次數為4次，提取時間為2 h， 料液比為1:8為最佳提取工藝。 采用最佳提取條件進行驗證實驗，實際測得棗葉的浸膏得率與預測值誤差相對較小，結果合理。本實驗可以為開發大棗葉系列減肥產品奠定一定的基礎。