MDM2在乳腺癌組織中表達及與MVD、VEGF相關性研究*

于秀冰 丁保鋒 劉全成

黑龍江省佳木斯市中心醫院 1 病理科 2 腫瘤外二科 3 麻醉科 154002

乳腺癌是發生于女性的常見惡性腫瘤，該病常見的癥狀是乳腺腫塊，其次為腋下淋巴結腫大，嚴重影響女性的身心健康[1]。但是有些乳腺癌患者發現腫塊時已有遠處的轉移，失去最佳治療時間，故如何提高乳腺癌的診斷水平，改進乳腺癌的治療方法成為新的研究熱點[2]。鼠雙微體基因2(MDM2)是功能及其復雜的一種蛋白，對腫瘤的發生、發展、腫瘤細胞的侵襲和遷移有影響，其過表達增加腫瘤的侵襲[3]。同時有研究報道[4]，血管內皮生長因子(VEGF)在腫瘤的發生、發展中起著重要的作用，可通過多種途徑影響著腫瘤的侵襲和轉移；微血管密度(MVD)直接反映癌組織中新生微淋巴管和微血管的活躍程度。鑒于此，本文為分析MDM2在乳腺癌組織中表達及與MVD、VEGF相關性，選取60例乳腺癌患者進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2020年4月—2021年4月我院收治的60例乳腺癌患者作為研究對象?；颊吣挲g35～56歲，平均年齡(45.15±10.05)歲；腫瘤直徑1.5～4.5cm，平均腫瘤直徑(3.03±1.02)cm；TNM分期：Ⅰ期2例、Ⅱ期19例、Ⅲ期28例、Ⅳ期11例；組織學類型：黏液癌2例、導管內癌4例、浸潤性小葉癌4例、乳頭狀腺癌6例、浸潤性導管癌44例。納入標準：(1)符合行手術治療指征，且術后蘇木精—伊紅(HE)染色法確診為乳腺癌患者；(2)原發且術前未行抗腫瘤治療者；(3)知情本次研究者。排除標準：(1)合并其他腫瘤者；(2)合并其他嚴重疾病者；(3)術前經放療、化療治療者；(4)意識、精神、聽覺、視力障礙者。本次研究獲得我院倫理委員會的認證。

1.2 試劑及藥品 鼠抗人MDM2單克隆抗體、兔抗人VEGF單克隆抗體均購于北京奧博星生物技術有限責任公司。SP試劑盒、二氨基聯苯胺(DBA)顯色試劑盒均購于北京杰輝博高生物技術有限公司。

1.3 方法 (1)樣本采集：取手術切除乳腺癌組織為觀察組，取癌旁正常組織為對照組(切取自距離腫瘤組織≥5cm處，病理檢查證實為正常肺組織)。(2)樣本制作：選取目標部位，用福爾馬林溶液(濃度為100mmol/L)固定24h后修整組織塊，然后依次放入AF液12h、70%酒精和80%酒精各6h、95%酒精Ⅰ12h、95%酒精Ⅱ1h、100%酒精Ⅰ和100%酒精Ⅱ各1.5h，松節油Ⅰ、松節油Ⅱ、浸蠟Ⅰ各15min，浸蠟Ⅱ3.5h，包埋處理備用。(3)免疫組化(SP法)：①切片經二甲苯脫蠟(15min×3次)， 梯度酒精(100%Ⅰ、100%Ⅱ、95%Ⅰ、95%Ⅱ各5min)，PBS沖洗5min。②30%H2O2與蒸餾水(1∶10)混合，在20℃下孵育15min，蒸餾水洗3次。③熱修復抗原：把切片放入pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液中加熱至沸騰，間隔5min后再加熱至沸騰。冷卻后PBS(pH 7.2～7.6)洗滌1～2次。④滴加適當比例PBS稀釋的一抗。⑤滴加生物素標記的二抗，在37℃下孵育30min，用PBS沖洗3次。⑥DAB顯色。⑦蘇木精復染1min，用蒸餾水充分洗滌，再用1%鹽酸分化2s，至水，2%氨水5s，至水。脫水(70%酒精、80%酒精、90%酒精各5min，100%Ⅰ酒精、100%Ⅱ酒精各10min)，透明(二甲苯5min×2次)，封片。(4)結果判定[5]：高倍鏡下取5個不同視野各計數100個細胞，MDM2陽性細胞：細胞內出現淡黃至棕褐色顆；MVD陽性細胞：內皮細胞著色棕黃色；VEGF陽性細胞：胞質或胞膜中呈現棕黃色顆粒。

2 結果

2.1 兩組MDM2、MVD、VEGF陽性表達水平比較 觀察組的MDM2陽性率、MVD陽性率、VEGF陽性率明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組MDM2、MVD、VEGF陽性表達水平比較[n(%)]

2.3 乳腺癌組織中MDM2表達量與MVD、VEGF表達量的相關性 經Spearman秩相關檢驗分析發現，乳腺癌組織中MDM2表達量與MVD、VEGF表達量呈正相關性。詳見表2。

表2 乳腺癌組織中MDM2表達量與MVD、VEGF表達量的相關性

3 討論

隨著對乳腺癌的深入研究，臨床研究發現[6]，乳腺癌的發生與年齡、生育情況、激素水平、社會環境因素及遺傳等密切相關，其中遺傳因素是一重要機制，抑癌基因的異常甲基化通過沉默抗增殖、抗凋亡、抗血管生成和DNA修復等基因的活性致使其正常生理功能缺失從而在腫瘤的發生中具有重要的作用。

VEGF在腫瘤的發生、發展中起著重要的作用。一方面能夠迫害腫瘤侵襲的天然屏障，為腫瘤的浸潤和轉移創造條件。另一方面能夠提高血管通透性，刺激血管內皮細胞增加，為毛細血管芽延伸生長提供良好的基質。并且新生血管能夠促進腫瘤發生、浸潤、轉移，而MVD則是直接反應新生微淋巴管和微血管的活躍程度[7]。同時MDM2參與調節細胞增殖和凋亡相關的信號通路，發揮P53非依賴的生物學活性，且與預后不良相關[8]。

MDM2、VEGF、MVD均在腫瘤的多步驟演進中起重要作用，其潛在的理論機制尚不清楚。為進一步探討MDM2與VEGF、MVD之間的關系，選取60例乳腺癌患者進行研究，結果發現，觀察組的MDM2陽性率、MVD陽性率、VEGF陽性率明顯低于對照組。經Spearman秩相關檢驗分析發現，乳腺癌組織中MDM2表達量與MVD、VEGF表達量呈正相關性。分析原因，MDM2是一個功能極其復雜的蛋白，具有轉錄因子活性、可介導蛋白質—蛋白質作用，也能與DNA和RNA作用，能夠調節細胞生長，在調控細胞增殖、凋亡過程中起關鍵作用，而且其高表達與腫瘤侵襲轉移有高度的相關性，參與癌細胞的侵襲和遷移。而腫瘤細胞的生長與血液中營養物質的供應密切相關，而新生淋巴管道和血管無疑為腫瘤細胞的轉移提供了更多途徑，VEGF可刺激血管內皮細胞的增殖，促進腫瘤細胞生長和轉移；MVD能夠增加微淋巴管和微血管的數量，提高應用物質的供應。

綜上所述，乳腺癌組織中MDM2的表達水平與MVD、VEGF表達量密切相關，可作為乳腺癌的診斷標志物。