血清OX40L、Occludin與急性缺血性腦卒中患者病情程度及預后的相關性*

賈建普，張樂國，王麗軒，姬春雪，夏瑞雪，張俊玲

滄州市中心醫院神經內科，河北滄州 061000

急性缺血性腦卒中是腦卒中的最常見類型之一，約占全部腦血管疾病的70%，其由各種原因導致的腦組織血液供應障礙，從而產生缺血缺氧性壞死，進而引起神經功能障礙的臨床綜合征[1]。近年來，隨著人民生活方式改變和人口老齡化的加速，急性缺血性腦卒中的發病率逐年升高，且呈現出年輕化趨勢。OX40配體(OX40L)是腫瘤壞死因子超家族成員之一，主要在抗原呈遞細胞的表面表達，如活化的樹突狀細胞、巨噬細胞、內皮細胞等[2]。動脈粥樣硬化、炎性反應等因素與急性缺血性腦卒中的發病密切相關。研究發現，OX40L是促進動脈粥樣硬化形成的炎性因子，T淋巴細胞表面的OX40/OX40L相互作用可增加動脈粥樣硬化斑塊形成和血栓栓塞的發生風險[3]。閉合蛋白(Occludin)是腦微血管內皮細胞緊密連接蛋白中的特異性蛋白，與血腦屏障的通透性及腦水腫形成密切相關[4]。目前，關于血清OX40L、Occludin與急性缺血性腦卒中病情變化及預后的關系報道較少。因此，本研究通過檢測急性缺血性腦卒中患者的血清OX40L、Occludin表達水平，分析其與患者病情變化及預后的關系，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2020年1月在本院接受治療的135例急性缺血性腦卒中作為觀察組，其中男82例，女53例；年齡36～75歲，平均(61.29±10.17)歲；平均體質量指數(BMI)(24.76±2.13)kg/m2；吸煙史71例、飲酒史65例。納入標準：(1)符合急性缺血性腦卒中的診斷標準[5]，經CT或MRI檢查確診；(2)均在發病時間24 h內入院；(3)首次發病；(4)年齡>18歲；(5)均行重組組織型纖溶酶原激活劑(rt-PA)靜脈溶栓治療；(6)患者家屬均簽署知情同意書。排除標準：(1)惡性腫瘤患者；(2)嚴重的肝腎等功能障礙患者；(3)近6個月內發生腦外傷或出血性腦卒中患者；(4)自身免疫性疾病患者；(5)妊娠及哺乳期婦女；(6)嚴重感染或慢性炎癥患者；(7)嚴重精神疾病，不能配合者。另選取同期本院的體檢健康者100例作為對照組，其中男50例，女50例；年齡30～78歲，平均(60.15±9.64)歲；平均BMI(23.81±1.65)kg/m2；吸煙史56例、飲酒史39例。兩組受試者的年齡、性別、BMI、吸煙史和飲酒史比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已通過本院醫學倫理委員審核。

1.2方法 受試者入院24 h內或體檢時空腹抽取外周靜脈血3 mL，室溫靜置30 min，3 500 r/min離心10 min，離心半徑為10 cm，分離上層血清，置于-80 ℃冰箱保存待測。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清OX40L、Occludin水平，血清OX40L試劑盒由美國R&D公司提供，血清Occludin試劑盒由上海仁捷生物科技有限公司提供。所有操作均嚴格參照儀器及試劑盒說明書操作。

1.3神經功能缺損程度及預后評估 患者入院后24 h內采用美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)評分[6]評估神經功能缺損程度，包括意識水平、指令配合度、眼球活動、視野缺損、面部表情癱瘓程度等11項，總分42分，評分越高提示神經功能缺損越重。并根據NIHSS評分分為輕度組32例(NIHSS評分<5分)、中度組56例(NIHSS評分5～15分)、重度組47例(NIHSS評分>15分)。出院后6個月門診隨訪，根據改良Rankin量表(mRS)評估患者的預后狀況，評分越高提示預后越差[7]。根據mRS評分，將患者分為預后良好組(mRS評分≤2分，93例)和預后不良組(mRS評分>2分，42例)。

2 結 果

2.1觀察組與對照組血清OX40L、Occludin水平比較 觀察組血清OX40L、Occludin水平明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 觀察組與對照組血清OX40L、Occludin水平比較

2.2血清OX40L、Occludin與急性缺血性腦卒中患者病情嚴重程度的關系 急性缺血性腦卒中患者重度組血清OX40L、Occludin水平高于中度組、輕度組，中度組血清OX40L、Occludin水平高于輕度組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。Pearson相關性分析結果顯示，血清OX40L、Occludin分別與NIHSS評分呈正相關(r=0.479、0.358，均P<0.05)。

表2 血清OX40L、Occludin與急性缺血性腦卒中患者病情嚴重程度的關系

2.3急性缺血性腦卒中患者不同預后血清OX40L、Occludin水平比較 急性缺血性腦卒中患者預后不良組血清OX40L、Occludin水平高于預后良好組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 急性缺血性腦卒中患者不同預后血清OX40L、Occludin水平比較

2.4影響急性缺血性腦卒中患者不良預后的危險因素分析 多因素Logistic回歸分析結果顯示，NIHSS評分及血清OX40L、Occludin升高是影響急性缺血性腦卒中患者不良預后的獨立危險因素(P<0.05)，見表4。

表4 影響急性缺血性腦卒中患者不良預后的危險因素分析

2.5血清OX40L、Occludin對急性缺血性腦卒中患者不良預后的預測價值 ROC曲線結果顯示，血清OX40L、Occludin及二者聯合檢測預測急性缺血性腦卒中患者不良預后的AUC分別為0.834、0.800、0.912，見表5、圖1。

表5 血清OX40L、Occludin對急性缺血性腦卒中患者不良預后的預測價值

圖1 血清OX40L、Occludin預測急性缺血性腦卒中患者不良預后的ROC曲線分析

3 討 論

急性缺血性腦卒中是一種常見臨床急癥，其發病機制復雜，病情進展速度快，若不能及時采取有效救治措施可造成偏癱、昏迷甚至死亡，給患者家庭及社會帶來沉重負擔。急性缺血性腦卒中患者具有起病急、病情變化快、致殘率高、死亡率高和復發率高等特點，嚴重威脅著人們的生命安全及生活質量。據報道，急性缺血性腦卒中患者救治后致殘率高達62.4%～78.3%，死亡率為10.0%～15.0%[8]。因此，準確地評估急性缺血性腦卒中患者病情及預后狀態，并及時調整治療方案，對改善患者預后結局有重要臨床意義。

OX40L是一種2型跨膜蛋白，相對分子質量為34×103，可與T淋巴細胞表面OX40相結合，提供T淋巴細胞活化的信號通路，從而促進T淋巴細胞活化，并遷移至炎癥病灶處[9]。而OX40與OX40L之間的協同刺激可通過介導的生化因子(如細胞因子、趨化因子等)表達來破壞內皮細胞的功能；血管壁中活化的內皮細胞可通過誘導黏附分子的分泌上調，來促進循環系統內動脈粥樣硬化的形成過程。同時，OX40/OX40L信號通路也可促進樹突細胞的分化成熟，而活化的樹突細胞可激活T淋巴細胞，使血管內皮細胞受到損傷，并促使炎性細胞因子產生，加重機體炎性反應[10]。WANG等[11]報道，OX40L與心腦血管疾病的動脈粥樣硬化形成密切相關。研究表明，急性腦梗死患者OX40表達明顯升高，OX40表達上調可使CD4效應T淋巴細胞向Treg細胞的分化受阻，導致Treg細胞數量減少和免疫調節功能受損，從而加重缺血腦組織的炎性反應[12]。MAO等[13]研究發現，血清OX40L與超敏C-反應蛋白明顯相關，是腦梗死患者的炎癥生物學標志，且其血清水平變化與腦梗死患者的病情嚴重程度和死亡率密切相關。Occludin是一種緊密連接蛋白，是血腦屏障的關鍵結構成分，并在促進皮膚傷口愈合、誘導肝細胞微絨毛形成和血管生成等方面發揮重要作用[14]。同時，Occludin在維持細胞屏障功能方面也起著重要作用，可參與調控肌動蛋白、維持細胞極性和調控各種信號傳導途徑轉錄[15]。在腦缺血過程中Occludin的改變或減少可導致血腦屏障通透性增加，而保護血腦屏障可降低血清Occludin水平并減少神經功能缺損[16]。既往報道發現，在缺血性腦卒中的早期，血清Occludin水平與血腦屏障損害密切相關，血清Occludin水平可能是評估缺血性腦卒中患者tPA溶栓后癥狀性顱內出血風險的潛在生物標志物[17]。

本研究結果顯示，觀察組血清OX40L、Occludin水平明顯高于對照組，急性缺血性腦卒中患者重度組血清OX40L、Occludin水平高于中度組、輕度組，中度組血清OX40L、Occludin水平高于輕度組，提示OX40L、Occludin可能參與急性缺血性腦卒中的發生、發展。相關性分析結果顯示，血清OX40L、Occludin分別與NIHSS評分呈正相關，提示血清OX40L、Occludin的表達情況與急性缺血性腦卒中患者的神經功能缺損程度有關。LI等[18]報道，急性缺血性腦卒中患者血清Occludin水平明顯升高，并隨著患者神經功能缺損加重逐漸升高，血清Occludin升高是急性缺血性腦卒中患者預后不良的獨立預測因子。急性缺血性腦卒中患者預后不良組血清OX40L、Occludin水平高于預后良好組，表明血清OX40L、Occludin水平變化與急性缺血性腦卒中患者的預后轉歸密切相關。多因素Logistic回歸分析示，NIHSS評分及血清OX40L、Occludin升高是急性缺血性腦卒中患者預后不良的重要危險因素，提示血清OX40L、Occludin水平越高，患者神經功能受損程度越重，進而應警惕患者致殘或致死的發生風險，導致患者預后不良。ROC曲線結果顯示，聯合檢測血清OX40L、Occludin預測急性缺血性腦卒中患者不良預后的AUC為0.912，均高于單項檢測，提示二者聯合檢測對預測急性缺血性腦卒中患者的預后不良有較高評估價值，從而有助于制訂合理的治療方案，來改善預后狀況，與既往報道[13,18]相似。

綜上所述，急性缺血性腦卒中患者血清OX40L、Occludin水平升高，且與患者神經功能缺損程度及預后情況有關，血清OX40L、Occludin可作為急性缺血性腦卒中患者預后評估的參考指標，為其臨床治療提供指導。但是，本研究的局限之處在于樣本數較少，可導致結果存在一定偏倚，今后尚需多中心、大樣本數據進一步研究論證。