血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在冠心病伴頸動脈粥樣硬化患者中的表達及臨床意義*

肖志嬌,王玲玲,郭曉雷,郭曉偉,王鴻章,付 鵬,姚新艷,趙麗娜

邯鄲市中醫院:1.檢驗科；2.老年科，河北邯鄲 056000

冠心病一般是指冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，其中頸動脈粥樣硬化(CAS)與冠心病關系密切，CAS嚴重程度可有效反映冠狀動脈的病變程度，早期檢測CAS有助于早期診斷冠心病及其嚴重程度，進而提出積極的治療方案，在一定程度上有助于改善患者的預后[1-2]。臨床研究顯示，視黃醇結合蛋白4(RBP4)是一種循環性脂肪源性因子，與胰島素抵抗、向心型肥胖等糖脂代謝紊亂疾病密切相關，但與CAS的相關報道較少[3]。內臟脂肪素(visfatin)、受體相互作用蛋白激酶1(RIPK1)分別為新型脂肪因子、程序性壞死中關鍵的蛋白質分子，前者在各種代謝、應激反應、炎性反應中起著關鍵作用，后者參與動脈粥樣硬化。心力衰竭等多種心血管疾病發生、發展[4-5]。但RBP4、visfatin、RIPK1三者聯合在冠心病患者CAS中報道鮮少，故本研究主要通過檢測冠心病患者血清RBP4、visfatin、RIPK1水平變化分析RBP4、visfatin、RIPK1與冠心病伴CAS的關系，并探討可能的作用機制，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年2月至2021年2月于本院就診的163例冠心病患者作為研究對象，其中男81例，女82例；年齡18～80歲，平均(46.55±29.45)歲；病程4～7年，平均(5.23±1.42)年；體質量指數(BMI) 20.68～24.59 kg/m2，平均(21.50±1.86)kg/m2；基礎疾病：高血壓21例，高血脂38例，高血糖42例。根據是否伴CAS分為冠心病組79例和冠心病伴CAS組84例。選取同期72例于本院進行體檢的健康者作為健康組，年齡19～88歲，平均(50.83±32.77)歲。所有研究對象均自愿參與本次研究且其家屬對本次研究均知情并簽署知情同意書。本研究經本院倫理委員會討論通過。

納入標準：(1)冠心病組符合《穩定性冠心病診斷與治療指南》[6]中冠心病診斷標準；(2)入組前3個月未接受降脂藥治療且無降脂藥服藥史；(3)健康組無心血管疾病，身體健康。

排除標準：(1)主動脈弓及以上CT血管造影(CTA)顯示腦血管動脈瘤、動靜脈畸形、夾層、動脈炎及煙霧病者；(2)伴有出血性疾病者；(3)患有心力衰竭、嚴重心律失常者。

1.2方法

1.2.1標本采集 在所有研究對象入組后次日清晨抽取3 mL空腹8～12 h靜脈血，以3 000 r/min離心10 min，將上層血清儲存于1.5 mL PE管，-80 ℃冰箱保存備用，以便后續實驗檢測血清RBP4、visfatin、RIPK1水平。

1.2.2血清RBP4、visfatin、RIPK1水平檢測方法 采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清RBP4、visfatin、RIPK1水平，實驗步驟：制作標準品，稀釋樣品；在反應孔中加入以稀釋的標準品100 μL/孔，在35 ℃、溫育2 h；將反應板洗滌3次后，加入抗體工作液100 μL/孔，放于35 ℃、濕育45 min；將100 μL/孔TMB溶液加入至反應孔并放置于35 ℃下反應45 min后，加入終止液以終止反應，采用酶標儀檢測上述指標水平(顏色反應深淺與上述指標呈正比)。RBP4、visfatin酶聯免疫試劑盒購自上海邦景實業有限公司，貨號：BJ-0615R、BJ-0555R；RIPK1酶聯免疫試劑盒購自無錫云萃生物科技有限公司，貨號：YRX102846H。

1.2.3冠心病伴CAS嚴重程度 采用Gensini評分[7]評估冠心病伴CAS嚴重程度，輕度(Gensini評分<20分)、中度(20分≤Gensini評分<40分)、重度(Gensini評分≥40分)。

2 結 果

2.1血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在各組中表達情況比較 如表1所示，冠心病伴CAS組、冠心病組血清RBP4、visfatin、RIPK1水平均高于健康組，差異有統計學意義(P<0.05)；冠心病伴CAS組血清RBP4、visfatin、RIPK1水平高于冠心病組，差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在各組中表達情況比較

2.2血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在不同嚴重程度冠心病伴CAS中比較 如表2、圖1所示，血清RBP4、visfatin、RIPK1水平隨著疾病程度加重而升高，重度、中度冠心病伴CAS患者血清RBP4、visfatin、RIPK1水平明顯高于輕度冠心病伴CAS患者，差異有統計學意義(P<0.05)；重度冠心病伴CAS患者血清RBP4、visfatin、RIPK1水平高于中度冠心病伴CAS患者，差異有統計學意義(P<0.05)。

表2 血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在不同嚴重程度冠心病伴CAS中比較

2.4Gensini評分、RBP4、visfatin、RIPK1的相關性分析 Pearson相關性分析顯示，RBP4、Gensini評分呈正相關(r=0.429，P=0.001)；RBP4、Gensini評分呈正相關(r=0.486，P=0.001)；visfatin、Gensini評分呈正相關(r=0.630，P=0.001)。Pearson相關性分析顯示，RBP4、visfatin之間呈正相關(r=0.471，P=0.001)；RBP4、RIPK1之間呈正相關(r=0.449，P=0.012)；visfatin、RIPK1之間呈正相關(r=0.481，P=0.001)。見圖1、2。

圖1 血清RBP4、visfatin、RIPK1水平與Gensini評分相關性分析圖

圖2 RBP4、visfatin、RIPK1之間相關性分析圖

3 討 論

有研究顯示，RBP4水平隨冠狀動脈病變程度、冠狀動脈病變支數增加逐漸升高，且與冠狀動脈病變范圍、狹窄程度呈正相關[8-10]；visfatin具有廣泛的內分泌和心血管系統活性，在動脈粥樣硬化發病過程中起著一定作用；RIPK1是程序性壞死因子中關鍵蛋白質分子之一，可通過激活RIPK1/RIPK3/MLKL通路，導致程序性壞死發生且參與動脈粥樣硬化的發生。冠狀動脈內硬化是全身動脈硬化的局部表現，頸動脈在動脈硬化病變中是最容易受累的部位，可根據CAS程度變化判斷冠心病的嚴重程度[11-12]。在本文研究中，對冠心病組患者及健康者進行對照研究，結果發現冠心病患者血清RBP4、visfatin、RIPK1水平較高且與CAS程度密切相關。

RBP4是一種脂肪細胞因子，主要參與維生素A的儲存、代謝和轉運，在一定程度上有助于維持視黃醇穩定，既往研究證實，其在冠心病患者血清中呈異常高表達且與炎癥因子水平密切相關[13]。臨床研究證實，RBP4對冠心病的發展具有促進作用，其原因可能為RBP4可誘導磷酸烯醇、丙酮酸激酶的基因表達，減少肝臟和肌肉組織對葡萄糖的利用，引起糖脂代謝紊亂，進而導致冠心病，且其與冠心病患者冠狀動脈病變嚴重程度密切相關[14-15]。目前臨床上鮮見血清RBP4水平與冠心病伴頸動脈粥樣硬化的報道。本研究發現，RBP4水平在冠心病伴CAS患者中顯著高于冠心病患者，且RBP4水平變化與頸動脈粥樣硬化呈正相關，與上述研究基本一致，其原因可能為RBP4主要參與結合、轉運維生素A，維持視黃醇穩定，其可通過影響脂代謝、糖代謝促進動脈粥樣硬化。此外，在本文研究中并未探究RBP4與冠心病患者炎性因子的相關性，存在一定的局限性，有待后續深入研究。

visfatin經臨床證實為一種多效性因子，可作為調節因子參與促炎與免疫調節過程，參與包括動脈粥樣硬化等多種疾病的發展過程[16]。鐘素等[17]研究報道，visfatin在冠心病患者血清中呈異常高表達且與頸動脈粥樣硬化密切相關，與本文研究結果一致。有研究顯示，visfatin水平與冠心病患者氧化應激、頸動脈內-中膜厚度及斑塊面積密切相關，有望成為評估冠心病患者預后的指標之一[18]。在本研究中，血清visfatin水平在冠心病伴CAS患者顯著升高，且與CAS嚴重程度呈正相關，說明降低血清visfatin水平可能發揮抗CAS的作用，其原因可能為冠心病患者動脈粥樣硬化斑塊的泡沫細胞和巨噬細胞中均可發現高表達visfatin，其可通過PPARγ信號轉導通路誘導泡沫細胞形成，還可通過激活NF-κB信號通路在動脈粥樣硬化的形成和斑塊穩定性降低方面發揮關鍵作用；但在本文研究中并未探究血清visfatin水平變化與冠心病患者氧化應激的相關性，以及visfatin水平在冠心病伴CAS中的具體機制尚未明確，存在一定局限性。

臨床研究顯示，RIPK1可參與心肌缺血等多種疾病發生及發展過程，抑制其表達可降低心肌細胞凋亡率、Bax蛋白水平、MDA水平，緩解心肌細胞氧化損傷，可能為心肌缺血再灌注損傷治療的新靶點[19-20]。在肖真等[21]研究中，RIPK1在單支病變、雙支病變及多支病變冠心病患者中表達存在顯著差異，且與病變支數密切相關，對冠心病患者預后的評估具有一定的預測價值。本研究結果顯示，血清RIPK1水平與冠心病伴CAS患者密切相關，且與CAS程度呈正相關，RIPK1與CAS密切相關，是嚴重CAS的獨立危險因素，其原因可能為RIPK1水平升高可通過激活PIPK1-PIPK3-MLKL信號通路，誘導巨噬細胞程序性壞死，進而對冠狀動脈粥樣硬化的發展起促進作用。

綜上所述，本文研究結果顯示，血清RBP4、visfatin、RIPK1水平在冠心病伴CAS患者中異常高表達，且與CAS疾病嚴重程度密切相關，臨床可根據上述指標水平變化，早期診斷冠心病伴CAS，有助于患者積極治療、提高預后。但本研究為單中心研究，病例數偏少，需要多中心、大樣本佐證本文得出結果，為臨床上冠心病伴CAS的早期診斷提供理論支持；此外，本研究未對RBP4、visfatin、RIPK1在冠心病伴CAS中具體機制進行探究，今后還需深入分析其指標具體機制。