一例多病毒混合感染引起犢牛腹瀉的診療

張玲會，楊斌

（1.行唐縣動物衛生監督所玉亭分所，河北 石家莊 050600；2.行唐縣動物衛生監督所余底分所，河北 石家莊 051600）

腹瀉是犢牛最常出現的消化道疾病癥狀，若初生犢牛發生腹瀉不能盡早做出診斷并進行治療，經常導致大批死亡。 近幾年來，隨著河北省奶牛養殖業規模擴大， 犢牛腹瀉發病率也呈逐年上升趨勢，嚴重阻滯犢牛早期的生長發育，死亡率可高達90%， 嚴重影響牛群的擴增及奶牛養殖業的良性發展。 引起犢牛腹瀉的因素錯綜復雜，其中傳染性病毒引起的腹瀉最為嚴重，且多呈混合性感染。 最常見的病原：牛病毒性腹瀉病毒 （Bovine viral diarrhoea virus，BVDV)、牛輪狀病毒（Bovine rotavirus，BRV）、 牛冠狀病毒（Bovine coronavirus，BCV）。 由于三種病原引起的犢牛傳染性腹瀉在河北省地區不斷暴發，而且犢牛腹瀉的臨床癥狀和病理變化有很多相似之處。 腹瀉犢牛大量體液喪失，導致犢牛脫水、酸中毒，甚至引起死亡。 根據該患病犢牛臨床癥狀和實驗室診斷確定病原， 為該場犢牛腹瀉的治療和防控提供了可靠的理論依據。

1 發病情況

駐場獸醫提供腹瀉犢牛的基本情況：10 日齡犢牛出現食欲減退，精神沉郁，消瘦，腹瀉次數增多，排黃棕色水樣糞便，氣味惡臭且便中帶血，混有氣泡，脫水嚴重。 采集患病犢牛的血液、新鮮腹瀉糞便，進行實驗室檢測。

2 臨床診斷

采集樣品時進行問診：犢牛發病日齡、糞便形態、有無集中發病、是否注射疫苗、飼養管理、環境因素等。 結合臨床癥狀，進行初步診斷。 血常規檢查見表1，多項指標出現異常，需要結合實驗室診斷進一步確診。

表1 全血常規檢查結果

3 實驗室診斷

根據GenBank 中公布參考株序列， 分別設計了3 對特異性引物擴增BVDV E2 基因、BRV VP6 基因、BCV N 基因。 引物由北京生工生物工程有限公司合成，引物序列，如表2 所示。

表2 PCR 引物序列

按照病毒基因組RNA 提取試劑盒說明書提取病毒核酸， 將提取的核酸產物通過反轉錄試劑盒進行反轉錄， 獲得cDNA，-20℃保存備用。

分別以BVDV、BRV、BCV 基因組cDNA 為模板，用相應引物進行PCR 擴增。 多重PCR 的最佳反應總體系為25 微升：2×EsTaqMasterMix 10 微升， 3 種病毒cDNA 各1.0 微升，3 對上下游引物各1.0 微升，ddH2O 6.0 微升。 反應程序為：94℃5 分鐘；94℃30 秒；55℃30 秒；72℃30 秒；72℃7 分 鐘終延伸； 共35 個循環。由圖可知，擴增出的目的片段大小分別為 295 bp、146 bp、125 bp， 與預期結果一致。

圖 多重PCR 檢測結果

4 治療

目前對于犢牛病毒性腹瀉無特效的治療方法。 結合診斷結果， 可采用消化道收斂藥、 止血藥等靜脈輸入電解質溶液，以消炎止瀉止血， 防止繼發感染。 加強患病犢牛護理， 增強其抵抗力， 促使患病牛盡早康復。

5 小結與分析

犢牛腹瀉在河北省部分地區非常普遍， 給奶牛業的發展帶來極大影響。 由于BVDV、BRV、BCV 混合感染后出現相似的臨床癥狀，病因復雜，對其進行診斷較困難。因此，根據其病原學特征、臨床癥狀、病理變化，只能做出初步診斷，如進一步確診還需要通過實驗室檢測。 PCR 技術普遍應用于臨床，可在短時間內對感染的病原進行檢測、確診。 這項技術為犢牛腹瀉早期診斷、 預防治療提供了簡單快捷的方法。 根據臨床癥狀觀察和實驗室診斷相結合對該病例進行診斷。 據畜主描述及對該場了解， 排除了環境和飼養的非感染性因素， 臨床檢查和實驗室檢測結果確認該腹瀉犢牛致病病原是由多種病毒混合感染引起。由于引起犢牛腹瀉的多因素性質，使得養牛業在群體管理、飼養和營養、生物藥物方面取得了很大進展。犢牛腹瀉的預防和控制還應充分考慮疾病復雜性， 如環境因素、傳染性病原體，混合病因、飼養管理等。減少腹瀉發生主要采用防治結合的原則，血清制品或疫苗是防制犢牛發生腹瀉的主要措施；治療犢牛腹瀉應采取標本兼治，不僅對因與對癥雙管齊下，還要改善犢牛飼養環境、加強管理。

減少犢牛腹瀉主要防控措施：

一是堅持自繁自養，嚴格控制引進外來品種，做好奶牛產犢前后的管理和護理工作，通過有計劃繁育，初產母牛優先產仔，以減少對病原體的接觸， 避免接觸較易受病原體影響的新生犢牛。

二是通過縮短產犢季節，調整配種方案，減少病原體污染環境， 新生犢牛做好冬季防寒保暖措施，及早哺喂初乳。

三是保持清潔區域 （或無致病性區域），根據動物的產犢日期將動物分組， 上一個產犢后的產犢區域應徹底消毒，保持清潔。 新生犢牛應單圈飼養和管理，避免相互之間舐癖，以減少傳染性疾病的傳播。